什么是引物延伸分析?

引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRNA 5′端作图方面具有下述优势:一旦引物被子起始合成,延伸反应大多会进行到RNA模板的5′最末端,产物大小可精确测定。此外,产物长度不会受靶基因内含子分布与大小的影响。......阅读全文

什么是引物延伸分析?

引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN

引物延伸法-RNA-分析

            实验材料 T4 多核苷酸激酶 AMV 反转录酶 酵母 tRNA 试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液

引物延伸法-RNA-分析

实验材料 T4 多核苷酸激酶AMV 反转录酶酵母 tRNA试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液 5X 杂交缓冲溶液 Tris-HCl MgCl2 DTT 放线菌酮 D dNTP RNasin 甲酰胺上样染液 SephadexG-25 NaAc 乙醇 [r-32P]ATP仪器、耗材 水浴 杂交炉 电泳设备

5.6-引物延伸法-RNA-分析

引物延伸法可用于 RNA 的作图和 RNA5'端的定暈。在此方法中,将过量的 5'端标记的单链 RNA 引物与待测的 RNA 杂交,随后用反转录酶延伸该引物,生成句 RNA 模板互补的 cDNA。再在变性条件下通过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定 cDNA 的长度,即可确定 RNA 端的位置,并且 cDNA

引物延伸分析(primer-extension-analysis)

引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN

引物延伸分析(primer-extension-analysis)

引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mR

引物延伸实验

实验材料 RNA试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶dATP醋酸钠乙醇EDTARNaseA苯酚氯仿仪器、耗材 恒温培养箱NAP-5柱-70°C冰箱低温离心机实验步骤 1.  依次加入下列试剂,建立用以标记引物的反应混合液(终体积10 μl)(1)2.5 μl  H2O(2)1 μl  10×T4多核苷酸激

引物延伸实验

            实验材料 RNA 试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶 dATP 醋酸钠 乙醇

引物延伸实验

引物延伸分析用于确定位置和定量特定RNA的5'-端的数量。结束标记的寡核苷酸杂交,RNA和利用中存在的脱氧核苷酸逆转录作为底漆。因此RNA的反转录成cDNA,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。cDNA的长度反映了基地之间的标记引物和RNA的5'-端核苷酸的数量,基因产品的数量是针对性的RN

引物延伸反应

Primer extension analysis is used to determine the location and quantitate the amount of the 5´-end of specific RNAs. An end-labeled oligonucleotide i

引物延伸的概念

中文名称引物延伸英文名称primer extension定  义从与模板(RNA或DNA)结合的引物3′-OH端开始,在核酸聚合酶的作用下,按照碱基配对的原则,逐个连上核苷酸,由5′→3′方向合成与模板互补链的过程。该反应可用于聚合酶链反应、单核苷酸多态性检测等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学

用引物延伸法进行-RNA-的分析

            实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且

用引物延伸法进行-RNA-的分析

引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5' 末端之间的距离相

用引物延伸法进行-RNA-的分析

实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5'

什么是引物?

引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的,一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以氢键形式连接,这样的分子称为引物。引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶

什么是上游引物和下游引物

虽然这个问题很简单,但我怎么发觉挺难回答的......上游引物就是和要扩增基因片断上游序列结合的引物(引物就是单链寡聚核苷酸,基因扩增需要从引物开始),同理,下游引物指与目的基因片断下游序列结合者。具体示意如下:(上下两条长线代表DNA模板)5'-----------------------

什么是特异引物?

 多数情况下,我们要研究的基因序列都能在数据库中找到现成的序列。如果你要得到某一段序列的话,针对这个序列设计引物就行了。这样得到的引物每一个位置上的碱基都是确定的,这样的引物就叫“特异引物”。特异引物由于碱基是确定的,所以由这个序列所计算出的Tm值以及PCR退火温度都是确定的。一般特异引物的退火温度

什么是简并引物?

简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基序列可能性引物的混合物。PCR为了增加特异性,可以参考密码子使用表,根据不同生物的碱基使用偏好,减少简并性。简并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽量选择简并性小的氨基酸,并避免引物3'末端简并。

引物延伸实验问题与解答

1)什么是引物延伸实验?引物延伸实验用于定量mRNA的量,测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端, 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域, 随后用RNA作为模板,用反转录酶延伸引物得到cDNA,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的

什么是锚定引物

锚定引物是在扩未知序列(RACE或genome walking)时,与未知序列一侧结合的引物,基本都是试剂盒里自带的

什么是引物?有什么功能特点?

引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的,一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以氢键形式连接,这样的分子称为引物。引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶

什么是上下游引物

引物(Primer)在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反

什么是上下游引物?

引物(Primer)在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反

什么是上下游引物

引物(Primer)在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链

什么是引物二聚体

1、引物二聚体是引物的3端间相互错配扩增形成的。2、引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现,只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度,降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。

什么是引物二聚体

1、引物二聚体是引物的3端间相互错配扩增形成的。2、引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现,只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度,降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。

什么是引物二聚体,它对PCR反应有什么影响

是在pcr反应中,两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体,这种聚合体出现了,就相当于原本可以扩增的原料链减少了,即会导致扩增的效率降低,所以最好能避免这种物质的出现.

引物是如何合成的?

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是

引物是如何合成的?

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。(1)    去保护:加入Deblocking脱去碱基上5'- OH的保护基团DMT,获得游离的5'- OH;(2)

PCR引物是什么

聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可