胰岛素亲和层析实验
试剂、试剂盒部分纯化的胰岛素受体NaCl胰岛素琼脂糖溶液 F溶液 G溶液 H仪器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 浓缩器银染试剂盒实验步骤材料与设备部分纯化的胰岛素受体，得自 WGA-琼脂糖柱层析（见本单元实验 3)NaCl(5mol/L)胰岛素琼脂糖（~2 ml 预装胶）（SigmaChemicalCo-)一次性小型塑料柱（Bio-Rad Laboratories)CentriconTM 浓缩器（Amicon，Inc.)银染试剂盒（Bio-Rad Laboratories 161-0449)试剂溶液 F溶液 G溶液 H(配方，见 试剂的配制，pp.234~240)操作程序1) 加 0.75 ml 5mol/L NaCl 于经 WGA-琼脂糖柱部分纯化的胰岛素受体溶液（~3 ml) 中，调溶液 NaCl 浓度为 1mol/L。2) 用 40 ml 溶液 F 冲洗胰岛素琼脂糖，去除可能影响固定化步骤的所有未偶......阅读全文
胰岛素亲和层析实验
试剂、试剂盒部分纯化的胰岛素受体NaCl胰岛素琼脂糖溶液 F溶液 G溶液 H仪器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 浓缩器银染试剂盒实验步骤材料与设备部分纯化的胰岛素受体，得自 WGA-琼脂糖柱层析（见本单元实验 3)NaCl(5mol/L)胰岛素琼脂糖（~2 ml 预装胶）（SigmaC
胰岛素亲和层析实验
胰岛素亲和层析实验 试剂、试剂盒 部分纯化的胰岛素受体 NaCl 胰岛素琼脂糖
亲和层析实验
可溶性抗原或膜结合抗原的分离 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
亲和层析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 TrisTSA裂解缓冲液脱氧胆酸钠洗涤缓冲液三乙醇氨缓冲液仪器、耗材 层析柱离心管离心机实验步骤 1. 准备一支活化后被淬灭的Sepharose预柱（5 ml 柱床）和一支Ab-Spharose免疫亲和层析柱，并将它们串联起来。2. 以冰冷TSA溶液重悬50 g 细
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒免疫亲和介质溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见下文)溴
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 饱和 AMS 沉淀物 偶联缓冲液
亲和层析的操作实验
试剂、试剂盒 非特异性竞争 DNA液氮缓冲液 Z缓冲液 Ze 柱再生缓冲液 柱保存缓冲液仪器、耗材 EconoCoIumn 柱实验步骤 材料与设备EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特异性竞争 DNA液氮试剂缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保
亲和层析的操作实验
试剂、试剂盒非特异性竞争 DNA液氮缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保存缓冲液仪器、耗材EconoCoIumn 柱实验步骤材料与设备EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特异性竞争 DNA液氮试剂缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保存缓冲液(
亲和层析实验技术方法
INTRODUCTIONThis protocol describes a method for removing antibodies that react with bacterially encoded proteins by passing a crude preparation of im
亲和层析的操作实验
亲和层析的操作实验 试剂、试剂盒 非特异性竞争 DNA 液氮 缓冲液 Z
亲和层析实验：常规方法
实验步骤一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。
亲和层析实验：常规方法
实验步骤 一、亲和介质的选择 亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过
金属螯合亲和层析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 IPTGNiSO4蛋白酶抑制剂MCAC-EDTATriton仪器、耗材 层析柱转子实验步骤 1. 接种含以pET载体表达带组氨酸尾融合蛋白的大肠扦菌BL21（DE3）pLyaS菌株于10 ml M9ZB/氨苄青霉素/氯霉素培养基。于37℃摇荡培养过夜。2. 转接1
亲和层析实验：常规方法（三）
6.仿生配基大部分的亲和层析配基是天然存在的，其优点在于具有高度选择性和强结合能力，但也存在某些缺点。这种配基稳定性低，需要进行纯化，使用过程中批间差异大，易被其他生物分子污染，对灭菌方法敏感，并且成本高。为了克服这些局限性，加速亲和层析在治疗性蛋白质纯化中的应用, 仿生型配基 (biomime
金属螯合亲和层析实验
天然MCAC纯化带组氨酸尾的可溶性融合蛋白 变性条件下用MCAC纯化带组氨酸尾的不溶性融合蛋白 实验材料 蛋白质
亲和层析实验：常规方法（一）
一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。亲和介质
亲和层析实验：常规方法（四）
2.配基吸附对于多肽、蛋白质或核酸，通常采用的共价吸附是, 通过胺反应将配基上的氨基吸附在树脂表面。溴化氰活化表面与伯胺发生反应形成亚胺碳酸盐是最常见的胺反应吸附。最典型的伯胺是赖氨酸侧链（Hermanson,1992;PorathetaU1%7)(详见第 28 章）。这种活化形式的优点在于可以使用
亲和层析实验：常规方法（二）
二、配基的选择选择合适的配基，需要对配基和靶分子之间的天然相互作用有一定的认知及理解。靶分子与配基的相互作用必须是特异性结合，并且在不同的结合和洗脱条件下均应该稳定。此外，制订亲和纯化的方案时，需着重考虑能否购买到商品化配基，还是需要从头研制配基和介质。后者的成功在很大程度上取决于对蛋白质结构和相互
胰岛素测定实验
实验材料 胰岛素标准品125 I－胰岛素试剂、试剂盒 抗血清第二抗体PBS正常兔血清仪器、耗材 计数仪试管加样器离心机实验步骤 一、材料及试剂 1. 胰岛素标准品(不同浓度的) 2、125 I－胰岛素 3、抗血清 4、第二抗体 5、分析试剂 为0.05 mol/L pH7.4 PBS液＋1%正常
金属螯合亲和层析实验（二）
实验材料蛋白质试剂、试剂盒GuMCAC-EDTA缓冲液盐酸胍仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 制备表达带组氨酸尾的融合蛋白的大肠杆菌菌体沉淀。2. 准备NTA介质层析柱，但柱子最后以GuMCAC-0缓冲液洗涤.3. 在冰浴中冻融菌体沉淀。加5 ml GuMCAC-0缓冲液，用吸管抽吸重悬，超声
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验_DNA亲和层析法
实验材料制备性的DNA亲和层析树脂试剂、试剂盒缓冲液Z或其他柱缓冲液（如缓冲液Ze或TM)配制时含不同的KCl浓度（从缓冲液 Z 0.1 mol L KCl 至缓冲液 Z 1 mol L KCl对缓冲液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分纯化的蛋白质组分非特异性的竞争DNA柱再生缓冲液柱储存缓
亲和层析法去除交叉反应性抗体实验
本节介绍一种利用结合细菌蛋白质的基质去除粗制免疫球蛋白中与细菌编码蛋白质发生反应成分的方法（de Wet et al.1984)。该方法也适用于利用培养的细胞或组织抽提物去除交叉反应抗体。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒缓冲液和
亲和层析法去除交叉反应性抗体实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液细胞裂解缓冲液NaOHTris-缓冲盐溶液TBSTriton X-100 溶菌酶胰 DNA 酶 I制备用于文库筛选的抗体大肠杆菌培养液仪器、耗材 离心和转子亲和层析柱溴化氢活化的 Sepharose 4B实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的组分请见附录 12将贮
溶解受体的凝集素亲和层析实验
试剂、试剂盒 麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖溶解的胰岛素受体牛血清白蛋白[125I] 胰岛素（受体级）猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 D溶液 E结合缓冲液仪器、耗材 一次性小型塑料柱实验步骤 材料与设备麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖（~2.5 ml 沉积的微球）（Vector Laborat
溶解受体的凝集素亲和层析实验
本实验介绍关于溶解受体的凝集素亲和层析过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖溶解的胰岛素受体牛血清白蛋白[125I] 胰岛素（受体级）猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 D溶液 E结合缓冲液仪器、耗材一次性小型塑料柱实验步骤材料与设
亲和层析法去除交叉反应性抗体实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 细胞裂解缓冲液 NaOH Tris-缓冲盐溶液 TBS Triton X-100 溶菌酶
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
步骤一 偶联寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步骤二 核酸亲和层析 实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4
溶解受体的凝集素亲和层析实验
溶解受体的凝集素亲和层析实验 试剂、试剂盒 麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖 溶解的胰岛素受体
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通过它们本身的碱基实现的。从理论上讲，该方法也许干扰最佳结合序列的接近路径，但是这样一个简单的方法一直被广泛地成功应用。偶联效率的定量检测可经 A260 值测定评估，或者更精确地从偶联介质上水解核酸和进行磷酸盐测定。实