一般的合成的引物在5和3末端有磷酸基团吗？
没有，5'和3'末端均为-OH基。如需要加磷酸基团，订货时需特别注明。......阅读全文
DNA连接酶的常见种类和作用机制
1、T4DNA连接酶T4DNA连接酶是目前应用比较多的病毒基因组编码的DNA连接酶，在基因重组中广泛使用。噬菌体类型较多，目前研究发现T4噬菌体能够合成T4DNA连接酶，并且已经能够从被T4嗜菌体感染的大肠杆菌中提取该酶，此外科学家也已经定位该酶的合成基因，即噬菌体T4的30基因。T4DNA连接酶具
PCR技术是如何合成引物的
目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相邻的核苷酸通过3′→5′磷酸二酯键连接。第一步是将预先连接在固相载体
引物合成的步骤及方法介绍
Oligo DNA的人工化学合成始于50年代初期，1980年，全自动的固相DNA合成仪面市后，使得快速、高效合成Oligo DNA成为可能，这大大地推动了生物工程技术的蓬勃发展。 现在一般都采用β-乙腈亚磷酰胺化学合成Oligo DNA，将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的合成
引物合成的步骤及方法介绍
Oligo DNA的人工化学合成始于50年代初期，1980年，全自动的固相DNA合成仪面市后，使得快速、高效合成Oligo DNA成为可能，这大大地推动了生物工程技术的蓬勃发展。现在一般都采用β-乙腈亚磷酰胺化学合成Oligo DNA，将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的合成时从3'
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上
简述双脱氧核苷酸末端终止法
双脱氧核苷酸末端终止法也称 Sanger法，是常用的方法进行核酸序列分析。其原理是利用四种2’,3‘双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）代替部分脱氧核苷三磷酸（dNP）作底物参与DNA的合成。 ddNTP与普通dNP的不同之处在于其脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基。 ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通
双脱氧核苷酸末端终止法的概念
双脱氧核苷酸末端终止法也称 Sanger法，是常用的方法进行核酸序列分析。其原理是利用四种2’,3‘双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）代替部分脱氧核苷三磷酸（dNP）作底物参与DNA的合成。 ddNTP与普通dNP的不同之处在于其脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基。 ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通过其
双脱氧核苷酸末端终止法
双脱氧核苷酸末端终止法也称 Sanger法，是常用的方法进行核算序列分析。其原理是利用四种2’,3‘双脱氧核苷三磷酸（ddNP）代替部分脱氧核苷三磷酸（dNP）作底物参与DNA的合成。 ddNTP与普通dNP的不同之处在于其脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基。 ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通过其5
关于双脱氧核苷酸末端终止法的介绍
双脱氧核苷酸末端终止法也称 Sanger法，是常用的方法进行核酸序列分析。其原理是利用四种2’,3‘双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）代替部分脱氧核苷三磷酸（dNP）作底物参与DNA的合成。 ddNTP与普通dNP的不同之处在于其脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基。 ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通过其
什么是双脱氧核苷酸末端终止法？
双脱氧核苷酸末端终止法也称 Sanger法，是常用的方法进行核算序列分析。其原理是利用四种2’,3‘双脱氧核苷三磷酸（ddNP）代替部分脱氧核苷三磷酸（dNP）作底物参与DNA的合成。ddNTP与普通dNP的不同之处在于其脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基。 ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通过其5′
为什么修饰引物的产量要比一般引物低，价格要高？
主要因为是修饰单体稳定性较差，偶连时间长，效率低，最后得到的产量自然低于一般的引物。修饰引物通常需要PAGE或HPLC纯化，纯化过程损失大。修饰引物使用的原料是一般引物原料的几百倍，所以产品的价格也高。
实时荧光定量PCR检测方法
聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。目前，PCR成为分子生物学研究必不可少的一部分。实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术，是指在PCR反应
糖原非还原性末端的磷酸解
糖原非还原性末端的磷酸解：糖原磷酸化酶催化糖原的磷酸解作用，使糖原分子从非还原端逐个断开α-1，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子α-1，6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。葡萄糖通过糖原磷酸化酶从糖原上释放。糖原磷酸化酶能将糖原分子表面支链上的葡萄糖分子降解下来。这种酶是由
搞定恒温扩增分子诊断（RPA/RAA）
分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种，今天就回顾RPA/RAA，让大家一文通俗搞定！为了确保大家所认知的基本概念是一致的，请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术，RPA, recombinase polymeras
一文搞定恒温扩增——RPA/RAA
分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种，今天就回顾RPA/RAA，让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问，决定开小灶，包会！哈哈~~为了确保大家所认知的基本概念是一致的，请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术，RP
引物合成如何处理？
切割与脱保护基：将合成好的寡核苷酸链从支持物上化学切割下来。常用新鲜的浓氨水来裂解CPG与初始核苷之间的酯键。断裂下来的寡核苷酸带有自由的3’羟基。纯化：根据所合成寡核苷酸的组成和应用来选定纯化的方法。常用的纯化方法有：C18、OPC、PAGE和HPLC。定量：根据寡核苷酸在260nm处的紫外吸收来
引物延伸实验问题与解答
1)什么是引物延伸实验？引物延伸实验用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域， 随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的
Taqman探针常用的报告基团和猝灭基团是什么
比较常用的是5-FAM +3-TAMRA
引物合成常见问题解析
Q1.引物是如何合成的？ 目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。 (1) 去保护：加入Deblocking脱去碱基上5'- OH的保护基团DMT，获得游离
Sanger法测序原理
利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性
目的基因的获取4
4、cDNA文库的大小 一个cDNA文库要包含99%的mRNA时所需要的克隆数目。 p: 文库包含了完整mRNA的概率（99%） 1/n: 某一种低丰度（不足14份拷贝）mRNA占细胞整个mRNA的比例 N：所需的重组载体数（克隆数） (三)基因组文库与c
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓冲液 RNA 酶 HRNasinSuperScriptII 逆转录酶dNTP 溶液DTTTECoCl2dATP 溶液脱氧核苷酸末端转移酶加尾缓冲液 HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物 poly(A)+RNA 或总 RNA 反转录缓冲液 RNA 酶 H RNasin SuperScriptI
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
这一实验方案分为 3 个阶段。 第 1 阶段：反转录产生 cDNA 模板 ；第 2 阶段：在第一链 cDNA 产物末端加 poly(A) 尾 ；第 3 阶段：扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（二）
二、PCR反应参数1、变性：在第一轮循环前，在94℃下变性5-10min非常重要，它可使模板DNA完全解链，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，这样可减少聚合酶在低温下仍有活性从而延伸非特异性配对的引物与模板复合物所造成的错误。变性不完全，往往使PCR失败，因为未变性完全的DNA
关于基因测序仪的基本原理介绍
目前基因测序仪的工作原理主要基于Sanger发明的双脱氧链末端终止法或Maxam-Gilbert发明的化学降解法。这两种方法在原理上虽然不同，但都是根据在某一固定的位点开始核苷酸链的延伸，随机在某一个特定的碱基处终止，产生以A、T、C、G为末端的四组不同长度的一系列核苷酸链，在变性聚丙烯酰胺凝胶
目的基因分离最常用的方法及原理
1.从生物基因组群体中分离目的基因原核生物基因组较小，基因容易定位，用限制性内切酶将基因组切成若干段后，用带有标记的核酸探针，从中选出目的基因。真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。图10-3-1 限制性内切酶限制性内切酶(restrictive enzyme)是20世纪60年代末在细菌中发
目的基因分离最常用的方法及原理
1.从生物基因组群体中分离目的基因原核生物基因组较小，基因容易定位，用限制性内切酶将基因组切成若干段后，用带有标记的核酸探针，从中选出目的基因。真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。图10-3-1 限制性内切酶限制性内切酶(restrictive enzyme)是20世纪60年代末在细菌中发
测序新技术速览
454技术 样品制备 将基因组打成较短的DNA片段，再将片段与接头相连，以便使其更容易与磁珠结合在一起（一个DNA片段结合于一个磁珠）。将PCR产物包被于“油包水”的乳化剂中，每一滴乳化剂内除PCR产物外，还含有一个结合了一个DNA片段的磁珠，这样，PCR扩增过程就可以在每一滴乳化剂内独立进行，而
基因克隆技术
一、目的基因的获得目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-多聚酶链式