免疫亲和层析的原理
简单来说，亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。通常，在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制，例如细胞裂解液，生长培养基或血清。首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中，其中含有某类特定的生物大分子（从DNA到蛋白质，取决于实验需求）。等待一段时间使两相充分混合，随后将洗涤缓冲液倒入色谱柱中。洗涤缓冲液通过破坏非目标生物分子与固定相的较弱结合来去除非目标生物分子。目标生物分子对固定相具有较高的亲和力，因此能够保持与固定相的结合，而不会被洗涤缓冲液冲走。然后将洗脱缓冲液倒入含有剩余目标生物分子的色谱柱中。洗脱缓冲液比洗涤缓冲液，能够从更大程度上减弱靶生物分子与固定相之间的相互作用，从而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱缓冲液和目标分子，称为洗脱液。固定相一般是凝胶基质，常见的有琼脂糖。为了防止目标分子与配体结合过程中的空间干扰或重叠，首先将含有烃链的抑制剂连接到琼脂糖珠（固体支持物）上。......阅读全文
关于溶菌酶的制备方法—亲和层析法介绍
亲和层析法是利用蛋白质和酶的生物学特异性，即蛋白质或酶与其配体之间所具有的专一性亲和力而设计的色谱技术。酶一底物复合物形成之后，在一定的条件下分离复合物便得到纯净的酶。常常使用的吸附剂为几丁质及其衍生物，如：几丁质粉、羧甲基几丁质、几丁质包埋纤维素、脱氨几丁质粉、N-酰化壳聚糖、脱氨再生几丁质凝
蛋白质纯化亲和层析法
若表达蛋白质上含有一段六个His 的片段，而亲和吸附胶上接有镍离子，此蛋白质会特异性地结合到吸着胶体；洗去杂质后可imidazole 洗脱目标蛋白质。（Pharmacia 操作手册， Affinity Chromatography）。仪器设备：亲和层析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Pol
金属螯合亲和层析实验（二）
实验材料蛋白质试剂、试剂盒GuMCAC-EDTA缓冲液盐酸胍仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 制备表达带组氨酸尾的融合蛋白的大肠杆菌菌体沉淀。2. 准备NTA介质层析柱，但柱子最后以GuMCAC-0缓冲液洗涤.3. 在冰浴中冻融菌体沉淀。加5 ml GuMCAC-0缓冲液，用吸管抽吸重悬，超声
常用免疫组织化学方法的原理免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，
常用免疫组织化学方法的原理免疫荧光方法
是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高
彩色免疫金银染色的原理及操作步骤
实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的
酶联免疫法的原理介绍临床检验
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。医学教育|网搜集整理用洗涤的方法使固相载体
免疫浊度法的基本原理
当可溶性抗原与相应抗体在两者比例合适时，抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度，如形成的复合物增加，反应液的浊度随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。按照仪器设计的不同，分为透射比浊仪测定法和散射比浊仪测定法。
酶联免疫检测的方法及原理
（1）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。 （2）夹心法（sandwich assay）:将已知的特异抗体包装在固
彩色免疫金银染色的原理及操作步骤
实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的
免疫荧光试验的实验目的和原理
中文名称免疫荧光试验英文名称immunofluorescence test定 义一种免疫标记技术。用于检测相应抗原或抗体。即用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原进行鉴定或定位。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（
免疫比浊法的基本原理
免疫比浊法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊
时间分辨荧光免疫测定的分析原理
在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光，因此使用传统的发色团进而进行荧光检测的灵敏度就会严重下降。大部分背景荧光信号是短时存在的，因此将长衰减寿命的标记物与时间分辨荧光技术相结合，就可以使瞬时荧光干扰减到最小化。时间分辨荧光分析法（TRFIA）实际上是在荧光分析（FIA）的基础上发展起
免疫浊度法的基本原理
当可溶性抗原与相应抗体在两者比例合适时，抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度，如形成的复合物增加，反应液的浊度随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。 按照仪器设计的不同，分为透射比浊仪测定法和散射比浊仪测定法。
关于酶免疫测定的技术原理介绍
免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物，与抗体或抗原联结，与相应的抗原或抗体作用后，通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量，亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究，即酶免疫组织化学技术。 目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验（ELISA），
酶联免疫吸附试验的原理和分类
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后
放射免疫分析的原理详述（一）
竞争性RIA，又称传统RIA 主要特点：标记的是抗原。其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag （去除）（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。 临床上甲胎蛋白（AFP），癌
酶联免疫法的基本原理
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合
放射免疫分析法的原理
使放射性百标记抗原和未标记抗原（待测物）与不足量的特异性抗体竞争性地结合，反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。用反应式表示为： *Ag为同位素标记的抗原,与未标记的抗原Ag有相同的免疫活性，两者以竞争性的方式与抗体Ab结合，形成度*Ag-Ab或Ag-Ab复合物,在一定反应时间后达到动态
酶联免疫吸附测定的原理简介
1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到
酶联免疫检测的方法及原理
（1）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。（2）夹心法（sandwich assay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（
化学发光免疫分析法的原理
1、直接化学发光，标记物为吖啶酯（雅培）或者abei（新产业）2、酶促化学发光，标记物为碱性磷酸酶（厦门波生）或者辣根过氧化物酶（强生）3、电化学发光，标记物为三联吡啶钌（罗氏）
酶联免疫检测的方法及原理
（1）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。（2）夹心法（sandwich assay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（
免疫组化的基本原理
抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来
化学发光免疫分析法的原理
1、直接化学发光，标记物为吖啶酯（雅培）或者abei（新产业）2、酶促化学发光，标记物为碱性磷酸酶（厦门波生）或者辣根过氧化物酶（强生）3、电化学发光，标记物为三联吡啶钌（罗氏）
破伤风免疫球蛋白的作用原理
破伤风免疫球蛋白为高效价的破伤风抗体，能特异地中和破伤风毒素，起到被动免疫作用。破伤风免疫球蛋白系同种性蛋白，在体内维持其有效浓度的时间可达 3-4 周。而且能与血液中的破伤风毒素可以最大限度地结合。可重复使用不会对机体增加敏感性，破坏血液中免疫球蛋白的存在。因此，对预防和治疗破伤风是有效的。
免疫金制备的原理和要点有哪些？
（一）制备原理：蛋白质被吸附到胶体金颗粒表面而结合的过程。 （二）技术要点 1.胶体金溶液的pH：原则上可选择待标记蛋白质等电点，也可略为偏碱。 2.蛋白质最适标记量 （三）注意事项 多种蛋白质、葡聚糖、PEG2000、明胶等均为良好的高分子稳定剂，PEG和BSA是最常用的稳定剂。稳定
简述荧光免疫分析的基本原理
作为免疫分析法的一种，FIA同样存在两种模式，即竞争型和夹心型。其中竞争型（以标记抗原的竞争型为例）的测定原理是基于未标记的抗原（Ag）和标记抗原（Ag-L）竞争结合有限的抗体（Ab）而实现的免疫分析法。检测时，Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后，Ag
酶联免疫检测的方法及原理
（1）酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。（2）夹心法（sandwichassay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹
化学发光免疫分析的原理和特点
化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是一种将化学发光技术与免疫反应相结合的分析方法。它的基本原理是：用化学发光剂直接标记抗原或抗体，与待测样本中的抗体或抗原发生免疫反应，形成免疫复合物。然后通过检测化学发光反应产生的光信号强度，来确定待测物质的浓度