组织/细胞RNA快速提取

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)提示: 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇! 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 组织培养细胞a. 收集<107悬浮细胞到一个1.5ml离心管,对于贴壁细胞,孔板培养可以直接裂解,细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。b. 13,000rpm离心10秒(或者300g离心5分钟),使细胞沉淀下来。完全吸弃上清,留下细胞团,注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。c. 轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬,加入350μl(<5x106细胞)或者600μl(5x106-1x107细胞)裂解液RLT,吹打混匀后用手剧烈振荡20秒,充分裂解。d. ......阅读全文

组织/细胞RNA快速提取

 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)提示: 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇! 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 组织培养细胞a. 收

RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)

一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后

TRIzol法提取组织和细胞总RNA

(一)试剂准备1 . TRIzol 试剂。2 .氯仿3 .异丙醇4 . 75% 乙醇( DEPC H2O 配制)5 . DEPC H2O (二)操作步骤 1 . 样品处理: (1)培养细胞:收获细胞 1-5×10 7 ,移入 1.5ml 离心管中,加入 1ml Trizol ,混匀,室温

组织RNA提取方法介绍

1. 最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0~4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,

全血RNA快速提取

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)提示: 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇! 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现

植物组织总RNA的提取

实验概要由于RNA分子的结构特点,容易受RNA酶的攻击反应而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA酶,人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染,因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换(使用一

动物组织RNA提取及纯化

实验概要提取样品组织中的RNA并消除DNA污染实验原理Trizol裂解细胞使RNA释放beta巯基乙醇一直RNase活性酚-氯仿抽提分离RNARNase-Free DNase消除DNA污染主要试剂Trizol无水乙醇氯仿(三氯甲烷)异丙醇RQ1 RNase-Free DNase(Promega,M6

提取悬浮细胞RNA

提取RNA器械:离心管2支,吸管4个,酒精灯,打火机,记号笔,200ul,1000UL枪,DEPC泡过的枪头EP管,紫外照过的手套。滤纸,DEPC纯水(750ml无水乙醇+150mlDEPC水,剧烈振荡,使劲的摇晃,直至混匀),氯仿,75%酒精,异丙醇,Trizol,预冷的离心机(两种),EP管架(

CsCl法从组织中提取RNA

            试剂、试剂盒 液氮 组织胍溶液 十二烷基肌氨酸钠 CsCl 组织重悬液   乙酸钠 酚 氯仿

CsCl法从组织中提取RNA

试剂、试剂盒 液氮 组织胍溶液 十二烷基肌氨酸钠 CsCl 组织重悬液 乙酸钠酚 氯仿 异戊醇 异戊醇 无水乙醇仪器、耗材 组织捣碎机 离心机实验步骤 一 材料与设备1)液氮2)组织胍溶液:590.8 g 异硫氰酸胍溶于 400ulDEPC 处理的水中,加入 25 mmol/LTris-Cl(p

提取动物关节软骨组织总RNA

实验目的       研磨破碎软骨组织(大鼠膝关节软骨),提取其总RNA。 实验原理       充分磨碎软骨样品(大鼠膝关节软骨),再用相关试剂提取其总RNA。 实验材料和器具样品:大鼠膝关节软骨仪器:多样品组织研磨仪(上海净信,Tissuelyser-24)耗材:研磨罐(上海净信,***ml),

用于提取RNA新鲜组织如何保存

市场上有一种非冰型RNA样品保存液.有些公司叫RNAwait,或者还有别的名称,你可以了解一下.很多公司都有的.非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液,它能迅速渗入细胞内,通过高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。产品特点1

血RNA快速提取的操作步骤

操作步骤:提示:(1) 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!(2) 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。(3) 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μlβ-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT

总RNA提取实验——试剂盒快速提取法

总RNA提取可以:(1)获得高纯度、高质量的总RNA;(2)可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR 和阵列分析所需。实验方法原理一些公司推出的总RNA 提取试剂盒,可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RN

细胞总RNA的提取

提取细胞RNA的步骤:1)  六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol,冰上放置5min,枪头吹打。2)  将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中,加入氯仿0.2ml/管,用力振摇15s。15-30℃下孵育2-3min,离心(4℃,12,000g,15min)。3)  离心后液体分为三层(上层-无色

肝脏细胞RNA的提取

一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的,

脂肪细胞RNA提取原理

氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释放到水相。不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧

细胞RNA的提取方法

(一)细胞总RNA的提取1、6孔板细胞汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中,加新开的氯仿0.2 ml,轻摇15 s。3、室温静置

动植物组织总RNA提取(Trizol法)和mRNA提取

一、材料  水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备   研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。    三、试剂   1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高

2.1.6-CsCl法从组织中提取RNA

由于一些组织(如胰脏和睥脏)含有高浓度的内源性 RNA 酶,因此纯化源于组织的 RNA 须更加小心。试剂、试剂盒液氮组织胍溶液十二烷基肌氨酸钠CsCl组织重悬液乙酸钠酚氯仿异戊醇异戊醇无水乙醇仪器、耗材组织捣碎机离心机实验步骤一 材料与设备1)液氮2)组织胍溶液:590.8 g 异硫氰酸胍溶于 40

植物组织RNA提取的难点及对策

植物组织RNA提取的难点及对策  从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究

常规组织样本核酸(DNA/RNA)提取纯化

20 分钟内快速纯化高品质,高产量,即用型 DNA(见图 20)多种规格可选择:Mini Kit 可处理 25 mg 组织,Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织完全去除污染物和抑制剂可在 QIAcube 上进行自动化纯化表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量样

植物组织RNA提取的要点与技巧

从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA 。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。从文献报道上看

多糖多酚植物总RNA快速提取试剂提取水稻胚乳总RNA

实验概要采用TAKARA的试剂提取水稻胚乳,主要是后期的胚乳RNA量偏少,不易提取!实验步骤1. 称量100mg的新鲜或者超低温冻结的植物RNA提取样品,迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。2. 向研钵中加入1000μL RNAiso-mate for

植物总RNA的快速提取与纯化

一、原理RNA包括rRNA、tRNA和mRNA等,大部分通常是以核蛋白复合物的形式存在的。通过SDS、苯酚处理使蛋白质变性并沉淀。利用LiCl溶解双链DNA的特性去除DNA,经乙醇沉淀得到总RNA。纯度高、完整性好的RNA,即可用于Northern杂交、纯化mRNA、cDNA合成和体外翻译等进一步的

如何从脂肪组织中高效提取RNA?

前言RNA 的提取是肿瘤研究的重要内容。在乳腺癌的研究中,乳腺癌样品通常含有较高含量的脂肪组织和结缔组织,而脂肪组织由于密度小,通常漂浮于液面,使样品难以被充分研磨。若研磨不充分,会导致样品离心后不能得到明确清晰的分层,多数老师都会选择牺牲提取量以保证提取效果。深圳大学医学院的老师们正是遇到了上述的

细胞质RNA提取实验

基本方案             实验材料 RNA 试剂、试剂盒

细胞质RNA提取实验

由于RNA的种类来源很多,因而提取制备方法各异,一般有苯酚法,去污剂法和盐酸胍法,其中苯酚法实验室最常用。组织匀浆后用苯酚处理离心,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,向水相加冷乙醇后, RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质,且获得生物活性的RNA。实验材料RNA试剂、试剂盒PBS细

总细胞RNA的提取方法

实验概要总细胞RNA的提取在建库过程中,由于cDNA合成这一步将使用通用引物oligo dT,因此在总RNA提取这一步中,提取纯化mRNA不是非常必要的。提取高纯度的总细胞RNA足可以被用作cDNA合成的模板,目前提取RNA的方法很多,也有不少商业化的试剂盒。实验步骤1. TRIZOL法   1)

细胞质RNA提取实验

实验材料 RNA试剂、试剂盒 PBS细胞裂解液SDS蛋白酶K酚氯仿异戊醇无水乙醇仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1.  对于单层培奍细胞(1)每10 cm 培养皿培养的细胞,用冰冷PBS洗涤3次。(2)每次1 ml 然后用小体积PBS刮下细胞,转移至冰浴的离心管中。(3)300 g 离心5 min