亲和层析实验：常规方法（一）
一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。亲和介质可以是商品化的, 或通过适当的化学作用将配基吸附在固相载体上(详见本章第4节)。下文将详细讨论如何选择合适的亲和介质（GEHealthcare,2007;GustavssonandLarsson，2006;Zachariou，2007), 并对一些需要重点考虑的因素进行总结。1.固相载体材料的基本特征介质颗粒及孔隙应大小一致，且具有良好的流动性能。介质的表面积与孔隙呈负相关，这直接影响固定化配基数量，继而影响载量。孔隙与排阻限制相关，即一定尺寸范围或大小(分子质量)的蛋白质不能进入孔隙。大孔不受排阻限制作用的影响，允许大分......阅读全文
亲和层析实验：常规方法（一）
一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。亲和介质
亲和层析实验：常规方法
实验步骤一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。
亲和层析实验：常规方法
实验步骤 一、亲和介质的选择 亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过
亲和层析实验：常规方法（三）
6.仿生配基大部分的亲和层析配基是天然存在的，其优点在于具有高度选择性和强结合能力，但也存在某些缺点。这种配基稳定性低，需要进行纯化，使用过程中批间差异大，易被其他生物分子污染，对灭菌方法敏感，并且成本高。为了克服这些局限性，加速亲和层析在治疗性蛋白质纯化中的应用, 仿生型配基 (biomime
亲和层析实验：常规方法（二）
二、配基的选择选择合适的配基，需要对配基和靶分子之间的天然相互作用有一定的认知及理解。靶分子与配基的相互作用必须是特异性结合，并且在不同的结合和洗脱条件下均应该稳定。此外，制订亲和纯化的方案时，需着重考虑能否购买到商品化配基，还是需要从头研制配基和介质。后者的成功在很大程度上取决于对蛋白质结构和相互
亲和层析实验：常规方法（四）
2.配基吸附对于多肽、蛋白质或核酸，通常采用的共价吸附是, 通过胺反应将配基上的氨基吸附在树脂表面。溴化氰活化表面与伯胺发生反应形成亚胺碳酸盐是最常见的胺反应吸附。最典型的伯胺是赖氨酸侧链（Hermanson,1992;PorathetaU1%7)(详见第 28 章）。这种活化形式的优点在于可以使用
亲和层析实验技术方法
INTRODUCTIONThis protocol describes a method for removing antibodies that react with bacterially encoded proteins by passing a crude preparation of im
常规动物实验模型制作（复制）方法（一）
一、肿瘤动物模型的建立将对数生长的肿瘤细胞收集 ， 用无血清基质 10.0ml， 于 1500 转/ 分， 离心3min， 连续洗 3 次， 最后用无血清基质混匀， 用血球计数器计算肿瘤细胞数量( 平均 5 个中方格的细胞计数×104即是肿瘤数/ 毫升) 。 计算完肿瘤细胞总数， 再将 肿瘤细胞密度
亲和层析实验
可溶性抗原或膜结合抗原的分离 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
亲和层析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 TrisTSA裂解缓冲液脱氧胆酸钠洗涤缓冲液三乙醇氨缓冲液仪器、耗材 层析柱离心管离心机实验步骤 1. 准备一支活化后被淬灭的Sepharose预柱（5 ml 柱床）和一支Ab-Spharose免疫亲和层析柱，并将它们串联起来。2. 以冰冷TSA溶液重悬50 g 细
实验动物编号的常规方法
常用的标记法有染色、耳缘剪孔、烙印、号牌等方法。（一）颜料涂染这种标记方法在实验室最常使用，也很方便。经常应用的涂染化学药品有：①、涂染红色：0.5%中性红或品红溶液。 ②、涂染黄色：3～5%苦味酸溶液。 ③、黑色：煤焦油的酒精溶液。 ④、涂染咖啡色：2%硝酸银溶液。标记时用毛笔或棉签蘸取上述
实验动物编号的常规方法
常用的标记法有染色、耳缘剪孔、烙印、号牌等方法。（一）颜料涂染这种标记方法在实验室最常使用，也很方便。经常应用的涂染化学药品有：①、涂染红色：0.5%中性红或品红溶液。 ②、涂染黄色：3～5%苦味酸溶液。 ③、黑色：煤焦油的酒精溶液。 ④、涂染咖啡色：2%硝酸银溶液。标记时用毛笔或棉签蘸取上述
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 饱和 AMS 沉淀物 偶联缓冲液
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒免疫亲和介质溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见下文)溴
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见
DNA片段的回收实验——常规方法
实验材料NA片段试剂、试剂盒纯化试剂盒异丙醇仪器、耗材离心机电泳仪电泳槽取液器微量真空装置抽滤装置实验步骤1. PAGE电泳，如EB染色的则在紫外灯下切下目的片断，如龈染或其他非放染色的则在关下切下目的片断。2. 用少量脱缓冲液I将目的片断胶条洗至一Eppendorf管中，用玻棒将凝胶捣碎，用1
亲和层析(affinity－chromatography)实验方法：溴化氰活化
亲和层析的实验操作和一般柱层析类似，都包括：装柱、上样、洗脱、样品收集、结果处理等步骤。溴化氰活化琼脂糖用于配体固相化是实验室亲和层析最常用的技术之一，该方法简便廉价，并广泛应用于蛋白质、核酸、凝集素等。下面以此为例介绍亲和层析的实验方法：试剂与配制1.Sepharose 4B2.CNBr（剧毒）3
亲和层析的操作实验
亲和层析的操作实验 试剂、试剂盒 非特异性竞争 DNA 液氮 缓冲液 Z
亲和层析的操作实验
试剂、试剂盒非特异性竞争 DNA液氮缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保存缓冲液仪器、耗材EconoCoIumn 柱实验步骤材料与设备EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特异性竞争 DNA液氮试剂缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保存缓冲液(
亲和层析的操作实验
试剂、试剂盒 非特异性竞争 DNA液氮缓冲液 Z缓冲液 Ze 柱再生缓冲液 柱保存缓冲液仪器、耗材 EconoCoIumn 柱实验步骤 材料与设备EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特异性竞争 DNA液氮试剂缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保
常规动物实验模型制作（复制）方法（二）
四、呼吸系统疾病动物模型复制1、慢性支气管肺炎模型 常选用大鼠、豚鼠或猴吸入刺激性气体（如二氧化硫、氯、氨水、烟雾等）复制人类慢性气管炎。现发现猪粘膜下腺体与人类相似，且经常发生气管炎及肺炎，故认为是复制人类慢性气管炎较合适的动物。用去甲肾上腺素可以引起与人类相似的气管腺体肥大。2、肺气肿模型
常规动物实验模型制作（复制）方法（三）
六、Alzhermer病的动物模型SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥钠(35-40mg/kg体重)腹腔麻醉动物后，固定在脑立体定位仪上(参照大鼠全脑立体定位图谱)，以前囟为零点，选出进刀坐标：前后坐标(AP)1.8mm，中线旁开(L)坐标1.0mm，腹侧坐标(v)4. 0mm。首先用牙科钻在上
金属螯合亲和层析实验
天然MCAC纯化带组氨酸尾的可溶性融合蛋白 变性条件下用MCAC纯化带组氨酸尾的不溶性融合蛋白 实验材料 蛋白质
胰岛素亲和层析实验
试剂、试剂盒部分纯化的胰岛素受体NaCl胰岛素琼脂糖溶液 F溶液 G溶液 H仪器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 浓缩器银染试剂盒实验步骤材料与设备部分纯化的胰岛素受体，得自 WGA-琼脂糖柱层析（见本单元实验 3)NaCl(5mol/L)胰岛素琼脂糖（~2 ml 预装胶）（SigmaC
胰岛素亲和层析实验
胰岛素亲和层析实验 试剂、试剂盒 部分纯化的胰岛素受体 NaCl 胰岛素琼脂糖
金属螯合亲和层析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 IPTGNiSO4蛋白酶抑制剂MCAC-EDTATriton仪器、耗材 层析柱转子实验步骤 1. 接种含以pET载体表达带组氨酸尾融合蛋白的大肠扦菌BL21（DE3）pLyaS菌株于10 ml M9ZB/氨苄青霉素/氯霉素培养基。于37℃摇荡培养过夜。2. 转接1
实验室安全常规燃烧的扑救方法
1. 在可燃液体燃着时,应立即拿开着火区域内的一切可燃物质,关闭通风器,防止扩大燃烧。若着火面积较小,可用抹布、湿布、铁片或沙土覆盖,隔绝空气使之熄灭。但覆盖时要轻,避免碰坏或打翻盛有易燃溶剂的玻璃器皿,导致更多的溶剂流出而再着火。2.酒精及其他可溶于水的液体着火时,不可用水灭火,可采用抗溶性泡沫、
金属螯合亲和层析实验（二）
实验材料蛋白质试剂、试剂盒GuMCAC-EDTA缓冲液盐酸胍仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 制备表达带组氨酸尾的融合蛋白的大肠杆菌菌体沉淀。2. 准备NTA介质层析柱，但柱子最后以GuMCAC-0缓冲液洗涤.3. 在冰浴中冻融菌体沉淀。加5 ml GuMCAC-0缓冲液，用吸管抽吸重悬，超声
DNA亲和层析的技术方法
DNA亲和层析是利用亲和层析的原理与技术分离能与特定DNA序列相互作用的技术方法。总的过程包括两步，即：一、将某一类细胞中所有的蛋白质过含有该类细胞各种片段的DNA层析柱，用低浓度盐溶液洗去不与DNA作用的绝大多数蛋白，用中浓度盐溶液洗脱大部分与能DNA相互作用的蛋白。二、将第一步得到的能与DNA相
亲和层析的一般过程
亲和色谱分离的通常是混合在溶液中的物质，比如细胞内容物、培养基或血浆等。待分离的分子在通过色谱柱时被固定相或介质上的基团捕获，而溶液中其他的物质可以顺利通过色谱柱。然后把固态的基质取出后洗脱，目标分子即刻被洗脱下来。如果分离的目的是去除溶液中某种分子，那么只要分子能与介质结合即可，可以不必进行洗脱，