RNA蛋白免疫沉淀技术简介
RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用，但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物，RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同（如复合物不需要固定，RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶，抗体需经RIP实验验证等等）。RIP技术下游结合microarray技术被称为RIP-Chip，帮助我们更高通量地了解癌症以及其它疾病整体水平的RNA变化。......阅读全文
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料 N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒 储存液缓冲液仪器、耗材 蛋白胨培养基蛋白胨平板N-表达质粒组合文库培养板实验步骤 ―、材料与设备1. 通过比较 β-半乳糖苷酶表达
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒储
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验（一）
实验方法原理 噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合，在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白，即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料 载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒 抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。 实验材料 N-表达质粒 E.coi
用RNA的免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋...（一）
用RNA的免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验实验方法原理 RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。实验材料 载体酵母 tRNARQ1 DNA 酶糖原小牛肠碱性磷酸酶T4 DNA 连接酶JMJ09 感受态细菌试剂、试剂盒 PBSNET
用RNA的免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋...（二）
6. 仪器(1) 微型凝胶水平电泳仪。(2) 紫外透射仪。(3) PCR 扩增仪。(4) 高速低温离心机。(5) 低温微型离心机。(6) 台式低温离心机。(7) 旋转真空浓缩仪（Speed-Vac concentrator）。二、实验方法1. 细胞提取物的制备(1) 培养 3~4 瓶 150 cm2
反义技术——RNA干扰（RNA－interference，RNAi）
最近由于RNA干扰（RNA interference，RNAi）的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的（1），是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步，已经有许多这方面的综述发表（2-4）。RNA干扰是由长的双链 RNA
免疫沉淀实验
基本方案 制备抗体Sepharose 偶联物 抗Ig血清免疫沉淀放射性标记抗原 免疫沉淀放射性标记抗原 实验材料
免疫沉淀－(IP)
实验概要免疫沉淀是一种纯化蛋白质的方法。将我们感兴趣的一种蛋白质的抗体与细胞提取液孵育，以使抗体和蛋白质在溶液中结合。然后用protein A/G 耦合的琼脂糖凝胶，从样品中将抗体/抗原复合物提取出来。这种物理方法可将所需蛋白质从样品中分离。然后样品可以通过SDS-PAGE 进行分离并做 Wes
免疫沉淀－(IP)
实验概要免疫沉淀是一种纯化蛋白质的方法。将我们感兴趣的一种蛋白质的抗体与细胞提取液孵育，以使抗体和蛋白质在溶液中结合。然后用protein A/G 耦合的琼脂糖凝胶，从样品中将抗体/抗原复合物提取出来。这种物理方法可将所需蛋白质从样品中分离。然后样品可以通过SDS-PAGE 进行分离并做 Wes
免疫沉淀实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 裂解缓冲液稀释缓冲液SDSTrisTSA仪器、耗材 转子离心机实验步骤 1. 表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后，再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核，然后将所得上清在10000 g 离心1 min。 2. 一次性对上清进
放射免疫沉淀法的技术特点
中文名称放射免疫沉淀法英文名称radioimmunoprecipitation定 义以放射性标记的抗原或抗体进行的免疫沉淀法。能大大提高检测抗原抗体复合体的灵敏度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
环状RNA结合功能蛋白
环状RNA作为研究持续火热的明星分子，不同于对其丰富的表达谱研究，环状RNA功能机制研究还仅仅处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制，部分circRNA可竞争性结合miRNA，解除miRNA对靶基因的抑制作用，上调靶基因的表达。其实，环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白，分别在转录前
关于RNA剪接的简介
大多数脊椎动物基因的编码序列,无论是编码多肽的基因还是编码除mRNA以外的RNA分子的基因,都是由非编码的间隔序列(内含子)分隔为各个外显子部分。这些基因的外显子和内含子都转录在一条初级RNA转录分子中,接下来,此初级RNA转录分子要经过RNA剪接,此过程包括一系列的加工反应：RNA的内含子部分
转运RNA的功能简介
主要是携带氨基酸进入核糖体，在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板，将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序（见蛋白质的生物合成、核糖体）。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中，第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫
关于RNA沉默的简介
基因沉默是指在真核生物（植物、动物、真菌）中保守的由双链RNA诱导的鉴定和破坏其细胞质中异常变异或过表达的RNA的一种机制。 RNA 沉默(RNA silencing)或基因沉默(gene silencing)是广泛存在于植物、动物、线虫和真菌等真核生中的一种高度保守的、序列特异的 RNA 降
关于卫星RNA的简介
卫星RNA是一类小的非编码RNA,基因组大小为200-1500nt,通常不编码蛋白,完全依赖于辅助病毒来完成复制、包被、移动和传播,且和其辅助病毒的基因组不存在序列同源性。部分卫星RNA可以影响辅助病毒在寄主植物上诱发的症状,多数为减轻,少数会加重寄主症状。传统理论认为卫星RNA是通过与辅助病毒
关于转运RNA的简介
转运RNA（Transfer RNA），又称传送核糖核酸、转移核糖核酸，通常简称为tRNA，是一种由76-90个核苷酸所组成的RNA，其3'端可以在氨酰-tRNA合成酶催化之下，接附特定种类的氨基酸。转译的过程中，tRNA可借由自身的反密码子识别mRNA上的密码子，将该密码子对应的氨基酸
关于RNA复制的简介
RNA复制是以RNA为模板合成RNA的过程,是除了逆转录病毒以外的其他RNA病毒的复制方式。有些生物,像某些病毒的遗传信息贮存在RNA分子中,当它们进入宿主细胞后,靠复制而传代,当它们以RNA模板时,在RNA复制酶作用下,按5'→3'方向合成互补的RNA分子,但RNA复制酶中缺乏
小分子RNA（miRNA）简介
一、什么是小分子RNA（ MicroRNA）? MicroRNA (miRNA) 是一类长度约为20-24个核苷酸长度的具有调控功能的非编码RNA。 miRNA 主要参与基因转录后水平的调控。这些miRNA基因首先在细胞核内转录成原始miRNA转录本（primary transcrip
小分子RNA的简介
MicroRNA (miRNA) 是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA，其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNA也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某
免疫沉淀实验——免疫沉淀放射性标记抗原
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS仪器、耗材离心机实验步骤1. 按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改：（2b）按所需选用步骤4b所提供的其中之一备择物（①，②，③）预澄清放射性抗原溶液。（4b）加入1 μl 抗原特异性抗血清，或3 μg 抗原特异性单抗，或抗质特异性杂交瘤培养上 清（克隆化细
反义RNA技术改良
用反义RNA分子来调节基因表达时，经常会遇到的困难是反应模板的稳定性差。因此，人们正在探索如何改进反义基因的新方法，目前主要有：（1）优化反义RNA的结合。反义RNA链的长度对抑制基因的效果是重要的。双螺旋形成过程中将释放能量，RNA链越长，释放的自由能越多。从这一意义来讲，可以说长RNA作为反义R
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法，包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法，及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因
反义RNA技术要素
[1]长的反义RNA并不一定比短的反义RNA更为有效；[2]在原核生物中针对SD序列及其附近区域的反义RNA可能更有效；[3]在真核生物中，对应于5'端非编码区的反义RNA可能比针对编码区的反义RNA更有效；[4]尽量避免在反义RNA分子中出现自我互补的二级结构；[5]设计的反义RNA分子中
反义RNA技术介绍
随着分子生物学和遗传工程的发展，基因治疗应运而生，反义技术是其中一种，它的基础是根据核酸杂交原理设计针对特定靶序列的反义核酸，从而抑制特定基因的表达，包括反义RNA、反义DNA及核酶（Ribozyme），它们通过人工合成和生物合成获得。反义DNA是指一段能与特定的DNA或RNA以碱基互补配对的方式结
双RNA测序技术
在发表于《自然》（Nature）杂志上的一篇研究论文中， 由来自德国、奥地利和美国的研究人员组成的一个研究小组发现，采用一种允许在感染过程中同时研究细菌与宿主小RNA的新技术，可以揭示出两者转录谱的改变。该研究小组描绘了他们的技术、该技术如何更多地帮助了解细菌感染机制，以及在研究中获得的重要发现
RNA提取技术概述
RT-PCR是将RNA的反转录（Reverse Transcription，RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术，近年来得到快速发展和广泛应用。首先，经反转录酶的作用，以RNA为模板，合成互补的DNA链（cDNA），再以cDNA为模板，通过PCR扩增合成目的片段。RT-PC
概述反义RNA技术
随着分子生物学和遗传工程的发展，基因治疗应运而生，反义技术是其中一种，它的基础是根据核酸杂交原理设计针对特定靶序列的反义核酸，从而抑制特定基因的表达，包括反义RNA、反义DNA及核酶（Ribozyme），它们通过人工合成和生物合成获得。 反义DNA是指一段能与特定的DNA或RNA以碱基互补配对
染色质免疫沉淀（ChIP）技术的难点及应用2
3. 染色质免疫沉淀Input对照：在进行免疫沉淀前，需要取一部分断裂后的染色质做Input对照。Input是断裂后的基因组DNA，需要与沉淀后的样品DNA一起经过逆转交联，DNA 纯化，以及最后的PCR或其他方法检测。Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果，还可以根据Input中的靶序