新方法可批量制备可再生抗体
科学家近日在《自然—方法学》上撰文称,他们找到一种用于研究基因组调控的高质量可再生抗体的制备方法。该方法可用于解决“抗体瓶颈”问题——目前用于检测基因表达调控蛋白的抗体都不可再生且无法特异识别目标。 能够调控基因表达的不仅仅是组成DNA的四种碱基,与DNA有关的蛋白特别是组蛋白也能调控。这些组蛋白的化学修饰比如在一种特定氨基酸中增加甲基团等,可以影响DNA中编码的基因是否得到表达。研究人员非常依赖于抗体来识别这些组蛋白受到的特定修饰以了解其对基因组调控的影响。 但目前的挑战在于,这些抗体大多经过不同批次从动物体内产生获得,而每批次之间存在着较大的质量变化。一旦某批次质量好的抗体用完了,下一批次的质量就不见得能保持当前水准了。 Shohei Koide等人放弃通过动物进行抗体生产,转而利用遗传手段在细菌体内制造具有高识别度的重组抗体以用于组蛋白的特定修饰。通过与市场上用动物制成的抗体相比较,这种新抗体的表现......阅读全文
如何铸就抗体的质量
现在市面上抗体的厂家繁多,竞争激烈,如何能在众多厂家中挑选质量上乘,价格到位的抗体呢?影响抗体的质量有如下几个方面: 一、抗原的设计抗原的设计是影响抗体质量的首要因素,抗原的质量好坏直接影响到抗体的应用结果,如抗体的特异性等。二、家兔的免疫和饲养 三、抗体的纯化 如何从家兔的血清中提取纯度高的
抗体基因重排
抗体的L链是由C、V、J三个基因簇编码的,H链由C、V、D、J四个基因簇编码的。V是编码可变区,有300个种类;D编码高变区,有15 ~ 20个种类;J编码连接V、C的结合区,有4~5个种类;C编码恒定区,仅有一种。这些外显子通过多种多样的重排,所合成出的肽链,还要再进一步进行L和H链组合,这样
抗原抗体反应抗体基因文库
抗体基因文库(antibody recombination library)是将不同的重链和轻链基因随机组合,克隆到合适的表达载体中,在原核细胞表达不同的抗体,形成一个抗体库,从这个抗体库中,用抗原可以筛选到相应的抗体基因。抗体基因来源于杂交瘤细胞或动物B细胞(免疫或未免疫)的DNA和mRNA。
抗原抗体反应抗体基因的改造简介
将鼠源抗体的V区基因与人源抗体C区基因重组,获得的嵌合抗体(chimericalantibody),可保留鼠抗体对抗原的高亲和性,又减弱鼠源抗体对人的免疫原性,提高治疗性抗体的效果。 重组的嵌合抗体基因转化骨髓瘤细胞或中国地鼠卵细胞(CH0),可在其中表达。为了进一步地消除鼠抗体V区框架区(F
REAfinity重组基因工程抗体REA抗体
REAfinity流式抗体,即Recombinant Engineered Antibody(重组基因工程改造抗体),经基因工程改造,对Fc段序列进行点突变,使其不会对FcR受体产生非特异性的结合。序列优化和突变后,使得REA抗体与传统大鼠、小鼠单克隆抗体相比优势明显。 1 |
抗原抗体的基因重排
抗体的L链是由C、V、J三个基因簇编码的,H链由C、V、D、J四个基因簇编码的。V是编码可变区,有300个种类;D编码高变区,有15 ~ 20个种类;J编码连接V、C的结合区,有4~5个种类;C编码恒定区,仅有一种。这些外显子通过多种多样的重排,所合成出的肽链,还要再进一步进行L和H链组合,这样
酶标抗体的质量鉴定与保存
1.酶活性和抗体效价测定: 采用双向免疫扩散法(稀释抗体)和DAB-H2O2 显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。 2.酶量和IgG量: 酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94
酶标抗体的质量鉴定与保存
1. 酶活性和抗体效价测定 采用双向免疫扩散法(稀释抗体)和DAB-H2O2显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。 2. 酶量和IgG量 酶量(mg/ml)=OD403´0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402´0.42)´0.94´0.62
酶标抗体的质量鉴定与保存
1. 酶活性和抗体效价测定采用双向免疫扩散法(稀释抗体)和DAB-H2O2 显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。2. 酶量和IgG量酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94′0.62其中,0.42为酶蛋白本身
基因工程抗体的制备
抗体的化学修饰: 抗体Fc段用双功能连接剂与荧光素,同位素,酶,发光化合物,稀土元素以及药物,毒素等连接后,并不影响其Fab功能区与特异性抗原结合。根据交联物的性质不同,标记的抗体可用作诊断试剂,也可作为药物的定向载体,引导药物或毒素到达抗原存在部位使药物或使毒素发挥更有效的作用,即俗称“生物
基因工程抗体的制备
抗体Fc段用双功能连接剂与荧光素,同位素,酶,发光化合物,稀土元素以及药物,毒素等连接后,并不影响其Fab功能区与特异性抗原结合。根据交联物的性质不同,标记的抗体可用作诊断试剂,也可作为药物的定向载体,引导药物或毒素到达抗原存在部位使药物或使毒素发挥更有效的作用,即俗称“生物导弹”。从而减少药物
基因工程抗体的优点
①通过基因工程技术的改造,可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应;②基因工程抗体的分子量较小,可以部分降低抗体的鼠源性,更有利于穿透血管壁,进入病灶的核心部位;③根据治疗的需要,制备新型抗体;④生产成本低。
与单克隆抗体相比基因工程抗体的优点
与单克隆抗体相比,基因工程抗体具有如下优点:1.通过基因工程技术的改造,可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应;2.基因工程抗体的分子量较小,可以部分降低抗体的鼠源性,更有利于穿透血管壁,进入病灶的核心部位; 3.根据治疗的需要,制备新型抗体;4.可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达方式,大量表
基因工程抗体技术的应用
1、生物传感器:生物传感器主要用于测定抗原和抗体的亲和力。它利用抗体与抗原相互作用引起的细胞质表面共振来改变偏振光的反射。与传统方法相比,它可以描述曲线并提供显示动态变化的信息。2、噬菌体文库技术的进展:过去,大多数材料是抗病毒抗体。由于病毒具有很强的抗原特异性,很容易筛选出相应的抗体。此外,该方法
关于抗原抗体的基因重排介绍
抗体的L链是由C、V、J三个基因簇编码的,H链由C、V、D、J四个基因簇编码的。V是编码可变区,有300个种类;D编码高变区,有15 ~ 20个种类;J编码连接V、C的结合区,有4~5个种类;C编码恒定区,仅有一种。这些外显子通过多种多样的重排,所合成出的肽链,还要再进一步进行L和H链组合,这样
Nature-Methods:高质量的组蛋白PTM抗体
美国芝加哥大学的研究人员开发出质量稳定的重组抗体,能特异识别组蛋白H3的三甲基赖氨酸残基,适合各种表观遗传学应用。这一成果于近日发表在《Nature Methods》在线版上。 组蛋白的翻译后修饰(PTM)在表观遗传调控中发挥重要作用。组蛋白PTM的抗体是表观遗传学研究(如染色质免疫沉
实验室准则:抗体质量的金标
几乎所有实验室都会用到抗体,抗体不仅是生命科学研究的重要工具,在免疫学诊断领域也是不可或缺的。市面上的抗体种类繁多同时也良莠不齐,由于缺乏评估抗体质量的标准方法,人们过去只能依赖于生产厂家的信用。 做过免疫荧光、免疫沉淀(IP)或者Western blot实验的人都知道,抗体优劣对实验结果有
2018年全国HIV抗体试剂质量报告发布
国家卫生健康委疾控局: 按照国家卫生健康委《全国艾滋病检测工作管理办法》要求,我中心组织完成了2018年全国艾滋病病毒(HIV)抗体诊断试剂临床质量评估工作。本次评估的对象是从国内市场随机抽取的43种HIV抗体筛查试剂(按检测标志物和原理分为3类),主要情况如下: 一、评估结果 (一)HI
HIV抗体检测实验室的质量管理
建立运行良好的质量管理体系是保证全国高质量艾滋病检测实验室工作的重要因素。主要内容包括HIV实验室检测的质量保证(quality assurance,QA),质量控制(quality control,QC)和质量评价(external quality assessment,EQ
我国已掌握埃博拉病毒抗体基因
8月7日,国家卫生计生委召开例行新闻发布会,介绍了新农合大病保险、重大新药创制、住院医师培训、埃博拉病毒等有关情况。 2013年,全国参加新农合人数为8.02亿人,参合率达到99%。截至2014年5月底,农村居民大病保险试点工作已覆盖全国50%以上的县(市、区),其中,山东、天津、吉林、甘肃、
青年博士Science解析抗体分泌关键基因
La Jolla过敏与免疫学研究所,加州大学圣地亚哥分校医学院,耶鲁大学医学院细胞生物学系,等处的研究者在Science 在线版上发布最新免疫学研究成果,Bcl6 and Blimp-1 Are Reciprocal and Antagonistic Regulators of T Follic
基因工程抗体的概念和应用
基因工程抗体是指利用基因工程技术将抗体基因重组和克隆到表达载体中,并在合适的宿主中表达和折叠成功能性抗体分子。基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强、成本低等优点。该技术的基本原理是从杂交细胞、免疫脾细胞和外周血淋巴细胞中提取mRNA,反转录成cDNA,然后将扩增的重链和轻链基因抗体分别进行P
基因工程重组抗体技术的研究
在抗体研究的漫长过程中,相继发展了三代不同水平的抗体制备技术。其中以抗原免疫高等脊椎动物制备的多克隆抗体,称为第一代抗体;通过杂交瘤技术生产的只针对某一种特定抗原决定簇的单克隆抗体,称为第二代抗体;应用重组DNA技术或是基因突变的方法改造某种抗体基因的编码序列,使之产生出自然界中原本存在的抗体蛋白质
关于抗原抗体反应基因工程抗体在真核细胞中的表达
噬菌体表达的抗体片段常常是在原核细胞()中完成。原核系统表达抗体片段产量高,成本低,快速易于操作。但抗体片段在原核表达系统中不能进行CH2糖基化,从而影响抗体的活性。因此重组抗体基因片段可转移至适合的骨髓瘤细胞系或哺乳动物细胞系(如CHO),甚至于植物细胞中表达,可以得到与淋巴细胞表达相同的抗体
高质量黑麦基因组揭示重要的农艺基因
Nature Genetics 2021年3月18日,由河南农业大学王道文研究员团队联合多个单位共同破译黑麦基因组。相关研究成果“A high-quality genome assembly highlights rye genomic characteristics and agronomi
怎样对基因组DNA质量检测
怎样对基因组DNA质量检测用凝胶电泳看,有没有质白质和RNA等物质的污染,还可以测OD,用OD260/280来判断,当OD260/OD280< 1.8,表示蛋白质含量较高当OD260/OD280> 2.0,表示RNA含量较高当OD260/OD280=1.2.0,表示DNA较纯
高质量基因捕获测序如何实现?
近十几年来,NGS(二代测序技术)的快速发展使得DNA测序成本大幅降低,然而就现阶段而言,全基因组重测序的成本依然很高,且得到的海量数据分析速度缓慢,无法大规模地应用。靶向测序技术可以将感兴趣的基因组区域富集出来测序,单个样本测序数据产出少且分析速度较快,因此更能经济高效地发挥NGS技术的优势,广泛
浅谈ELISA夹心法中抗体质量的重要性
理论上使用公认选择的亲和纯化抗体可得到高特异性,高敏感度的免疫测定。然而,由于经济原因或是缺乏合适的试剂,使得许多工作者采用低纯度的制品,这种试剂通常含有与试验中其它成分起交叉反应的抗体。现已发现在用抗人IgG抗血清的抗体时,抗体中含有不需要的抗体交叉反应。但当使用亲和纯的抗血清时,交叉反应不明显。
抗体偶联药物(ADC)生产用原材料的质量控制
抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)是通过连接子(linker)将具有生物活性的小分子药物偶联至单克隆抗体(单抗)上而产生的。 生产用原材料的控制 单抗:ADC 的单抗生产及控制应依据“人用重组单克隆抗体制品总论”及“人用单克隆抗体质量控制技术指导原则”,采
酶标抗体法—转基因检测的介绍
检测转基因物质的双抗体夹心ELISA具备多克隆抗体费用较低。单克隆抗体亲和力高的特点,使得后续研究开发的试剂盒检测成本低廉,灵敏可靠,而且可以稳定、方便地提供标准化试剂,便于实现工业化生产。双抗体夹心ELISA检测方法的研究和建立,为制备免疫胶体金试纸条提供了便利,为建立转基因动物的现场、快速查