辐照食品单细胞凝胶电泳法国标通过

受中国标准化研究院委托,河北省质量技术监督局于2009年1月8日在石家庄组织召开了《辐照食品的鉴定——单细胞凝胶电泳法(筛选法)》国家标准审定会。审定会专家组由中国检验检疫科学研究院、河北省分子细胞生物学重点实验室、中国疾病预防控制中心、北京市食品安全监控中心、中国标准化研究院、中国药品生物制品检定所、河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心、国家农副产品及果品质量监督检验中心、农业部畜禽产品质量安全监督检验测试中心的各位专家组成。 该标准由国家环保产品质量监督检验中心研究起草。专家组认真听取了标准起草小组关于标准起草过程的介绍,对标准的具体技术内容、文本格式逐条进行了审查,经充分的讨论和质询,提出了修改意见,并形成了如下结论: 1、该标准提交的材料齐全、数据详实可靠,编写格式符合GB/T1.1-2000《标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写规则》的要求。 2、该标准是根据国内外辐照食品检测需要,参照欧盟......阅读全文

单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤

单细胞凝胶电泳(single-cell gel eiectrophoresis,SCGE)又称慧星试验(comet assay)是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B.等人成功地用于检验DNA单链断裂以来,经过不断的改进,已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法,广泛地应用

辐照食品单细胞凝胶电泳法-国标通过

  受中国标准化研究院委托,河北省质量技术监督局于2009年1月8日在石家庄组织召开了《辐照食品的鉴定——单细胞凝胶电泳法(筛选法)》国家标准审定会。审定会专家组由中国检验检疫科学研究院、河北省分子细胞生物学重点实验室、中国疾病预防控制中心、北京市食品安全监控中心、中国标准化研究院、中国药品生物制品

彗星分析法[单细胞凝胶电泳分析法]

治愈癌症(cancer)是一个难题,长期以来研究人员们一直在苦苦探索。我们目前知道,致癌的过程与许多因素有关,但如果我们能阻止其中的任何一个步骤,癌细胞便无法形成。因此,探测致癌物质的技术与癌细胞的及时发现就显得尤其重要!然而截至目前为止,研究人员们仍无法研究出一种简易基因测试法或综合的方法来检测出

彗星分析法(单细胞凝胶电泳分析法)

如果我们能阻止其中的任何一个步骤,癌细胞便无法形成。因此,探测致癌物质的技术与癌细胞的及时发现就显得尤其重要!然而截至目前为止,科学家们仍无法研究出一种简易基因测试法或综合的方法来检测出可能的致癌物。因此,致癌物对DNA的作用仍是癌症研究的一个重要课题。遗传毒物学为一专门研究化学及各类物质对人体遗传

单细胞凝胶电泳介绍

单细胞凝胶电泳(single-cell gel eiectrophoresis,SCGE)又称慧星试验(comet assay)是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B.等人成功地用于检验DNA单链断裂以来,经过不断的改进,已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法,广泛地应用

单细胞凝胶电泳标准操作

  实验原理   在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA

单细胞凝胶电泳标准操作

实验概要本实验介绍了单细胞凝胶电泳标准操作流程。实验原理在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这

单细胞凝胶电泳标准操作

实验原理在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA,其迁移距离

单细胞凝胶电泳标准操作

实验原理在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA,其迁移距离

单细胞凝胶电泳的检测原理

各种因素诱发细胞DNA 损伤后会影响DNA 的高级结构,使其超螺旅松散。这种细胞经过实验中细胞原位裂解、DNA 解链等过程后,电泳时,损伤的DNA从核中溢出,朝阳极方向泳动,产生一个尾状带,未损伤的DNA 部分保持球形,二者共同形成“慧星”。在一定范围内,“慧星”的长度(代表DNA迁移距离)和经荧光

单细胞凝胶电泳的的主要计算指标

典型的DNA 损伤细胞荧光图像象慧星一样头尾分明。为了根据图像评价DNA的损伤程度,人们设计了一系列的计算指标。按其性质,大致可分为以下几类:1 形状指标  这是一类比较粗略的指标。根据细胞荧光图像是否象慧星一样头尾分明将其分为慧星一样细胞和非慧星样细胞,计数一定量细胞中慧星样细胞所占的比例,即慧星

单细胞凝胶电泳的-的操作方法

SCGE操作方法被认为是经典的操作方法。其主要步骤有:将混有待测细胞的琼脂糖铺于载玻片上,凝固后浸入冷溶解液中使细胞裂解,在电泳液中解链后水平电泳,洗涤后用DNA 结合荧光染料染色,在荧光显微镜下观察玻片上细胞的荧光图像,评价DNA 的损伤程度。改变相关的实验条件,可以检测DNA 不同类型的损伤,这

单细胞凝胶电泳技术的试验步骤

试剂及材料:1)PBS2)0.8%正常熔点凝胶(PBS配制)3)0.6%低熔点凝胶(PBS配制)4)毛玻璃片5)盖玻片6)碱性裂解液(2.5mol/L NaCl;100mmol/L Na2EDTA;10mmol/L Tris;1%肌氨酸钠),临用前加10%DNMSO,1%Triton X-1007)

甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA实验_凝胶电泳法

本实验旨在学会甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA 的方法。琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。实验方法原理琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使

核酸凝胶电泳观察法

实验原理:琼脂糖是海藻中提取的线状高聚物,不同浓度的琼脂糖密度不同,一般PCR产物使用2%浓度,0.5Kb-10Kb的DNA使用1%浓度,基因组DNA使用0.3%-0.7%浓度;不同大小的核酸在同一浓度的凝胶中迁移率不同,因为分子越大其受琼脂糖的阻力越大,迁移率与碱基对的对数值成反比;同分子量不同构

单细胞凝胶电泳技术影响因素的分析

单细胞凝胶电泳(SCGE)又称“彗星”法,是一种操作简便、快速、敏感性高的DNA损伤与修复的检测技术。尽管此法无需复杂的实验条件,但在建立过程中可能受诸多因素的影响而难以得到较理想的结果,我们就其主要的影响因素作如下分析。1.琼脂糖凝胶薄板的制备:该实验需要制备两层琼脂糖凝胶薄板,应注意琼脂糖的浓度

关于单细胞凝胶电泳技术的步骤介绍

  1、单细胞凝胶电泳技术— 制备第一层胶:100ml 0.8%正常熔点胶,加盖盖玻片,4℃固化10min;  2、单细胞凝胶电泳技术— 制备第二层胶:轻轻地去除盖玻片,在第一层胶上滴加75ul含1×10000个细胞的0.6%低熔点胶(cell与凝胶比例为1:5),加盖盖玻片,4℃固化10min; 

单细胞凝胶电泳标准操作规程(本室SOP)

原理:在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA,其迁移距离受

关于电泳法—琼脂糖凝胶电泳法的操作介绍

  (1) 琼脂糖凝胶电泳法— 制胶 取琼脂糖约0.2g,加水10ml,置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0)10ml,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得。  (2) 琼脂糖凝

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——Laemmli凝胶电泳法

电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物,研究蛋白质的亚基组成以及证实蛋白质的均一性等,还能纯化出蛋白质用于后续的研究工作。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的孔径,蛋白质的电荷、大小、性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris·ClSDS仪器、耗材电泳仪离心机真空泵实验步骤1.

单细胞凝胶电泳技术的改良方法探讨

  单细胞凝胶电泳技术,又名彗星试验,是近年来发展起来的在单细胞水平上检测DNA损伤的新方法。Singh氏法为经典的彗星试验方法,为国内外常用 ,但步骤较多,且受多因素的影响。本人经过多次试验,发现如在常规彗星试验基础上稍做修改,将可使实验步骤简单,省时,且不会影响试验结果。下面为常规彗星试验和改良

单细胞凝胶电泳分析(single-cell-gel-eletrophoresis,SCGE)

单细胞凝胶电泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)是由Ostling等(1984)首创,后经Singh等(1988)进一步完善并逐渐发展起来的一种快速检测单细胞 DNA损伤的实验方法,适用于多种细胞,能够灵敏地检测DNA断裂,在检测诱变剂、射线等

关于单细胞凝胶电泳技术的实验举例介绍

  Kizilian(1999)改进了一些单细胞凝胶电泳技术试验条件,能明显将细胞调亡和细胞坏死的形象与“彗星”区分。MarkS.Rundell等(2003)报道彗星试验测行的损伤主要是由致突变剂引起的。RichardD.Bowden等(2003)研究出了一种新的分析试验结果的彗星尾图谱,可以更加准

电泳分析法琼脂糖凝胶电泳原理

  琼脂糖凝胶电泳是一种用于生物化学,分子生物学,遗传学和临床化学的凝胶电泳方法,用于分离琼脂糖基质中的大分子(例如DNA,RNA或蛋白质)的混合群体。  琼脂糖是从海藻中提取的天然线性聚合物,当在缓冲液中加热并冷却后,可通过氢键形成凝胶基质。  它们是用于分离中型和大型核酸的最受欢迎的介质,并且具

双向凝胶电泳法在凝胶中蛋白的检测的应用

凝胶染色的目的是使其中的蛋白质能够被观察到。目前还没有通用的染色方法,只能在考虑多种因素如需要的灵敏度、线性范围、方便程度、费用、以及成像设备类型等基础上,结合实际进行选择。有时也可以将蛋白转膜后通过免疫印迹的方法来进行检测。

电泳分析法琼脂糖凝胶电泳的应用

  琼脂糖凝胶电泳是分离蛋白质,DNA或RNA的常规方法。  DNA分子大小的估计  分析PCR产物,例如在分子遗传学诊断或遗传指纹分析中  在进行Southern分析之前,先对限制性基因组DNA进行分离,在进行Northern分析之前,先对RNA进行分离。  琼脂糖凝胶电泳广泛用于评估限制酶消化后

DNA单链断裂检测技术:单细胞凝胶电泳(SCGE)检测原理..

DNA单链断裂检测技术:单细胞凝胶电泳(SCGE)检测原理和操作步放回玻片托盘中待琼脂糖凝固。 (3)裂解: 移开盖玻片,将载玻片缓慢浸入新配制的冰凉的细胞裂解液中,置于4℃冷藏至少1h。细胞可在裂解液中至少保存4周,但时间太长可能会引起缓冲液沉淀。 碱性细胞裂解液配制(每1000ml)

关于单细胞凝胶电泳技术的基本原理介绍

  单细胞凝胶电泳技术的原理是基于有核细胞的DNA分子量很大,在DNA超螺旋结构附着在核基质中,用琼脂糖凝胶将细胞包埋在载玻片上,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜及其他生物膜破坏,使细胞内的RNA、蛋白质及其他成分进入凝胶,继而扩散到裂解液中,惟独核DNA仍保持缠绕的环区附着在剩余的核骨架上,并留在

关于检测DNA原始损伤—单细胞凝胶电泳技术的介绍

  单细胞凝胶电泳分析(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)是Ostling等(1984)首创的,以后经Singh等(1988)进一步完善而逐渐发展起来的一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,因其细胞电泳形状颇似慧星,又称慧星试验(cometassay)。Kizili

关于电泳法—聚丙烯酰胺凝胶电泳法的操作介绍

  (1)聚丙烯酰胺凝胶电泳法— 制胶 取溶液A2ml,溶液B5.4ml,加脲2.9g使溶解,再加水4ml,混匀,抽气赶去溶液中气泡,加0.56%过硫酸铵溶液2ml,混匀制成胶液,立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10cm×0.5cm)中,使  胶层高度达6~7