稳转细胞株构建原理
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。稳定细胞系建立的原理将外源DNA/shRNA克隆到带有某种抗性基因的载体上，重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并能随细胞分裂稳定传递下去，用载体中所含抗性基因进行筛选。常用的真核表达载体抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、杀稻瘟菌素（blasticidin)和嘌呤霉素(puromycin)。慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法 。在什么情况下需要建立稳转细胞系？①需要长期在目的细胞中研究基因功能，通过建立稳转细胞系，可以降低频繁转染或者病毒包装的成本，方便实验研究；②部分蛋白半衰期极长，瞬时RNA只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳转细胞系可以实现更好的基因干扰效果；③瞬转会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，建立稳转细胞......阅读全文
细胞株的概念
通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株（Cell Strain）。
细胞株的保存
1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。2. 将所需的培养基，胰酶确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培养基瓶放
如何保存细胞株？
1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。 2. 将所需的培养基，胰酶确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。
细胞株的概念
细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line)， 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限， 可称为有限细胞系(finite cel
企业为何“不想转”“不敢转”“不会转”？
企业“不想转”“不敢转”“不会转”，资源要素支撑相对不足，高端化、智能化、绿色化、融合化水平参差不齐，转型升级环境尚待优化……7月4日，在“粤商·省长面对面协商座谈会”上，关于传统产业转型升级的讨论热火朝天。 习近平总书记在二十届中央财经委员会第一次会议上强调，“坚持推动传统产业转型升级，不能
Piggybac转座子载体的作用原理和应用
在我们研究某种疾病的发病机制或者某种药物的作用靶点时，经常需要建立目的基因过表达或基因敲除的细胞模型，目前构建稳转细胞株及部分敲除细胞株最常用的方式之一是慢病毒法，慢病毒因其可以转染几乎所有种类的细胞，且在转染后可以整合到细胞的基因组而长期表达的优势，是目前较为主流的构建方法，但慢病毒构建的稳转细胞
热点课题研究之慢病毒载体的使用与技术展望（二）
二、慢病毒载体 慢病毒载体（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，是逆转录病毒的一种，基因组是RNA，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达，具有感染分裂期与非分裂期细
简介转筒干燥器的工作原理
转筒干燥器的主体是略带倾斜并能回转的圆筒体。这种装置的工作原理如下：湿物料从左端上部加入，经过圆筒内部时，与通过筒内的热风或加热壁面进行有效的接触而被干燥，干燥后的产品从右端下部收集。在干燥过程中，物料借助于圆筒的缓慢转动，在重力的作用下从较高一端向较低一端移动。筒体内壁上装有顺向抄板（或类似装
转鼓真空过滤机的工作原理
分配阀的动盘固定在转鼓轴颈上，与转鼓同步旋转。动盘端面有一圈孔。每个孔与转鼓上对应的一个滤室相连。阀座不转动，其内侧端面上开有几条弧形槽，分别与外侧的接管连通。阀座与动盘贴合，各弧形槽顺序与动盘上的孔相通，旋转的滤室即可与固定的真空或压缩空气系统顺序联接，使过滤操作循环进行。 采用绕带转鼓真空
细胞株的保存方法
1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。2. 将所需的培养基，胰酶确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培养基瓶放
组织芯片的的构建原理和步骤
1.选取待研究的组织。现在人们利用组织芯片技术对人体各组织均有研究，包括肝脏，前列腺，心脏，乳房等等，据相关数据显示，在大脑组织中的应用最多。医学上常选取一些病变器官进行研究。根据制作方法来分，微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。2.经检测后标记出待研究的区域。组织微阵列的检测仪主要是
DNA文库构建和Illumina测序化学原理
单细胞测序方法和原理系列：所谓DNA文库，实际上是许多个DNA片段，在两端接上了特定的DNA接头，形成的DNA混合物。文库有2个特点：1. 当中这一段插入的DNA，它的序列是各种各样的。2. 它的两头的街头序列，是人工特异加上去的，是已知的。要构建文库，首先需要把基因组DNA用超声波打断，之后把两端
关于慢病毒的目的与意义介绍
● 对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，这就为RNAi,cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。 ● 进行稳转细胞株的筛选； ● 为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒
血管“稳”－－“拐点”现
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/4/499633.shtm编者按随着经济发展和人民生活水平的提高，饮食结构和环境因素发生着改变，我国心脑血管疾病的发病率呈逐年上升趋势，已成为危害国民健康的“头号杀手”。我国科学家立足基础科学研究前沿，在“血管
转筒干燥器的工作原理及特点
转筒干燥器的工作原理 转筒干燥器的主体是略带倾斜并能回转的圆筒体。这种装置的工作原理如下：湿物料从左端上部加入，经过圆筒内部时，与通过筒内的热风或加热壁面进行有效的接触而被干燥，干燥后的产品从右端下部收集。在干燥过程中，物料借助于圆筒的缓慢转动，在重力的作用下从较高一端向较低一端移动。筒体内壁
耐药细胞构建的原理和实验要点说明
细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受程度逐渐加强。 耐药细胞培养的优点： 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况
细胞株的基本信息
细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line)，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限，可称为有限细胞系(finite cell li
细胞株的概念和特性
通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株（Cell Strain）。
细胞株的传代与培养
培养细胞株传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长细胞如COS-7、CHO等用消化法传代；部分贴壁生长的细胞如PC12用直接吹打即可传代。 一、用品 (1) 0.25％胰蛋白酶，全培养液 (2) 滴管，离心管，培养瓶(皿)，培养瓶盖，注射器，计数6 二、步骤 (1) 贴壁细胞的消化法
稳定表达细胞株的建立
1、将转染后的细胞按照一定的比例接种到6孔板中（一般选用1：10和1：100两个梯度），分别采用1200mg/ml，1000mg/ml和800mg/ml的G418进行筛选；以转染携带EGFP质粒载体的细胞作为阳性对照，以未转染质粒载体的细胞作为阴性对照；2、每3～4天换液一次；3、筛选20～30天，
细胞株的保存方法介绍
1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。2. 将所需的培养基，胰酶确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培养基
分析细胞株培养技术重点
细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。国内资深的细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。下面纪宁技术员就为您分享细胞株培养技术的几大要点，赶紧拿起小本本记好了！一、取材细胞
什么是转筒烘干机？转筒烘干机的工作原理又是什么呢？
转鼓式干燥机又称转鼓式干燥机，是一种干燥设备，广泛应用于矿山设备中。分为直接传热转鼓式干燥机和间接传热转鼓式干燥机。 适用于干性金属矿、非金属矿、水泥行业的粘土矿、煤炭行业的矿泥的磁选、重选、浮选。具有生产效率高，操作方便等特点。转筒干燥机缸体为水平转筒，由前后交错排列不同角度的各种板材焊接而
EBV所转录的miRNA－BART1－抑癌基因PTEN而促进鼻咽癌细胞转移
Nature子刊揭示鼻咽癌转移新机制 鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma, NPC）是我国华南地区常见的恶性肿瘤之一，主要发生于鼻咽腔顶部和侧壁，长期以来发病率一直为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。我国每年鼻咽癌的新发病例达2.8万例，其中广东地区鼻咽癌发病率占全国60%，死亡
转管培养法与转瓶培养
转管培养法（roller tube culture）是Gey 提出的，实验室常用，为了扩大细胞产量，将试管改用转瓶，故称转瓶培养，其培养方法是一样的，试管或转瓶固定在支加上，倾斜度为5°～10°左右，或将转瓶放在一排排转轴之间，使转瓶随着转轴以每小时6～12 转缓慢转动。细胞贴附于玻璃壁
湿转和干转，哪个方法更好
对于一个完美的westernblot实验，蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离，蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上，然后通过特异性的抗体进行免疫检测。 对于转印来说，使用湿转的方法是比较好的，因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中，在半干转的条件下，转印是在两个电极板之间发
湿转和干转，哪个方法更好？
对于一个完美的westernblot实验，蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离，蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上，然后通过特异性的抗体进行免疫检测。对于转印来说，使用湿转的方法是比较好的，因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中，在半干转的条件下，转印是在两个电极板之间发生，这种类型
一文读懂蛋白质转印原理－大分子量蛋白转印有哪些技巧
通过凝胶电泳分离蛋白后，蛋白质被转移到固体膜载体上进行后续步骤。有效的转印依赖于膜的选择、所使用的转印设备的类型以及转印缓冲液的组成。 转印条件 蛋白的有效转印依赖于蛋白质从凝胶中迁移出来，也依赖于蛋白在膜上的滞留。像凝胶电泳一样，转印步骤将带负电荷的蛋白转印到带正电荷的电极上。转印效率受所
不忘初心行稳致远
“改革开放是决定当代中国命运的关键一招，也是决定实现‘两个一百年’奋斗目标、实现中华民族伟大复兴的关键一招。”对于改革开放的历史定位，习近平总书记做了明确论述。“我们现在所处的，是一个船到中流浪更急、人到半山路更陡的时候，是一个愈进愈难、愈进愈险而又不进则退、非进不可的时候。改革开放已走过千山万
Western－转膜时用干转还是湿转效果比较好？
关键看效果怎么细分，干转，速度快，效率稍低，湿转，速度比较慢，转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主，干转就挺好的，效率非常高，几分钟就做完了。分子量特别大，又没有其他人的方案做参考，可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话，真是等到花儿也谢了。至于说效果，不是