荧光响应型CRISPR荧光探针实现活细胞基因组高清成像
中国科学院动物研究所研究员李幸系统梳理并评述了荧光点亮响应型CRISPR成像探针在活细胞基因组DNA成像中的最新进展,为这一前沿领域提供了全面的技术概览与未来展望。相关论文在线发表于《细胞-化学生物学》。 在活细胞中原位解析基因组DNA的动态行为,对揭示染色质三维结构、DNA相互作用、基因表达调控机制及DNA损伤和相关疾病的发生发展至关重要。然而,现有荧光成像技术在标记活细胞内的特定DNA序列时,普遍面临背景荧光干扰强、信噪比低的严峻挑战,极大限制了人们对基因组动态过程的精细观测。传统的CRISPR/Cas9衍生成像工具虽已被用于DNA标记,但其“常亮”荧光特性导致未结合探针在细胞核内弥漫性分布,产生显著背景噪声,且易在核仁处非特异性聚集,严重制约成像分辨率与准确性。 研究人员系统阐述了四种高效减噪的荧光响应型fCRISPR成像策略,包括基于荧光响应蛋白的策略(图b)、荧光响应RNA适配体策略(图c)、分裂式荧光蛋白策略......阅读全文
荧光响应型CRISPR荧光探针实现活细胞基因组高清成像
中国科学院动物研究所研究员李幸系统梳理并评述了荧光点亮响应型CRISPR成像探针在活细胞基因组DNA成像中的最新进展,为这一前沿领域提供了全面的技术概览与未来展望。相关论文在线发表于《细胞-化学生物学》。 在活细胞中原位解析基因组DNA的动态行为,对揭示染色质三维结构、DNA相互作用、基因表达
监测活细胞内脂滴动态过程-“缓冲荧光探针”立大功
近日,大连化物所分子探针与荧光成像研究组(1818组)徐兆超研究员团队利用“缓冲”策略,发展了细胞内脂滴动态识别荧光探针LD-FG,该探针具有优异的光稳定性,可在空间超分辨成像的基础上实现高时间分辨率和长时间稳定成像,从而发现了多种新的脂滴动态过程。 脂滴是维持脂质和能量稳态的关键细胞器,由中
什么是活细胞荧光
没有听说过这个术语,不过应该很好猜测,就是用荧光技术标记活细胞,可以是只有活细胞才能吸收的荧光物质,该物质被活细胞吸收后,该活细胞就发出荧光可用于观测了。而死细胞不吸收就观测不到荧光,可以区分细胞死活。
科学团队创制荧光探针-实现蛋白质成簇/解聚活细胞监测
华东理工大学化学与分子工程学院、费林加诺贝尔奖科学家联合研究中心教授郭志前团队,创制了激活型化学遗传学荧光探针,首次在活细胞中监测蛋白质成簇/解聚的精确状态。相关研究近日作为VIP(Very Important Paper)论文发表于《德国应用化学》,并被评为热点论文(Hot Paper)。在蛋白质
新型DNA结构的荧光张力探针于活细胞机械力可视化研究
电学、化学和力学是细胞内最常见的三大信号系统,它们相互协调,共同维持着细胞的生命活动。前两者已被人们广泛研究,而细胞的机械力信号传递过程因缺少有效的研究方法,人们一直对其认识有限。研究表明,细胞在体内拥挤的环境中不仅通过挤来挤去以获得足够的生存空间,同时,细胞的生命过程也不断的受到挤压、拉伸、弯
我所发展细胞膜缓冲荧光探针实现活细胞质膜形态动力学的超分辨荧光成像
近日,我所生物技术研究部分子探针与荧光成像研究组(1818组)乔庆龙副研究员和徐兆超研究员团队发展了组装介导的细胞膜缓冲荧光探针,实现了对细胞质膜的长时间稳定标记和超分辨动态荧光成像,观察到了质膜丝状伪足的动态运动和细胞外囊泡的分泌过程,发现了两种细胞外囊泡的融合模式,为细胞质膜的超分辨动态成像提供
著名华裔院士:CRISPR/Cas9介导的荧光原位杂交
加州大学伯克利分校生物化学与分子生物学系钱泽南(Robert Tjian)教授是美国著名华裔生物化学家,其以研究真核生物细胞遗传信息转录闻名,担任国际顶级生物学期刊《Cell》杂志的编委,1991年当选美国国家科学院院士,2009年担任美国霍华德•休斯医学研究所(HIMI)主席。科学界将其与著名
钙离子荧光探针:比值型荧光探针
前面我们介绍了荧光指示剂法可以将Ca2+检测的实验与其他技术结合使用,如可以与流式细胞仪、荧光分光光度计、或者荧光显微镜进行联合检测 。紫外光型主要包括Quin-2、Indo-1、Fura-2等,数量较少,可见光型数目较多,包括Fluo-3、钙黄绿素、Rhod-2等。荧光指示剂根据测光原理和数据
Cell子刊:让CRISPRCas9基因编辑更廉价的简单技术
来自加州大学伯克利分校的研究人员发现了一种更廉价及简单的方法,让热门的基因编辑工具CRISPR-Cas9靶向切割或是标记DNA。 自3年前发明这一技术以来,由于它能够很容易地结合并切割非常特异的DNA序列、失活基因,CRISPR-Cas9如暴风般横扫基因组学领域。这为靶向基因疗法治愈遗传疾病,
活细胞间接免疫荧光法
一.实验器材:1. 器材:40孔塑料板、40孔板离心机、微量加样器、振荡器、盖玻片、荧光显微镜等2. 试剂:单抗隆抗体(单抗)、荧光标记抗鼠免疫球蛋白、PBS(pH7.2-7.4)、甘油、叠氮钠(NaN3)等二.方法(微量法)1. 将分离好的单个核细胞用PBS洗2次,1000rpm每次10分钟
荧光染料CFSE活细胞标记的特点
荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。其基本原理如下:CFSE能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强
荧光染料CFSE活细胞标记的特点
荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。其基本原理如下:CFSE能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强
化学所在活细胞分子探针研究中取得系列进展
分子识别是生命过程的基础,揭示生物活性分子间识别作用是透彻理解生命过程的重要途径。发展新型识别分子、构筑分子探针,在分子水平上探索生命过程和疾病发生发展机制是现代生化分析领域前沿研究方向之一。 中国科学院化学研究所活体分析化学院重点实验室上官棣华课题组科研人员长期致力于分子探针的开发和分子识别
方显杨研究组与合作者共同开发了一种新型活细胞DNA成像技术
三维基因组互作与表观遗传修饰是基因表达调控的重要因素,其动态变化与细胞生长发育及癌症等疾病的发生发展密切相关。解析染色质在活细胞内的时空动态,是理解基因调控机制的重要科学问题。现有基于CRISPR-Cas系统的成像方法可靶向内源基因序列,但仍受系统复杂性和灵敏度的限制,在非重复序列成像,多位点成
功能纳米荧光探针用于肿瘤细胞检测
恶性肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病之一,目前已成为人类死亡的主要原因,并且其发病率呈逐年上升的趋势。若能早期发现肿瘤并及时治疗,可大大提高肿瘤的治愈率。因此,对于肿瘤的早期检测和诊治已成为各国科学家关注的热点。为了实现肿瘤早期诊治,目前研究大多集中于检测活细胞内一种肿瘤标志物,这可能会带来“假
细胞骨架的荧光探针标记方法
细胞骨架主要有微管(micmtuble, MT),微丝(microfilament, MF),中间丝(intermediate filament, IF三种类型。它们分别由不同的蛋白单体组装而成,其中微管蛋白(tubulin)、肌动蛋白(actin)、波形蛋白(vimentin)等是细胞骨架的重要组
《Nature-Chemistry》新化学探针,高通量实时关注活细胞动态
“回顾历史,过去40到50年,抗生素的发现几乎是停滞的,没有人真正发现过某种全新的抗生素,”领导这项研究的化学家Michael VanNieuwenhze说。“全球抗生素耐药问题一刻不停地威胁着公共卫生,我们认为解决这一问题的新方法,包括我们研发的方法,具有重大价值。”Michael VanNi
全自动活细胞实时荧光成像系统概述
全自动活细胞实时荧光成像系统是一种用于生物学领域的分析仪器,于2018年12月11日启用。 1、显微镜采用全封闭箱式设计,并可通过机身TFT触摸屏进行自动进样,调用预设实验程序自动进行成像实验。 2、全自动成像方式,无需任何手动调节即可实现普通明场、斜照明和高衬度浮雕效果PGC成像,并可在荧
组建CRISPRCas9库,让标记DNA和靶向切割更精准
CRISPR-Cas9系统,被称为第三代基因编辑技术。自3年前发明这一技术以来,由于它能够很容易地结合并切割非常特异的DNA序列、失活基因,CRISPR-Cas9如暴风般横扫基因组学领域。这为靶向基因疗法治愈遗传疾病,及发现疾病的病因带来了巨大的希望。 相比于它的两位前辈ZFN系统和TALEN
细胞凋亡检测实验——荧光探针双标记法
实验方法原理本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,
活细胞荧光染色后细胞形态变圆是什么原因
不固定直接染色,细胞就会变圆,因为染色液的渗透压和细胞质不一样可以选择用CFSE染色后,铺板。过夜,等细胞重新贴壁后,再用PI染色,你应该是要看双染的效果,这个比较合适。用荧光显微镜观察的时候可以先观测拍照再固定,避免甲醇影响了细胞状态让它贴的不牢,或者不固定直接拍照,PI染色效果一个小时影响不大。
化学所在新型光学探针与活细胞成像分析方面取得进展
由于基于光学探针与分析物的作用而引起光信号变化的传感、成像分析具有高灵敏度、高时空分辨能力等特点,目前已广泛用于化学、生命、环境、食品、医药等领域。性能优良的光学探针是构筑各种新型光学传感与成像分析方法的物质基础,因而一直受到人们的关注。 在国家自然科学基金委、科技部和中科院的大力支持下,
荧光探针有毒吗
有毒的。在紫外-可见-近红外区有特征荧光,并且其荧光性质可随所处环境的性质,如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子。
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别 荧光原位杂交技术问世于70年代后期,其曾多用于染色体异常的研究,近年来随着FISH所应用的探针钟类的不断增多,特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现,使FISH技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如基因诊断基因定位等 。原
马涵慧博士再发CRISPR研究成果
最近在《Journal of Cell Biology》发表的一项研究中,美国麻省大学医学院的科学家,揭示了“CRISPR-Cas9机器在活细胞内如何运作”的重要新细节,对于开发使用强大基因编辑工具的治疗方法,具有重要的意义。 本文通讯作者、生物化学与分子药理学教授Thoru Pederson
科学家发展细胞膜“缓冲荧光探针”
近日,中国科学院大连化学物理研究所副研究员乔庆龙和研究员徐兆超团队发展了组装介导的细胞膜缓冲荧光探针,实现了对细胞质膜的长时间稳定标记和超分辨动态荧光成像,观察到了质膜丝状伪足的动态运动和细胞外囊泡的分泌过程,发现了两种细胞外囊泡的融合模式,为细胞质膜的超分辨动态成像提供了工具。相关成果发表在ACS
科学家发展细胞膜“缓冲荧光探针”
近日,中国科学院大连化学物理研究所副研究员乔庆龙和研究员徐兆超团队发展了组装介导的细胞膜缓冲荧光探针,实现了对细胞质膜的长时间稳定标记和超分辨动态荧光成像,观察到了质膜丝状伪足的动态运动和细胞外囊泡的分泌过程,发现了两种细胞外囊泡的融合模式,为细胞质膜的超分辨动态成像提供了工具。相关成果发表在ACS
Science:新方法在活细胞中改变基因组
来自MIT Broad研究所和Rockefeller大学的研究者发展了一种新的方法,能够在活细胞内精确地增减基因,从而操作基因组。研究人员称,这项技术可以提供一种简单易行,并且相对低价的方法来从事各项研究,包括设计能够产生生物能源的有机体,设计动物模型来研究人类疾病,发展新的治疗方法等。
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白
在过去的五年中,荧光蛋白在监测体内生物学研究中,起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是zui早被我们应 用的荧光蛋白,但是随着时间的推移,现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富,包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋 白。它们都可以
荧光探针技术的概念
受到激发光激发后,从激发态单重态回到基态,在紫外-可见-近红外区有特征发光,称之为荧光。荧光性质(激发和发射波长、强度、寿命、偏振等)可随所处环境的性质,如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子,被称为荧光探针。荧光探针分类很多,可以根据材料属性分为有机和无机探针,可以根据探针尺寸分为