彩色免疫金银染色的原理及操作步骤
实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)基本原理是在IGSS法的基础上,根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的,即IGSS后,在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应,将银颗粒氧化成溴化银,后者与彩色显影剂起还原反应,生成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由五色变成有色的染料,并沉积在银颗粒的部位,金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位,不会发生非特异性背景染色。实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水。2. 0.1%胰蛋白酶37℃消化20min,或抗原修复20min(98℃),自然冷却至室温。3. 0.05mol/L(pH7,4)TBS洗3×3min。4. 1%EA(卵蛋白)15min,不洗。5. 适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20......阅读全文
彩色免疫金银染色的原理及操作步骤
实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)基本原理是在IGSS法的基础上,根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的,即IGSS后,在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的
彩色免疫金银染色的原理及操作步骤
实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法(coloured IGSS,CIGSS)基本原理是在IGSS法的基础上,根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的,即IGSS后,在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的
彩色免疫金银法操作指南
1、基本原理 彩色免疫金银法(coloured IGSS, CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS染色方法在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银,后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银,而彩色显影剂本
彩色免疫金银法(CIGSS)操作指南
1、基本原理彩色免疫金银法(coloured IGSS, CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS染色方法在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银,后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产
彩色免疫金银法概述
彩色免疫金银法(colouredIGSS简称CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银,后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由无色变
免疫荧光染色原理及步骤
免疫荧光又称免疫荧光抗体。免疫荧光实验原理是将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少,相对使用标记抗体用量偏大。利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。下面详细介绍免疫荧光染色步骤:1. 滴加 0.01mol/L,pH7.4 的PBS于待
免疫金银染色双PAG法
实验概要本实验介绍了免疫金银染色双PAG法的操作步骤。实验原理免疫金银染色方法敏感、简便、省时、安全可靠,葡萄球菌A蛋白(SPA)金标记四步法是在此基础上发展起来的更为敏感的一种新方法。SPA和许多哺乳类动物IgG具有亲和性,且它们之间的连接不会干扰抗原—抗体的结合。简单的SPA金标记二步法后,第三
过碘酸雪夫染色的原理及操作步骤
实验概要本实验介绍了过碘酸-雪夫(PAS)染色的原理及操作步骤。实验原理胞浆内存在糖原或多糖类物质(如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等)中的乙二醇基(CHOH-CHOH)经过碘酸(periodicacid)氧化,转变为二醛基(CHO-CHO),与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合,形成紫红色染料
免疫金银法(IGSS)操作指南
一、基本原理免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术,常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率,又不影响抗体的活性,因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。二、操作步骤1、脱蜡至0.05mol/L TBS
免疫金银法(IGSS)操作指南
一、基本原理免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术,常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率,又不影响抗体的活性,因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。二、操作步骤1、脱蜡至0.05mol/L TBS
斑点免疫金银染色检测牛结核血清抗体
实验概要本实验应用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)检测了牛结核血清抗体。主要试剂1.抗原牛结核PPD。2.血清待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3.硝酸纤维膜孔径0.45µm。4.氯化金(优质)5.0.2Mol/L PB液6.0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7.硝酸银显影液(现
斑点免疫金银染色检测牛结核血清抗体
实验概要本实验应用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)检测了牛结核血清抗体。主要试剂1.抗原牛结核PPD。2.血清待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3.硝酸纤维膜孔径0.45µm。4.氯化金(优质)5.0.2Mol/L PB液6.0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7.硝酸银显影液(现
人类染色体核型分析实验原理及操作步骤
实验原理核型(karyotype)一词在20世纪20年代首先由苏联学者T. A. Levzky等人提出。核型分析的发展有三项技术起了很重要的促进作用,一是1952年美籍华人细胞学家徐道觉发现的低渗处理技术,使中期细胞的染色体分散良好,便于观察;二是秋水仙素的应用便于富集中期细胞分裂相;三是植
革兰氏染色的操作步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:1)涂片固定。2)草酸铵结晶紫染1分钟。3)蒸馏水冲洗。4)加碘液覆盖涂面染约1分钟。5)水洗,用吸水纸吸去水分。6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分。7)蕃红染色液(稀)染1分钟后,蒸馏水冲洗。干燥,
免疫组化染色具体操作步骤
免疫组化染色具体操作步骤介绍 (以美国ZYMED公司SP试剂盒为例) 1、石蜡切片脱蜡至水。 2、3%H2O2室温孵育5~10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。 4、蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟,(如需采用抗原修复,可在此步后进行)。 5、 5~10%正
免疫组化染色具体操作步骤
免疫组化染色具体操作步骤介绍 (以美国ZYMED公司SP试剂盒为例) 1、石蜡切片脱蜡至水。 2、3%H2O2室温孵育5~10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。 4、蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟,(如需采用抗原修复,可在此步后进行)。 5、 5~10%正常山羊血
免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能
固相载体上的斑点免疫金银染色法
实验概要本实验介绍了硝酸纤维素膜(NC膜)上的斑点免疫金银染色操作流程。实验原理蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜(NC膜)上,与特异性抗体反应后,在滴加(或浸入)胶体金标记的第二抗体,结果在抗原抗体发生金颗粒聚集,形成肉眼可见的粉红色斑点,称为斑点免疫金染色(dot-IGS)。此反
固相载体上的斑点免疫金银染色法
实验概要本实验介绍了硝酸纤维素膜(NC膜)上的斑点免疫金银染色操作流程。实验原理蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜(NC膜)上,与特异性抗体反应后,在滴加(或浸入)胶体金标记的第二抗体,结果在抗原抗体发生金颗粒聚集,形成肉眼可见的粉红色斑点,称为斑点免疫金染色(dot-IGS)。此反
免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能
western-blot-的原理及操作步骤
原理Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附
免疫胶体金银细胞化学染色中固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否适当,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使后续的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能
免疫胶体金银细胞化学染色中固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否适当,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使后续的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能
Western-免疫印迹实验原理和操作步骤
[实验原理]Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶
免疫反应的操作步骤
1、将膜用TBS从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1h。2、将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5ml离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上,四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整;将抗体溶液加到保鲜膜上;从封闭液中取出膜,用滤纸吸去残留液后,将膜蛋白面朝下放于
免疫反应的操作步骤
1、将膜用TBS从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1h。2、将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5ml离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上,四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整;将抗体溶液加到保鲜膜上;从封闭液中取出膜,用滤纸吸去残留液后,将膜蛋白面朝下放于
免疫反应的操作步骤
1、将膜用TBS从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1h。2、将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5ml离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上,四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整;将抗体溶液加到保鲜膜上;从封闭液中取出膜,用滤纸吸去残留液后,将膜蛋白面朝下放于
热解吸仪的原理及操作步骤
热解吸仪广泛应用于大气污染、建筑工程室内空气污染、高纯气体、石油化工、食品等分析测试领域,是利用隋性气体流提取固体和液体介质中的挥发物,并通过加热的方法转移到分析系统,如气相色谱仪或色/质连用仪,将介质中的挥发物组分分析出来的装置,其主要操作步骤为:吸附-脱附-气相色谱分析。 利用物
western-blotting的原理、操作步骤及意义
一。免疫印迹法 免疫印迹法(immunoblotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似,亦被称为Wester
western-blotting的原理、操作步骤及意义
一。免疫印迹法 免疫印迹法(immunoblotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似,亦被称为Wester