引物延伸的概念
中文名称引物延伸英文名称primer extension定 义从与模板(RNA或DNA)结合的引物3′-OH端开始,在核酸聚合酶的作用下,按照碱基配对的原则,逐个连上核苷酸,由5′→3′方向合成与模板互补链的过程。该反应可用于聚合酶链反应、单核苷酸多态性检测等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)......阅读全文
引物延伸的概念
中文名称引物延伸英文名称primer extension定 义从与模板(RNA或DNA)结合的引物3′-OH端开始,在核酸聚合酶的作用下,按照碱基配对的原则,逐个连上核苷酸,由5′→3′方向合成与模板互补链的过程。该反应可用于聚合酶链反应、单核苷酸多态性检测等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学
引物延伸实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶dATP醋酸钠乙醇EDTARNaseA苯酚氯仿仪器、耗材 恒温培养箱NAP-5柱-70°C冰箱低温离心机实验步骤 1. 依次加入下列试剂,建立用以标记引物的反应混合液(终体积10 μl)(1)2.5 μl H2O(2)1 μl 10×T4多核苷酸激
引物延伸反应
Primer extension analysis is used to determine the location and quantitate the amount of the 5´-end of specific RNAs. An end-labeled oligonucleotide i
引物延伸实验
实验材料 RNA 试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶 dATP 醋酸钠 乙醇
引物延伸实验
引物延伸分析用于确定位置和定量特定RNA的5'-端的数量。结束标记的寡核苷酸杂交,RNA和利用中存在的脱氧核苷酸逆转录作为底漆。因此RNA的反转录成cDNA,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。cDNA的长度反映了基地之间的标记引物和RNA的5'-端核苷酸的数量,基因产品的数量是针对性的RN
引物延伸法-RNA-分析
实验材料 T4 多核苷酸激酶 AMV 反转录酶 酵母 tRNA 试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液
引物延伸法-RNA-分析
实验材料 T4 多核苷酸激酶AMV 反转录酶酵母 tRNA试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液 5X 杂交缓冲溶液 Tris-HCl MgCl2 DTT 放线菌酮 D dNTP RNasin 甲酰胺上样染液 SephadexG-25 NaAc 乙醇 [r-32P]ATP仪器、耗材 水浴 杂交炉 电泳设备
什么是引物延伸分析?
引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN
引物延伸实验问题与解答
1)什么是引物延伸实验?引物延伸实验用于定量mRNA的量,测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端, 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域, 随后用RNA作为模板,用反转录酶延伸引物得到cDNA,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的
引物延伸分析(primer-extension-analysis)
引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mR
5.6-引物延伸法-RNA-分析
引物延伸法可用于 RNA 的作图和 RNA5'端的定暈。在此方法中,将过量的 5'端标记的单链 RNA 引物与待测的 RNA 杂交,随后用反转录酶延伸该引物,生成句 RNA 模板互补的 cDNA。再在变性条件下通过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定 cDNA 的长度,即可确定 RNA 端的位置,并且 cDNA
引物延伸分析(primer-extension-analysis)
引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN
用引物延伸法进行-RNA-的分析
实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且
用引物延伸法进行-RNA-的分析
引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5' 末端之间的距离相
用引物延伸法进行-RNA-的分析
实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5'
反向引物的概念
反向引物(下游引物)是沿着正链进行延长的。体外扩增DNA,双螺旋是部分或完全打开的,不存在冈崎片段,也不会一段段延长,理论上正反引物都是不间断延长的,和体内DNA自我复制是有区别的。
简并引物的概念
简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基序列可能性引物的混合物。PCR为了增加特异性,可以参考密码子使用表,根据不同生物的碱基使用偏好,减少简并性。简并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽量选择简并性小的氨基酸,并避免引物3’末端简并。
正向引物的概念
中文名称正向引物英文名称forward primer定 义处于DNA双链上游的引物。如用于测序,则从5′向3′方向读出DNA正链的序列。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
引物修补的概念
中文名称引物修补英文名称primer repair定 义当DNA模板受损时,可根据其损伤情况,以一套或几套引物借助核酸聚合酶的作用合成新的互补核酸链,以修复损伤形成的错误序列的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
巢式引物的概念
中文名称巢式引物英文名称nested primer定 义为巢式聚合酶链反应所设计的引物,第二组引物是在第一组引物扩增得到的产物序列范围内设计的。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
引物步移的概念
中文名称引物步移英文名称primer walking定 义一种长链DNA测序的策略。根据已测出的序列结构设计测序引物,按第一轮测序得出的新序列,再设计引物进行第二轮测序,如此重复,直至获得全序列。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
通用引物的概念和作用
通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配,或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DNA片段,都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序,但是只是“通用”,也不是万能的。
随机引物的概念和用途
随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时,体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板,PCR引物在扩增过程中所需要的特异性通常用此引物合成的cDNA。
序列特异性引物的概念
中文名称序列特异性引物英文名称sequence specific primer;SSP定 义一种测定基因突变的方法。即利用针对点突变的2个等位特异性寡核苷酸(ASO)引物(A、B标记其中之一)与另一共同引物(C)组成引物系统;在引物延伸时,A与B同时竞争靶序列上同一复性位点,扩增反应后,经凝胶电泳
序列特异性引物的概念
中文名称序列特异性引物英文名称sequence specific primer;SSP定 义一种测定基因突变的方法。即利用针对点突变的2个等位特异性寡核苷酸(ASO)引物(A、B标记其中之一)与另一共同引物(C)组成引物系统;在引物延伸时,A与B同时竞争靶序列上同一复性位点,扩增反应后,经凝胶电泳
PCR中正向引物和反向引物的概念和具体作用
正向引物和反向引物是相对的,通常以一个双链DNA(上面的那条链)的上游结合部位称为正向引物,是从左到右的方向,也就是5-3的方向,而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物。其方向是从右到左的,因为下面的链的方面从左到右是3-5,从右到左就是5-3了,PCR的扩增的确是一条引物就可以扩增了。反向引物
使用引物延伸荧光偏振探测法的高通量基因分型实验1
单重 PCR 的引物延伸法实验材料目的基因组DNA试剂、试剂盒10 X PCR 缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶SNP 引物仪器、耗材384孔黑色 PCR 板多管移液器或液体操作工作站384孔 PCR 板封口垫带加热盖的热循环仪FP 读板设备实验步骤展开
使用引物延伸荧光偏振探测法的高通量基因分型实验2
四重 PCR 的引物延伸法实验材料目的基因组DNA试剂、试剂盒10XPCR扩增缓冲液Taq DNA 聚合酶4dNTP 混合液PCR 引物混合液AcydoTerminator混合液仪器、耗材384孔透明 PCR 板和黑色 PCR 板多管移液器或液体操作工作站384孔 PCR 板封口垫带加热盖的热循环
随机引物法(利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记)
实验方法原理 此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983,1984)。 实验材料
基因翻译的延伸
此过程在真核细胞和原核细胞中高度类似,下面只以原核细胞为例进行讨论。涉及到的因子主要有EF·Tu和EF·G,在真核细胞中对应的名称分别是是eEF1和eEF2。A. tRNA的转运和入位(1)非起始AA·tRNA结合EF·Tu·GTP形成一个三元复合物;(2)该三元复合物结合至核糖体P位点,tRNA反