中科院Nature开源性刊物发表蛋白质研究新技术
来自中科院大连化学物理研究所的研究人员开发一种新型的同位素标记策略，可对6种不同的蛋白质样品进行可靠标记并进行同时定量。并证实这一策略适用于高通量检测蛋白质周转(turnover)动态。这一研究成果发表在国际著名刊物Nature旗下开源性刊物Scientific Reports上。 中科院大连化学物理研究所的邹汉法研究员和王方军博士是这篇文章的共同通讯作者。邹汉法研究员主要研究方向是生物分离分析新材料的制备、多维液相色谱和联用技术、血液净化工程及其临床应用、中药生物指纹谱的表征及其活性成分筛选、生物质谱检测的样品制备方法和新基体的发现。已在国内外学术刊物发表学术论文300多篇, SCI他人引用近千次。 利用液相色谱法结合串联质谱法(LC-MS/MS)，可以轻易地完成大规模蛋白质组鉴定和定量。在一次实验中可以鉴定和定量来自复杂生物样品成千上万种蛋白质。在整体水平上进行蛋白质组定量对于概述不同生物条件下蛋白质......阅读全文
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...1
目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂（盒）的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶（HRP）标记 辣根过氧化物酶（HRP）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖
放射性核素标记技术的优缺点
稳定同位素和放射性同位素均可用来示踪，但在实际应用中，稳定同位素具有放射性同位素无法比拟的优越性：（1）安全、无辐射，稳定同位素对动植物不会造成伤害，在使用、运输和储存的过程中比较方便；（2）半衰期长，放射性同位素因其半衰期太短而没有实用性，限制了其应用，而稳定同位素的半衰期均大于1×1015年，因
非同位素标记探针的酶法检测实验——碱性磷酸酶检测法
实验材料探针试剂、试剂盒PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺碱性磷酸酶缓冲液仪器、耗材盖玻片水浴锅实验步骤1. 生物素酰化探针与切片杂交、洗涤、封闭，然后与链亲和素溶液温育（“辣根过氧化物酶法检测”，步骤1~4）。 2. 由0.1% Tween 20/PBS中取出玻片，吸去残液，勿
定量蛋白质组学质谱采集技术进展（一）
摘要 质谱是定量蛋白组学的主要工具。近年来随着定量蛋白质组学研究的深入,传统质谱定量技术面临着复杂基质干扰、分析通量限制等诸多问题。而最近一系列质谱新技术的发展,包括同步母离子选择(SPS)、质量亏损标记、平行反应监测(PRM)、多重累积(MSX)和多种全新数据非依赖性采集(DIA)等,为解决目前蛋
IDMS法测定血清中的生长激素
图1. 生长激素的IDMS测定法示意图：将“指纹碎片”T6以胰蛋白酶进行蛋白质水解，并对分析溶质予以富集后，借助于RP-LC-MS/MS进行定量测定。 在医学上，为了进行早期诊断以及对疾病进行医疗控制，经常需要对血清中的所谓标记蛋白质进行量化。这些蛋白质分子尺寸微小，结构复杂，血清
Prof.－John－Yates论述由质谱驱动的蛋白质科学
第5届亚洲与大洋洲质谱会议暨第33届中国质谱学会学术年会于2014年7月17日上午在北京大学盛大召开。在大会报告中，来自美国斯克利普斯研究所的Prof. John Yates带了题为《From a Protein to the Brain Proteome
Nature方法：细胞信号追踪新技术
来自纪念斯隆-凯特琳癌症中心的研究人员，与德国的合作者们一起，开发出了一种在多细胞环境中鉴别胞内蛋白及分泌蛋白来源细胞的新方法。该研究在线发布在6月30日的《自然方法》(Nature Methods)杂志上。 多细胞环境的形成及维持有赖于广泛的细胞间相互通讯。细胞相互作用调控失常在包括
大规模蛋白质相互作用研究方法进展（三）
图1 TAP亲和层析纯化原理[14] 注：A:标签中的ProteinA 与固化的IgG 结合缓冲液淋洗去除不能结合的杂蛋白，TEV 酶切分离ProteinA 和靶蛋白；B:利用CBP(Calmodulin binding peptide)-Calmodulin 的相互
赛默飞在ASMS－2012期间推出新型质谱样品制备产品
温哥华，不列颠哥伦比亚省--2012年5月21日 - ASMS 2012 —全球科学服务领域的领导者赛默飞世尔科技，将在5月20~24日，于温哥华会展中心举办的ASMS 2012会议期间展示其几款新型质谱样品制备产品。 Thermo Scientific HiPPR去除树脂洗涤剂
蛋白质相互作用识别和干预机制分析新方法
近日，中国科学院大连化学物理研究所研究员王方军团队在蛋白质复合物形成和干预机制分析新方法研究方面取得进展，通过溶液状态蛋白质赖氨酸两步稳定同位素标记和定量蛋白质组学分析，实现对蛋白—蛋白识别关键位点区域的精确探测，并可评估小分子对蛋白质复合物的构象识别干预情况。 蛋白质的结构和相互作用决定了其
蛋白质相互作用识别和干预机制分析获进展
近日，中国科学院大连化学物理研究所研究员王方军团队在蛋白质复合物形成和干预机制分析新方法研究方面取得新进展。研究人员通过溶液状态蛋白质赖氨酸两步稳定同位素标记和定量蛋白质组学分析，实现对蛋白—蛋白识别关键位点区域的精确探测，并可评估小分子对蛋白质复合物的构象识别干预情况。相关研究结果发表于《化学
2010年analytica－Research奖得主将赴analytica－China发表演讲
2010年analytica Research奖由瑞士联邦理工学院苏黎世分校(Swiss Federal Institute of Technology in Zurich)有机化学系Petra S. Dittrich教授和麦克斯・德尔布吕克中心(Max De
质谱检测法与蛋白质分析（三）
Protein(s)：待测蛋白质样品;Enz. Digestion：酶解;Pep. Mixture：裂解产物混合物; MS Analysis：质谱检测分析;DB Search：数据库比对搜索;Identities：鉴定; Prot.DB ：蛋白质数据库;Proteom
蛋白质的蛋白质的提取技术
选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方
蛋白质根据蛋白质结构进行分类
纤维蛋白（fibrous protein）：一类主要的不溶于水的蛋白质，通常都含有呈现相同二级结构的多肽链许多纤维蛋白结合紧密，并为单个细胞或整个生物体提供机械强度，起着保护或结构上的作用。球蛋白(globular protein)：紧凑的，近似球形的，含有折叠紧密的多肽链的一类蛋白质，许多都溶于水
蛋白质转印法检定蛋白质
蛋白质转印法检定蛋白质 蛋白质经SDS-PAGE后，胶片浸入转印缓冲液，蛋白质可被转印到硝化纤维纸（nitrocellulose） 上，先经?素洗去SDS，并使蛋白质回?原态抗原性，可使用抗体进?免疫染色 （Towbin et al, 1979）。仪器用具：电泳转印槽 （Hoefer Tra
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析—凝胶蛋白质激酶分析
试剂、试剂盒Tris-HClDTT盐酸胍尿素激酶分析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤1. 准备下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有试剂50 mmol/L Tris-HCl，室温（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 盐酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室温（p
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—蛋白质激酶C
试剂、试剂盒PKC 分析缓冲液组蛋白 HI 储存液磷脂酰丝氨酸甘油二油酸脂实验步骤1. 在冰浴的离心管内配制如下 20 μl 反应混合物：5X PKC 分析缓冲液 4 μl10 mg/ml 组蛋白 HI 储存液
Nature子刊：蛋白质绝对定量的新方法
生物学研究离不开定量。对于绝对定量，通常需要利用已知浓度的分子绘制标准曲线。最近，麻省理工学院、梅约诊所和赛默飞世尔科技的研究人员在《Nature Communications》杂志上介绍了一种新方法，能利用串联质谱仪对多个蛋白质进行绝对定量。 这种方法称为MARQUIS（Multi
大连化物所：－金纳米棒抑制癌细胞扩散研究取得新进展
中科院大连化物所癌细胞迁移抑制蛋白质组磷酸化机制研究取得新进展近日，大连化物所王方军研究员团队与美国国家科学院和美国艺术与科学院院士、佐治亚理工学院Mostafa A. El-Sayed教授团队，以及佐治亚州立大学方宁教授团队合作，在金纳米棒抑制癌细胞扩散相关生物学机理研究方面取得新进展，相关工作发
非同位素标记探针酶法检测实验——辣根过氧化物酶法检测
实验材料探针试剂、试剂盒PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺仪器、耗材盖玻片水浴锅实验步骤1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片（“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步）。2. 由1×SSC中取出玻片，尽可能吸去残留玻片上的缓冲液，但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻
多肽稳定标同位素记技术与甲基化修饰技术
1. 多肽稳定标同位素记技术 随着多肽在生物医药领域越来越广泛和深入的应用，标记和修饰性的多肽种类的需求越来越多，质量需求也越来越高。稳定同位素标记(同位素示踪法)就是其中典型的一种。稳定同位素标记多肽是指用稳定同位素标记的氨基酸合成的多肽。与标准氨基酸相比，同位素标记是指用2H，13C或1
关于大肠杆菌无细胞系统的特点介绍
现在有很多商家的不同商标的S30 体外翻译系统，其主要特点有:灵活，能使用含有T7 启动子和一个核糖体结合位点的任何克隆进行翻译； 稳定，减小了所表达蛋白质被降解的机会； 国包含了所有偶联的转录/ 翻译所需要的组分； 困低背景，系统合成的内源蛋白质水平低。该系统可应用于合成放射性同位素标记的蛋白
完全蛋白质、不完全蛋白质及半完全蛋白质的概念
完全蛋白质所含必需氨基酸种类齐全，数量充足，相互之问比例也适当，不但能够维持成人的健康，也能够促进人体的生长发育，如乳中的酪蛋白、蛋类中的卵白蛋白、大豆球蛋白、小麦中的麦符蛋白等。 半完全蛋白质所含各种必需氨基酸种类齐全，但各种氨基酸含量多少不匀，互相之间比例不合适。在膳食中作为唯一的蛋白质来源时，
什么是荧光原位杂交有什么用？
原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一种固相分子杂交的方法，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素
《Nature》：新方法提高单细胞蛋白质组学质谱定量准确度
单细胞蛋白质组学在蛋白丰度检测、转录修饰和翻译后修饰方面填补了单细胞转录组学的空白。单细胞蛋白质组学质谱（SCoPE-MS）是近年来兴起的一种定量分析多功能单细胞蛋白质组的方法，这种方法采用同位素标记和载体蛋白质组学来分析单个细胞【1】。同位素标记具有相同质量的化学标签，其中包含了独特的质量条码
大连化物所定量蛋白质组学新技术新方法研究取得进展
近日，中科院大连化学物理研究所生物分离分析新材料与新技术研究组(1809组)邹汉法、叶明亮研究员等人在定量蛋白质组学新技术新方法研究方面取得新进展。相关研究成果发表在最新一期的Angew. Chem. Int. Ed.上(2013年52卷，9205-9209页)。 该项研究工作利用胰蛋
western－blot原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
蛋白质分离实验_分离未知－pI－蛋白质
用 CE 进行 IEF分离是选择随后用于在非衍生毛细管柱上分离蛋白的缓冲液系统的有效的第一步。如果没有检测到蛋白质，可能是被吸收到柱的硅表面。在离子去垢剂如 SDS 存在的情况下重复分离过程，这样就会用负电荷包被蛋白质从而阻止吸收。但是，这意味着蛋白质只能依据大小的不同而进行分离。知道蛋白质的 pI