NatureMethods：单细胞RNAseq方法的比较
随着大家对单细胞转录组分析的兴趣日益增加，开展单细胞RNA-seq的方法也在不断涌现。近日，斯坦福大学的研究人员比较了市场上各种单细胞RNA扩增方法，以系统评估单细胞RNA-seq方法的灵敏度和准确性。他们的研究结果发表在《Nature Methods》在线版上。 目前，整个转录组的高通量测序(RNA-seq)已广泛用于各种组织的基因表达分析。然而，人们开展单细胞转录组分析的愿望也越来越强烈，这是因为有些细胞量少珍贵，不足以开展传统的RNA-seq，也有人希望对异质群体中的细胞亚群开展分析。过去的基因表达“平均值”已不再能满足人们的需求。 近年来，开展单细胞RNA-seq的各种方法时有报道，但关于这些方法的通量和性能还存在一些问题。比如说，性能主要是通过灵敏度和精确性来评估的。然而，为了评估测定方法的有效性，还应当评估准确性，即测量值与真实值之间有多接近。 为此，斯坦福大学生物工程系的Stephen R......阅读全文
Webinar单细胞和空间多组学微流控样品制备和质谱分析
2022年CASMS系列网络研讨会——推进单细胞和空间多组学微流控样品制备和质谱分析美国东部时间2022年8月18日12：00-13：00北京时间2022年8月19日0：00-1：00注册链接:https://casms.org/index.php/webinar演讲者 单细胞蛋白
单仪细胞转录组制备的技术指标及功能
技术指标 将 C1 应用于单细胞 mRNA 测序，可以从多个细胞个 体平行处理多达 96 个 cDNA 文库，在任何 Illumina 测序仪上对 mRNA表达进行相对定量。此系统的主要特征包括： 高通量 -可对 96 个单细胞进行大规模平行、连贯的制备， 引入条形码序列标记（Barcode
蛋白表达
Protein Construct Expression and Purification Procedures (Gimila's Lab) Protein Expression (Mark's Lab) · Purification of GST Fused
差异表达
· What's Differential Display (GenHunter)Introduction to differential display technique· Differential Display (Chun-Ming Liu)The f
CloneSelect 单细胞分离系统 OR 传统单细胞克隆方法
CloneSelect™ Single-Cell Printer™ f.sight™ （ f.sight ）被开发用于满足这些需求， 它可以柔和地接种单个细胞至微孔，同时记录整个细胞接种过程，提供单克隆性的图像证据以及优异的接种后细胞生长用于细胞株开发在这个研究中，我们开展了六组实验，用无血清培养基
单细胞分离系统 OR 传统单细胞克隆方法对比
随着监管机构对细胞株开发的要求愈加严格，研究人员被要求开展单细胞克隆并提供细胞株源于单个细胞的证据（ 即单克隆性的证据 ）。 有限稀释是一个普遍接受的建立单克隆性的方法，它基于统计概率因此只有很少一部分（ 10-30% ）的微孔能被接种单个细胞。流式细胞分选是另一种传统的克隆方法，它可以高效地接种单
单细胞分离对单细胞测序领域的作用
单细胞分离可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移到合适的培养基进行培养，分离法对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中采用。 它不仅仅可以用于分离单细胞，还可以用于nl级别试剂的分配和磁珠的分选，对于单细胞测序领域有着很大的帮助。快速高效接种单个活细胞至
影响表达杆状病毒表达的因素
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素：①该目的基因应不含内含子；②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列；③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如Kozak 序列）
甲醇酵母表达系统的高效表达特性
已有多种蛋白质的基因在该表达系统中克隆成功，包括蛋白酶、酶抑制剂、受体、单链抗体等。尽管各种外源蛋白质产生的水平不一，但各种蛋白质在甲醇酵母中的产生水平均为在细菌、昆虫或哺乳动物等表达系统中产量的10～100倍[2]。如表皮生长因子（EGF）在酿酒酵母中的产量为7.4mg/L，而在甲醇酵母中为4
单细胞RNA测序，众多研究都pick它
多细胞测序和单细胞测序，你pick谁？如今，大多数研究人员也许会选择后者，因为不一样的角度，会带来不一样的见解。 多细胞测序和单细胞测序，你pick谁？如今，大多数研究人员也许会选择后者，因为不一样的角度，会带来不一样的见解。单细胞测序的最初动力来自癌症研究，可帮助人们了解肿瘤异质性和肿瘤微环
一个完全不同的视野——单细胞研究最新进展
由冷泉港亚洲主办的单细胞基因组学前沿学术会议（Frontiers in Single Cell Genomices）日前在苏州独墅湖会议酒店举行。美国科学院院士、斯坦福大学Stephen Quake教授作为本次会议的重要特邀嘉宾，在会上做了精彩演讲。 Quake教授谈到，近几年随着单细胞测序技
单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤
单细胞凝胶电泳（single-cell gel eiectrophoresis，SCGE）又称慧星试验（comet assay）是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B.等人成功地用于检验DNA单链断裂以来，经过不断的改进，已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法，广泛地应用
Namocell单细胞分离仪应用介绍——藻类单细胞分离
Namocell单细胞分离仪最新应用：随着人们对环境研究的不断深入，研究人员逐渐将目光转向藻类的单细胞层面：有些需要对藻类进行单细胞级别的分析（如藻类单细胞测序等），也有需要对单细胞藻类进行培养。这样就面临一个棘手的问题，那就是如何获取藻类的单个细胞。通常实验室里的方式，是在显微镜下用毛细管吸取。这
关于蛋白表达系统—昆虫表达系统的介绍
昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统，它具有同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。昆虫杆状病毒表达系统是国内外十分推崇的真核表达系统。利用杆状病毒结构基因中多角体蛋白的强启动子构建的表达载体，可使很多真核目的基因得到有效甚至高水平的表达。它具有真核表达系统的翻译后加
无细胞表达系统——难度蛋白表达的福音
1964年有两个人开创了体外蛋白表达的先河，这两个人的名字大家必定不会陌生—马太和尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64种翻译密码子。从此，体外蛋白表达开始为科学界所关注，不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差，使其未能得到进一步发展。到80年代中期Spirin等对其进
关于蛋白表达系统—植物表达系统的介绍
植物能够表达来自动物、细菌、病毒以及植物本身的蛋白质易于大规模培养和生产，且在基因表达与修饰及安全性方面有特别的优势，因此利用植物生产外源蛋白质的研究展现了极其诱人的前景。多种抗体、酶、激紊、血浆蛋白和疫苗等都已通过基因工程的手段在植物的叶、茎、根、果实、种子以及植物细胞和器官中得到表达，然而提
无细胞表达系统——难度蛋白表达的福音
1964年有两个人开创了体外蛋白表达的先河，这两个人的名字大家必定不会陌生—马太和尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64种翻译密码子。从此，体外蛋白表达开始为科学界所关注，不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差，使其未能得到进一步发展。 到80年代中期Sp
翟继先团队开发植物单细胞核全长RNA检测技术－
近年来，高通量单细胞转录组测序已广泛应用于动物细胞研究，但只在少数植物物种和组织的研究中存在报道。其主要原因是因为植物细胞比动物多了一层细胞壁，使得植物单细胞RNA-seq必须先消化细胞壁并制备原生质体。而原生质体的制备对于许多组织都非常困难，且制备过程会影响细胞的转录状态而引入不必要的干扰。因
翟继先团队开发植物单细胞核全长RNA检测技术－
近年来，高通量单细胞转录组测序已广泛应用于动物细胞研究，但只在少数植物物种和组织的研究中存在报道。其主要原因是因为植物细胞比动物多了一层细胞壁，使得植物单细胞RNA-seq必须先消化细胞壁并制备原生质体。而原生质体的制备对于许多组织都非常困难，且制备过程会影响细胞的转录状态而引入不必要的干扰。因
单细胞是什么
单细胞既可以指单细胞生物，比如细菌等，也可以指从多细胞生命体分离的单个细胞，比如实验室培养的人体细胞等。此外，受精卵也是单细胞，属于可以发育成完整生命体的全能干细胞。
什么是单细胞？
单细胞生物 生物可以根据构成的细胞数目分为单细胞生物（Protozoa）和多细胞生物（Metazoa）。单细胞生物只由单个细胞组成，个体微小，用肉眼很难看的见，大多数单细胞生物生活在水域环境中，有些寄生在我们身上。单细胞生物靠分裂繁殖（酵母菌在适宜的环境下出芽繁殖）单细胞生物包括所有古细菌和真细菌和
单细胞的作用
在人体组织中有着令人难以置信的细胞类型、状态和相互作用的多样性。为了更好地了解这些组织和存在的细胞类型，scRNA-seq 提供了在单个细胞水平上研究表达情况的可能。scRNA-seq 可以用来：探索组织中存在哪些细胞类型识别未知/稀有细胞类型或状态阐明分化过程中或跨时间或跨状态的基因表达变化鉴定特
单细胞是什么
单细胞既可以指单细胞生物，比如细菌等，也可以指从多细胞生命体分离的单个细胞，比如实验室培养的人体细胞等。此外，受精卵也是单细胞，属于可以发育成完整生命体的全能干细胞。
什么是单细胞
单细胞生物 生物可以根据构成的细胞数目分为单细胞生物（Protozoa）和多细胞生物（Metazoa）。单细胞生物只由单个细胞组成，个体微小，用肉眼很难看的见，大多数单细胞生物生活在水域环境中，有些寄生在我们身上。单细胞生物靠分裂繁殖（酵母菌在适宜的环境下出芽繁殖）单细胞生物包括所有古细菌和真细菌和
单细胞分离技术
单细胞测序日趋火爆的原因很大程度上得益于单细胞分离技术的不断完善。这一讲，我们将跟大家一起回顾传统的单细胞分离技术，并重点介绍单细胞分离技术的新宠微孔芯片技术及微流控技术。图1为目前常见单细胞分离设备。图1：目前常见单细胞分离设备传统单细胞分离技术相信许多实验人员，都见过下面我们要介绍的传统的单细胞
siRNA表达框架
siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一个RNA polⅢ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol I
性状的表达
一个人所表现出来的性状，是由基因通过转录和翻译等过程，控制蛋白质的合成所表现出来的。但是性状的表现是基因和外界环境的共同作用， 以基因为主，外界环境为辅。
原核表达
将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人
原核表达
基因克隆技术 实验方法原理 一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂，如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测