关于杆状病毒表达载体的介绍
BEV，即“杆状病毒表达载体”。是“Baculovirus Expression Vector”的缩写，译为“杆状病毒表达载体”，有真核表达载体、原核表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体等多重区分。目前应用较多的是昆虫杆状病毒表达系统，利用病毒携带目的基因在昆虫细胞中表达。这类系统有很多优点，作为当代生物学基础研究中比较热门的领域。......阅读全文
关于杆状病毒表达载体的介绍
BEV，即“杆状病毒表达载体”。是“Baculovirus Expression Vector”的缩写，译为“杆状病毒表达载体”，有真核表达载体、原核表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体等多重区分。目前应用较多的是昆虫杆状病毒表达系统，利用病毒携带目的基因在昆虫细胞中表达。这类系统
概述杆状病毒表达系统的载体和发展
杆状病毒基因组十分庞大，不能直接对其进行操作插入外源基因，因此需要通过中间转染载体而获得重组杆状病毒。经过十多年来研究者们的不断探索，已构建出用于表达不同基因产物的各种转移载体。这些转移载体的共同特征是[3]： ①在一个基础质粒（如pUC系列）中插入一个多角体蛋白基因启动子（或p10基因启动子
关于表达载体的组成介绍
常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。 表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表
关于杆状病毒载体的简介
当前应用最广的杆状病毒表达体系是Autographa california multiply enveloped nuclear polyhedrosisvirus (AcMNPV) 的裂解病毒，简称为杆状病毒(baculovirus)。这类载体的特点是:杆状病毒表达体系全部使用存在于高等真核细
杆状病毒表达系统用于表达多个非融合蛋白的转染载体
这种载体的主要特征是含有2个或2个以上相同的启动子，可表达2条或2条以上多肽链的蛋白。 如Emery和Bishop[8]等构建的pAcVC2转染质粒，含有两个方向相反的多角体基因启动子。重组病毒可同时表达多角体蛋白和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV） N蛋白。Takehara[9]等构
关于慢病毒表达载体的介绍
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中
关于杆状病毒表达系统的简介
杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。 体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统。原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞系统，它操作简便，周期短，收益大，表达产物稳定，但是表达基
关于表达载体的基本信息介绍
生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点
影响杆状病毒表达系统的表达因素介绍
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素： ①该目的基因应不含内含子； ②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列； ③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如K
影响表达杆状病毒表达的因素
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素：①该目的基因应不含内含子；②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列；③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如Kozak 序列）
杆状病毒转染载体的分类
用于表达融合型蛋白的转染质粒是一类早期构建的转染质粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每个载体中，多角体蛋白基因启动子下游ATG启始密码后含有一个单一的BamHⅠ酶切位点，当外源基因和多角体基因的读码框架正确时，就可以获得含1个或几个多角体蛋白N端氨基酸的融合
关于原核表达载体原件SD序列的介绍
1974年Shine和Dalgarno首先发现，在mRNA上有核糖体的结合位点，它们是起始密码子AUG和一段位于AUG上游3～10 bp处的由3～9 bp组成的序列。这段序列富含嘌呤核苷酸，刚好与16S rRNA 3¢；末端的富含嘧啶的序列互补，是核糖体RNA的识别与结合位点。以后将此序
杆状病毒表达系统的应用
杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。
杆状病毒表达系统的应用
用杆状病毒做载体，可高效表达外源基因，到目前为止已有几百个包括动植物、病毒、细菌、真菌的基因在昆虫细胞或幼虫体内得到高效表达。这个表达体系的主要特点是可以获得大量抗原性、免疫原性较好的，与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白。这一特点优于细菌、酵母和哺乳动物细胞表达体系。重组杆状病毒感染昆虫细胞后，可以
杆状病毒表达系统的空斑纯化法介绍
由于在重组病毒中多角体基因被外源基因所取代，因此形成的子代病毒不含有包含体，为包含体阴性病毒。包含体阴性病毒与包含体阳性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形态是不同的。因此，可在光学显微镜下，利用这一特征筛选出含外源基因的重组病毒并加以纯化[12]。这正是目前使用最普遍的有效方法。 1
原核表达载体的构建介绍
1、获得目的基因 （1）通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。 （2）通过RT-PCR方法：提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物
关于原核表达载体的原件终止子的介绍
在一个基因的3¢；末端或是一个操纵子的3'末端往往有特定的核苷酸序列，且具有终止转录功能，这一序列称之为转录终止子，简称终止子(terminator)。转录终止过程包括：RNA聚合酶停在DNA模板上不再前进，RNA的延伸也停止在终止信号上，完成转录的RNA从RNA聚合酶上释放出来
关于原核表达载体的原件启动子的介绍
启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成
概述杆状病毒表达系统的应用
用杆状病毒做载体，可高效表达外源基因，到目前为止已有几百个包括动植物、病毒、细菌、真菌的基因在昆虫细胞或幼虫体内得到高效表达。这个表达体系的主要特点是可以获得大量抗原性、免疫原性较好的，与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白。这一特点优于细菌、酵母和哺乳动物细胞表达体系。重组杆状病毒感染昆虫细胞后，
杆状病毒-昆虫细胞表达系统
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
杆状病毒-昆虫细胞表达系统
实验步骤一、杆状病毒表达载体最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成，其位于病毒基因组多角体座位，替代了非必需的野生型多角体基因。在实验室中
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人
杆状病毒表达系统的影响蛋白质表达的因素
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素：①该目的基因应不含内含子；②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列；③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如Kozak 序列）
概述杆状病毒表达系统的生物特性
杆状病毒（又称多角体病毒或颗粒体病毒）有两类病毒体[1]，芽殖病毒体（buded virion，BV）和多角体源性病毒体（polyhedron derived virion,PDV）。在病毒复制过程中，首先产生BV，BV核壳产生后通过芽生方式从细胞中释放出来，再感染其它细胞，复制后期产生PDV，
杆状病毒-昆虫细胞表达系统3
七、杆状病毒表达载体的新一代昆虫细胞宿主最早的鳞翅类昆虫细胞的遗传转化技术出现在1990年（Jarvisetal.，1990)。那时，研发该技术的初衷在于构建一个稳定转化的昆虫细胞系，它旨在能够持续生产目标重组蛋白而无需使用杆状病毒进行感染。然而, 构建这个生产用细胞系所用的载体及方法也为构建具有新
杆状病毒-昆虫细胞表达系统2
五、亲代杆状病毒基因组的改进就像转移质粒的改进，对亲代杆状病毒基因组的改进也是为了满足各种不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重组杆状病毒载体构建和分离低效率的方法，这也是最初的杆状病毒-昆虫细胞系统存在的主要问题。现在已经知道这个问题的根源在于, 在共转染的昆虫细胞系中，转移质粒和亲代杆状病毒
杆状病毒表达系统用于表达融合型蛋白的转染质粒
是一类早期构建的转染质粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每个载体中，多角体蛋白基因启动子下游ATG启始密码后含有一个单一的BamHⅠ酶切位点，当外源基因和多角体基因的读码框架正确时，就可以获得含1个或几个多角体蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。
siRNA表达载体的构建
siRNA表达载体构建可应用于：（1）作为后基因组时代基因功能分析的有力工具；（2）基因组学、细胞信号传导通路分析；（3）药物靶点筛选、疾病治疗。实验方法原理多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RN
表达载体的应用特点
表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中
siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol