DNA单链断裂检测技术:单细胞凝胶电泳(SCGE)检测原理..

DNA单链断裂检测技术:单细胞凝胶电泳(SCGE)检测原理和操作步放回玻片托盘中待琼脂糖凝固。 (3)裂解: 移开盖玻片,将载玻片缓慢浸入新配制的冰凉的细胞裂解液中,置于4℃冷藏至少1h。细胞可在裂解液中至少保存4周,但时间太长可能会引起缓冲液沉淀。 碱性细胞裂解液配制(每1000ml)方法: a、2.5mol/L NaCl 146.1g; b、100mmol/L EDTA 37.2g; c、10mmol/L Tris 1.2g; d、用约12g NaOH 调至pH值为10; e、1%肌氨酸钠10g; f、用去离子水定容至890ml,过滤除菌,为储备液,室温保存; g、加新配1%Triton X-100和10%DMSO为应用液,在应用前冷藏30-60min。 中性细胞裂解液配制方法: a、2mol/L NaCl 117g; b、30mmol/L EDTA 12.4g; c、......阅读全文

DNA单链断裂检测技术:单细胞凝胶电泳(SCGE)检测原理..

DNA单链断裂检测技术:单细胞凝胶电泳(SCGE)检测原理和操作步放回玻片托盘中待琼脂糖凝固。 (3)裂解: 移开盖玻片,将载玻片缓慢浸入新配制的冰凉的细胞裂解液中,置于4℃冷藏至少1h。细胞可在裂解液中至少保存4周,但时间太长可能会引起缓冲液沉淀。 碱性细胞裂解液配制(每1000ml)

德研究发现与DNA双链断裂修复相关基因

  德国研究人员在寻找参与修复脱氧核糖核酸(DNA)双链断裂的基因方面获得进展。研究小组在人类细胞中找到61个位点,并发现了此前未知的与DNA双链断裂修复有关的基因。该研究结果将显著加速DNA修复基因的继续搜寻,并带来新的医疗应用可能。相关研究成果发表在6月29日的《公共科学图书馆·生物学》杂志上。

DNA双链断裂检测——变压场凝胶电泳(GFGE)

DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中,通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白,纯化细胞DNA,再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳,结合DNA解旋荧光测定(FADU)法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法: (1)蛋白酶K,

与DNA双链断裂修复相关新基因被发现

  德国研究人员在寻找参与修复脱氧核糖核酸(DNA)双链断裂的基因方面获得进展。研究小组在人类细胞中找到61个位点,并发现了此前未知的与DNA双链断裂修复有关的基因。该研究结果将显著加速DNA修复基因的继续搜寻,并带来新的医疗应用可能。相关研究成果发表在6月29日的《公共科学图书馆·生

我国团队在体外成功重构DNA双链断裂的形成

  北京时间2月19日24点,国际学术期刊Nature 在线发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(原生物化学与细胞生物学研究所)童明汉课题组联合上海交通大学医学院附属新华医院黄旲团队的研究成果,题为“In vitro reconstitution of meiotic DNA double-st

DNA双链断裂是脑活动一部分

  长期以来,科学家认为一种特殊的DNA损伤——DNA双链断裂(DSB)对脑细胞特别有害,是老年病如老年痴呆背后的主要推手。据物理学家组织网3月24日报道,最近,美国加利福尼亚大学旧金山分校格拉斯通研究所科学家发现,DSB实际上是一种常规的、非伤害性脑活动过程的一部分。这一发现有助于理解老年痴呆症背

拟南芥叶绿体基因组DNA双链断裂修复的全新分子机制

  2021年6月16日,清华大学生命学院/清华-北大生命科学联合中心孙前文实验室在Nucleic Acids Research杂志在线发表题为“RNase H1C与单链DNA结合蛋白WHY1/3和重组酶RecA1在拟南芥叶绿体中协作完成DNA损伤修复 (RNaseH1C collaborates

利用BARBEKO高通量筛选,实现非依赖DNA双链断裂基因敲除

  基于CRISPR-Cas的功能性筛选技术为基因功能研究和药物靶点发现提供了有力手段。经典的CRISPR敲除筛选方法依赖于Cas9介导的双链DNA断裂。然而,DNA双链断裂的产生如果修复不及时会造成严重的细胞损伤。因此,Cas9靶向基因组多拷贝位点时极易引起细胞死亡,从而影响基因功能筛选的准确性。

单链互补DNA的定义

中文名称单链互补DNA英文名称single-strand cDNA;sscDNA定  义在逆转录酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

细胞化学词汇单链DNA

中文名称:单链DNA外文名称:single-stranded DNA术语含义:单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA,这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。

单链DNA的结构特点

单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA,这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。

单链DNA探针技术简介

用双链探针杂交检测另一个远缘DNA时,探针序列与被检测序列间有很多错配。而两条探针互补链之间的配对却十分稳定,即形成自身的无效杂交,结果使检测效率下降。采用单链探针则可解决这一问题。单链DNA探针的合成方法主要有下列两种:(1) 以M13载体衍生序列为模板,用Klenow片段合成单链探针; (2)

限制性内切酶消化DNA实验——单酶单DNA样品消化

实验方法原理限制性内切酶种类虽然很多 , 但反应条件都十分相似 。一般需要较纯的底物DNA、Mg2+、Tris-HCl 缓冲液, 通常在37℃保温以酶解DNA 。实验材料限制性内切酶DNA片段试剂、试剂盒TE酶切缓冲液EDTA仪器、耗材恒温水浴锅实验步骤1.  混合下列溶液于一个无菌的微量离心管中(

Nature-|-破解领域难题:BRCA1如何被募到DNA双链断裂位点?

  同源末端重组 (HR) 和非同源末端重组 (NHEJ) 是细胞遭受DNA双链断裂 (DSBs) 之后进行损伤修复的两个重要武器,并分别由各自通路中的关键蛋白BRCA1 (HR) 和53BP1 (NHEJ) 所介导。它们的相同之处在于,BRCA1和53BP1都需要同时结合在H2AK15ub (由泛

细胞化学词汇单链互补DNA

中文名称:单链互补DNA英文名称:single-strand cDNA;sscDNA定  义:在逆转录酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科) 

抗单链DNA抗体的概述

  抗ssDNA是抗DNA抗体中临床意义和重要性都不如抗dsDNA的一种,DNA是一个大分子的复合物,由两条核苷酸链形成的双螺旋结构。加热时碱基间的氢键断裂,DNA变性产生ssDNA。抗ssDNA的反应位点主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶构成的碱基。

首次!中国研究团队成功模拟解析了减数分裂DNA双链断裂形成机制

记者20日获悉,中国的医学专家和分子细胞学专家携手攻克了生殖生物学领域长达数十年的科学难题。他们首次在实验室环境中成功模拟并解析了减数分裂过程中DNA双链断裂(DSB)形成的分子机制,为揭示有性生殖的核心机制提供了革命性研究工具。据悉,上海交通大学医学院附属新华医院黄旲研究员团队与中国科学院分子细胞

单链DNA文库的SELEX筛选实验

实验方法原理 SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外,还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选,而且 DNA 文库具有更好的稳定性,操作也相对简便。实验材料 3' 引物链亲和素磁珠仪器、耗材 电泳仪PCR 仪离心机凝胶成像仪

单链DNA结合蛋白的功能简介

  单链DNA结合蛋白(Single-stranded DNA-binding protein,缩写SSB或SSBP)又称单链结合蛋白,是专门负责与DNA单链区域结合的一种蛋白质,为DNA复制、重组和修复所必需的成分。  防止两条互补单链再次结合为双螺旋,维持单链状态。防止单链区域形成链内二级结构。

单链DNA文库的SELEX筛选实验

            实验方法原理 SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外,还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选,而且 DNA 文库具有更好的稳定性,操作也相对简便。

Science:单分子实时观测DNA复制

  由于DNA长链常常出现单个碱基的缺失或是损伤,因此DNA损伤相当常见,每天每个细胞大约有100万个分子损害。这些损伤可以造成DNA复制过程停滞,从而导致细胞死亡。为了避免它,细胞利用几个信号通路来绕过损伤继续DNA复制过程。近日来自西班牙巴塞罗那大学的研究人员利用一些单分子操纵技术在体外重现了其

单链DNA的功概念和作用

单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA,这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。

单链DNA文库的SELEX筛选实验

单链DNA文库的SELEX筛选实验可用于:(1)体外诊断;(2)体内治疗等。实验方法原理SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外,还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选,而且 DNA 文库具有更好的稳定性,操作也相对简便。实验材料3

分子遗传学词汇单链DNA

中文名称:单链DNA外文名称:single-stranded DNA定义:大部分DNA以双螺旋结构存在,但一经热或碱处理就会变为单链状态。

单头昆虫基因组DNA的提取

实验概要一种简单快速提取单头小型昆虫基因组DNA的方法。主要试剂1. 蛋白酶K[美国Merck公司]2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)[美国Amresco公司]5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDT

单链DNA结合蛋白的基本内容

  单链结合蛋白(SSB,single strand DNA-binding protein):结合于螺旋酶沿复制叉方向向前推进产生的单链区,防止新形成的单链DNA重新配对形成双链DNA或被核酸酶降解的蛋白质。  螺旋酶沿复制叉方向向前推进产生了一段单链区,但是这种单链DNA不会长久存在,会很快重新

单链Oligo合成与DNA组装技术-(一)

合成生物学作为迅速发展的交叉学科,已在生物医药、新材料、诊断、能源和数据储存等领域展现越来越广泛的应用潜力。合成基因组学作为合成生物学的重要研究方向,着重于新生命体系的从头设计与合成,其以Oligo(寡核苷酸链)合成、拼装和转移等核心技术为支撑。新生命体系的从头设计与合成不仅需要合成组成基因组的小片

单链Oligo合成与DNA组装技术-(二)

2.2 Golden Gate组装Golden Gate组装技术是基于非同源重组的代表性技术,其利用Ⅱ型限制性酶 BsaⅠ在识别位点外部切割的特性,设计特异的突出序列同时组装多个片段,且酶切和酶连可以同时进行,原理如图3所示。首先,扩增目的片段,在两端加上BsaⅠ识别序列,同时在识别序列内侧

关于电离辐射引起的DNA损伤的介绍

  电离辐射损伤DNA有直接和间接的效应,直接效应是DNA直接吸收射线能量而遭损伤,间接效应是指DNA周围其他分子(主要是水分子)吸收射线能量产生具有很高反应活性的自由基进而损伤DNA。电离辐射可导致DNA分子的多种变化:  ①碱基变化 主要是由OH-自由基引起,包括DNA链上的碱基氧化修饰、过氧化

电离辐射引起的DNA损伤介绍

电离辐射损伤DNA有直接和间接的效应,直接效应是DNA直接吸收射线能量而遭损伤,间接效应是指DNA周围其他分子(主要是水分子)吸收射线能量产生具有很高反应活性的自由基进而损伤DNA。电离辐射可导致DNA分子的多种变化:①碱基变化 主要是由OH-自由基引起,包括DNA链上的碱基氧化修饰、过氧化物的形成