稳转细胞株构建原理
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。稳定细胞系建立的原理将外源DNA/shRNA克隆到带有某种抗性基因的载体上，重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并能随细胞分裂稳定传递下去，用载体中所含抗性基因进行筛选。常用的真核表达载体抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、杀稻瘟菌素（blasticidin)和嘌呤霉素(puromycin)。慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法 。在什么情况下需要建立稳转细胞系？①需要长期在目的细胞中研究基因功能，通过建立稳转细胞系，可以降低频繁转染或者病毒包装的成本，方便实验研究；②部分蛋白半衰期极长，瞬时RNA只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳转细胞系可以实现更好的基因干扰效果；③瞬转会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，建立稳转细胞......阅读全文
稳转细胞株构建原理
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。稳定细胞系建立的原理将外源DNA/shRNA克隆到带有某种抗性基因的载体上，重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并能随细胞分裂稳定传递下去，用载体中所含抗性基因进行筛选。常用的真核表达载体抗性筛选标志物有新
维真稳转株构建流程
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。 一．准备及预实验 确定细胞系相关信息，需包括如下内容 目标细胞系培养条件 目标细胞增殖速度 支原体污染情况
维真稳转株构建流程（二）
平板挑取法 计数100个多克隆稳转株细胞，接种于一个10cm培养盘中；注：尽量吹打均匀，防止细胞聚团。过夜培养后，观察并寻找单个细胞的位置，并在盘底做标记；培养培养2周；注：培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。待标记处的细胞扩增为肉眼可见的白点，在移液器尖端吸取一点胰酶，缓慢滴至细胞处，待细
维真稳转株构建流程（一）
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。一．准备及预实验确定细胞系相关信息，需包括如下内容目标细胞系培养条件目标细胞增殖速度支原体污染情况注：为避免慢病毒感染后细胞死
知识分享：维真稳转株构建流程
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。 一．准备及预实验 确定细胞系相关信息，需包括如下内容 目标细胞系培养条件 目标细胞增殖速度 支原体污染情况
稳定细胞株构建
稳转细胞系（稳定表达细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。稳转细胞株包括多克隆稳转细胞株和单克隆稳转细胞株。慢病毒感染目的细胞后，通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细
什么是稳转株
稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
稳转株的制备
实验原理：利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。相对于此，稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因可以稳定转染
如何构建耐药细胞株？
肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是肿瘤治疗失败的重要因素之一，成为目前阻碍肿瘤治疗的绊脚石。因此，探索肿瘤细胞产生耐药的原因以及如何改善肿瘤细胞对化疗药物耐药仍是目前研究的热点和难点。肿瘤细胞耐药的产生是一个复杂的过程，它的机制广泛牵涉到药物代谢学、病理学、生理学等多个学科，这就决定了肿瘤细胞对化疗药物
稳定转染细胞株的构建
1. 2 稳定转染细胞株的构建原理：稳定转染，就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。应用：
细胞株是如何构建的？
1，什么是瞬时转染和稳定转染？瞬时转染：外源片段的表达时间短暂。这主要是因为外源导入的裸露的载体整合入基因组的几率非常低，所以以染色体外(episomal)形式存在，不能随细胞分裂而一同复制导致后拷贝数被稀释导致的。而且考虑到细胞分裂会稀释质粒的量，所以起初转染的质粒拷贝数极高。这就导致瞬时转染呈现
知识分享：稳转株的制备
实验原理： 利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。相对于此，稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因
快速构建细胞株的使用策略
细胞株构建是广大做细胞研究科研工作者及生物技术员常用的一种技术，目的就是通过构建一个高产感兴趣蛋白的细胞，而细胞株构建就是实现这个目的的过程。这是一个简单的操作，却也是一个复杂的操作。简单在于，从表面上看，并不需要很高超的操作技巧；复杂在于，这是一个时间周期长、操作步骤多、易污染、易混乱的重复劳动工
碘稳激光器原理
通过碘的吸收来将HeNe激光器的波长稳定到碘的吸收峰上。根据查询仪器网得知，碘稳激光器原理是通过碘的吸收来将HeNe激光器的波长稳定到碘的吸收峰上，是一种精密测量仪器。
单克隆筛选的原理
细胞单克隆筛选细胞单克隆筛选是根据细胞所具有的特性将单个细胞从混合的细胞样品中分离出来的一种技术,是抗体制备细胞株优化、稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应用中重要的一环,优质的单克隆细胞能够更好地为不同领域科学研究和药物研发提供支持。通俗的讲:就是将混合细胞通过3D打印技术（更精准高效）/直接用96孔
如何在构建敲除细胞株时利用好CRISPR/Cas9技术？
从2013年1月份开始到现在，近2年的时间里，CRISPR/Cas9技术的应用领域被来自全球优秀的科学家们不断的扩大。其中包括基因敲除，定点突变，定点整合，基因沉默，基因定位和CHIP等多个领域，而且这个技术的应用领域还在不断的被扩大。 笔者基于多年的基因重组经验（系统的研究过ZFN / IOS
如何在构建敲除细胞株时利用好CRISPR/Cas9技术？
从 2013 年 1 月份开始到现在，近 2 年的时间里，CRISPR/Cas9 技术的应用领域被来自全球优秀的科学家们不断的扩大。其中包括基因敲除，定点突变，定点整合，基因沉默，基因定位和 CHIP 等多个领域，而且这个技术的应用领域还在不断的被扩大。吉锐生物基于多年的基因重组经验（系统的研究过
如何在构建敲除细胞株时利用好CRISPR/Cas9技术？
从2013年1月份开始到现在，近2年的时间里，CRISPR/Cas9技术的应用领域被来自全球优秀的科学家们不断的扩大。其中包括基因敲除，定点突变，定点整合，基因沉默，基因定位和CHIP等多个领域，而且这个技术的应用领域还在不断的被扩大。笔者基于多年的基因重组经验（系统的研究过ZFN / IOS /
western－blot转膜的原理
电场力作用条件下，带电粒子（PAGE胶中的蛋白）会发生定向迁移；蛋白大小如果超过膜孔径（0.22μm or 0.45μm），不会透过膜；WB用的膜具有蛋白吸附作用；
组织芯片的构建原理
TMA构建原理可以概括为以下四个步骤：1.选取待研究的组织。人们利用组织芯片技术对人体各组织均有研究，包括肝脏，前列腺，心脏，乳房等等，据相关数据显示，在大脑组织中的应用最多。医学上常选取一些病变器官进行研究。根据制作方法来分，微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。2.经检测后标记出待研
上海巴斯德所合作开发出人单克隆抗体新型制备技术
2011年12月25日，Molecular Biotechnology 在线发表了中科院上海巴斯德研究所周保罗研究组题为“用波浪生物反应器进行灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇细胞系高产人单克隆抗体”的文章。这是首次关于用波浪生物反应器灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇S2细胞来产生人单克隆
转膜实验原理与操作步骤
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定，是进行各种后续研究(如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理： 1. 转膜的方式： 向上的毛细管
westernblotting转膜是根据什么原理
western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。所以western blo
总结大容量振荡的稳频原理和方法
所谓“振荡”，其涵义就暗指交流，振荡器包含了一个从不振荡到振荡的过程和功能。能够完成从直流电能到交流电能的转化，这样的装置就可以称为“振荡器”。振荡器简单地说就是一个频率源，一般用在锁相环中。详细说就是一个不需要外信号激励、自身就可以将直流电能转化为交流电能的装置。一般分为正反馈和负阻型两种。
总结大容量振荡的稳频原理和方法
所谓“振荡”，其涵义就暗指交流，振荡器包含了一个从不振荡到振荡的过程和功能。能够完成从直流电能到交流电能的转化，这样的装置就可以称为“振荡器”。振荡器简单地说就是一个频率源，一般用在锁相环中。详细说就是一个不需要外信号激励、自身就可以将直流电能转化为交流电能的装置。一般分为正反馈和负阻型两种。
western－blotting转膜是根据什么原理
原理：westernblotting转膜一般采用“滤纸-凝胶-膜-滤纸”夹心法，凝胶靠近负极，膜靠近正极。因为蛋白上结合有sds，因而带负电，在电流的作用下会从负极向正极运动，从而转移到膜上。
转筒烘干机的工作原理
干燥的湿物料由皮带输送机或斗式提升机送到料斗，然后经料斗的加料机通过加料管道进入加料端。加料管道的斜度要大于物料的自然倾角，以便物料顺利流入干燥器内。干燥器圆筒是一个与水平线略成倾斜的旋转圆筒。物料从较高一端加入，载热体由低端进入，与物料成逆流接触，也有载热体和物料一起并流进入筒体的。随着圆筒的
探索转滴界面张力仪测试原理
为测定超低界面张力，须人为地改变原来重力与界面张力间的平衡，使平衡时液滴的形状便于测定。在旋转滴界面张力仪中，通常采用使液液或液气体系旋转，增加离心力场的作用而实现。这就是旋转滴法界面张力仪的基本原理。通常，我们在样品管中充满高密度相液体，再加入少量低密度相液体（或气体，用于测液体与气体间的界面张力
转筒干燥器的工作原理
转筒干燥器的主体是略带倾斜并能回转的圆筒体。这种装置的工作原理如下：湿物料从左端上部加入，经过圆筒内部时，与通过筒内的热风或加热壁面进行有效的接触而被干燥，干燥后的产品从右端下部收集。在干燥过程中，物料借助于圆筒的缓慢转动，在重力的作用下从较高一端向较低一端移动。筒体内壁上装有顺向抄板（或类似装
western－blotting转膜是根据什么原理
原理：westernblotting转膜一般采用“滤纸-凝胶-膜-滤纸”夹心法，凝胶靠近负极，膜靠近正极。因为蛋白上结合有sds，因而带负电，在电流的作用下会从负极向正极运动，从而转移到膜上。