培养细胞的RNA提取方法介绍

1. 贴壁细胞,需要先用胰酶消化后,然后收集到离心管中,离心,去上清,然后用PBS多洗2-3次,以去除多余的胰酶。悬浮细胞,直接用吸管或者加样枪吹打评壁,以使细胞基本可以被吹下来。然后离心去上清,不需要用PBS洗。2. 然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中,然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升,细胞少的话加0.5毫升就可以),然后用枪头吹打混匀5~10分钟。(如果有时间就继续往下做,如果没有时间,可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80°,用的时候提取和新的提取的效果一样。)在冰上操作。3. 上面的混匀5-10分钟,基本可以使细胞裂解,然后可以进行下面的步骤,详细的步骤我就不介绍了。......阅读全文

培养细胞的RNA提取方法介绍

1. 贴壁细胞,需要先用胰酶消化后,然后收集到离心管中,离心,去上清,然后用PBS多洗2-3次,以去除多余的胰酶。悬浮细胞,直接用吸管或者加样枪吹打评壁,以使细胞基本可以被吹下来。然后离心去上清,不需要用PBS洗。2. 然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中,然后加入一定量的

RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)

一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后

细胞RNA的提取方法

(一)细胞总RNA的提取1、6孔板细胞汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中,加新开的氯仿0.2 ml,轻摇15 s。3、室温静置

总细胞RNA的提取方法

实验概要总细胞RNA的提取在建库过程中,由于cDNA合成这一步将使用通用引物oligo dT,因此在总RNA提取这一步中,提取纯化mRNA不是非常必要的。提取高纯度的总细胞RNA足可以被用作cDNA合成的模板,目前提取RNA的方法很多,也有不少商业化的试剂盒。实验步骤1. TRIZOL法   1)

CsCl法从培养细胞中提取RNA

            试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲溶液 硫氰酸胍溶液 CsCl TES 缓冲液 乙酸钠缓冲液 无水乙醇 经 DEFC 处理的水

CsCl法从培养细胞中提取RNA

试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲溶液 硫氰酸胍溶液CsClTES 缓冲液 乙酸钠缓冲液无水乙醇 经 DEFC 处理的水。仪器、耗材 离心机 注射器及20W针头实验步骤 一 材料与设备1) 磷酸盐缓冲溶液 (PBS)2) 硫氰酸胍溶液:4mol/L 硫氰酸胍,0.lmmol/LTris-HClpH7.5,1%

提取总RNA,最少需要多少培养的细胞

用Trizol来提取细胞总RNA的话,一个6孔板的细胞足够了。对于贴壁培养的细胞,可将培养基吸出后直接向培养板中加入Trizol来溶解细胞,然后分次移出细胞裂解物进行后续操作即可。值得注意的是,对于所加Trizol的量,是依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定用量的(一般每10cm2加1ml)。

提取总RNA,最少需要多少培养的细胞

用Trizol来提取细胞总RNA的话,一个6孔板的细胞足够了。对于贴壁培养的细胞,可将培养基吸出后直接向培养板中加入Trizol来溶解细胞,然后分次移出细胞裂解物进行后续操作即可。值得注意的是,对于所加Trizol的量,是依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定用量的(一般每10cm2加1ml)。

组织RNA提取方法介绍

1. 最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0~4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,

2.1.5-CsCl法从培养细胞中提取RNA

通过硫氰酸胍提取和氯化铯离心法制备 RNA,适于分离细胞质和细胞核难分开的细胞以及富含 RNase 的细胞中的 RNA。试剂、试剂盒磷酸盐缓冲溶液硫氰酸胍溶液CsClTES 缓冲液乙酸钠缓冲液无水乙醇经 DEFC 处理的水。仪器、耗材离心机注射器及20W针头实验步骤一 材料与设备1) 磷酸盐缓冲溶液

不用Trizol裂解细胞提取RNA的方法

1、方法一试剂:(1)变性液组成:25 g异硫氰酸胍溶于33 ml CSB中(42 mmol/L pH4.0乙酸钠、0.83%十二烷基肌氨酸钠、0.2 mmol/L β-巯基乙醇),65 ℃溶解,过滤灭菌,4 ℃预冷。(2)酸性酚配制:55 ℃时,500 g酚溶入500 ml 50 mmol/L,p

肝脏细胞RNA的提取操作方法

一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是

提取悬浮细胞RNA

提取RNA器械:离心管2支,吸管4个,酒精灯,打火机,记号笔,200ul,1000UL枪,DEPC泡过的枪头EP管,紫外照过的手套。滤纸,DEPC纯水(750ml无水乙醇+150mlDEPC水,剧烈振荡,使劲的摇晃,直至混匀),氯仿,75%酒精,异丙醇,Trizol,预冷的离心机(两种),EP管架(

细胞总RNA的提取

提取细胞RNA的步骤:1)  六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol,冰上放置5min,枪头吹打。2)  将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中,加入氯仿0.2ml/管,用力振摇15s。15-30℃下孵育2-3min,离心(4℃,12,000g,15min)。3)  离心后液体分为三层(上层-无色

肝脏细胞RNA的提取

一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的,

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

  人外周血淋巴细胞RNA的提取方法   一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。   二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的

肝脏细胞RNA的提取原理、材料和方法

一.原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等实验是至关重要的,如

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

  人外周血淋巴细胞RNA的提取方法   一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。   二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的离心管,为管1,先加

不用Trizol即可裂解细胞提取RNA的方法

1、方法一试剂:(1)变性液组成:25 g异硫氰酸胍溶于33 ml CSB中(42 mmol/L pH4.0乙酸钠、0.83%十二烷基肌氨酸钠、0.2 mmol/L β-巯基乙醇),65 ℃溶解,过滤灭菌,4 ℃预冷。(2)酸性酚配制:55 ℃时,500 g酚溶入500 ml 50 mmol/L,p

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的离心管,为管1,先加

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

  人外周血淋巴细胞RNA的提取方法   一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。   二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的

提取病毒RNA方法

一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤,可参考(我提过N次做定量PCR都没问题):1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时,

TRIzol-RNA提取方法

(一)试剂准备1.TRIzol试剂。2.氯仿3.异丙醇4.75%乙醇(DEPC H2O配制)5.DEPC H2O(二)操作步骤1. 样品处理:(1)培养细胞:收获细胞1-5×107,移入1.5ml离心管中,加入1ml Trizol,混匀,室温静置5min。(2)组织:取50-100mg组织(新鲜或-

TRIzol-RNA提取方法

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。TRIzol RNA提取方法:(1)操作简单的,提取方便,回收率高; (2)提取的RNA的质量高,对cDNA库,RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。实验方法原理Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采

提取植物rna方法

  提到RNA的提取,是不是充满了心酸和无奈呀,抽提过程中已十分小心谨慎了,但是有时候还是会出现RNA污染、降解的悲剧。别怕,今天小编给您介绍一种新的RNA提取方法,比以前的方法更快、更有效和更可靠,让您从此不用再担心的RNA的抽提了。  众所周知:获得纯净、完整的RNA样品,是对一种植物的活性基因

TRIzol-RNA提取方法

            实验方法原理 Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构

组织/细胞RNA快速提取

 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)提示: 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇! 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 组织培养细胞a. 收

脂肪细胞RNA提取原理

氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释放到水相。不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧

植物总RNA提取方法及过程介绍

目的:用于 Northern 杂交、纯化 mRNA、RT-PCR 及 DDRT-PCR 等。材料:植物油嫩组织器官或种子萌发的幼苗。1、异硫氰酸胍法(1)试剂①异硫氰酸胍溶液:4mol/L 二异硫氰酸胍,25mmol/L 柠檬酸钠(pH7.0),0.5%十二烷基肌氨酸钠,0.1mol/L 巯基乙醇。