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北大谢晓亮教授Cell发表最新成果

有证据表明,高度表达基因以随机爆发的形式转录,这一现象也被称为转录爆发(Transcriptional bursting)。但迄今为止,人们并不清楚这种广泛存在的现象是如何发生的。 为了在细菌中研究转录爆发的具体机制,哈佛大学和北京大学生物动态光学成像中心的研究人员开发了一个高通量的单分子分析技术,对各DNA模板的体外转录进行了跟踪研究。这一成果于七月十七日发表在Cell杂志上,文章的通讯作者是著名学者谢晓亮教授(X. Sunney Xie)。 谢晓亮教授是单分子生物物理化学和相干拉曼散射显微成像的开拓者之一,其研究组在离体实验及活细胞内生物系统在单分子水平的动力学研究方面取得了不少重要的成果,尤其是单分子荧光显微技术,比如相干拉曼显微成像技术(CARS、SRS)等方面成果斐然。近年来,他又在单细胞测序技术上取得突破,发表了不少重要成果。 研究人员在这项研究中发现,DNA片段在转录过程中建立的正超螺旋,会减慢转录的延伸......阅读全文

Science:跳跃的DNA螺旋

  研究人员证实DNA超螺旋是能够远距离“跳跃”的动态结构,这一现象有可能影响了基因调控。   科学家们对于长链DNA如何包装到狭小空间中的理解变得更为复杂了一些。一项关于单分子DNA的新研究证实超螺旋可通过沿着一条DNA链“跳跃”来移动。研究结果发布在9月13日的《科学》(Science)杂志上

外源基因在真核细胞中的表达系统

1. 真核生物表达的优越性和必要性① 真核生物具有转录后加工系统,可识别并删除基因中的内含子,剪切加工为成熟mRNA.②具备完善的翻译后加工系统,可进行糖基化、乙酰化等修饰,使蛋白形成正确的天然构型,因而真核生物表达系统产生的蛋白更接近天然状态,有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核细胞可将基因表

克隆基因的表达(expression of cloned gene)-3

(3)原核生物的基因组基本上是单倍体,而真核基因组是二倍体。(4)如前所述,细菌多数基因按功能相关成串排列,组成操纵元的基因表达调控的单元,共同开启或关闭,转录出多顺反子(polycistron)的mRNA;真核生物则是一个结构基因转录生成一条mRNA,即mRNA是单顺反子(monocistron)

分子生物学常用实验技术(page 1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分

分子生物学常用实验技术(page 3)

分子杂交技术    互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN

近物所用新方法揭示电离辐射对线粒体DNA超螺旋构象影响

  中科院近代物理研究所辐射生物医学研究组的科研人员研究发现,电离辐射能够引起显著的线粒体DNA超螺旋构象变化,这对进一步研究电离辐射对线粒体功能的影响具有指导意义。  线粒体DNA是人体细胞中唯一的核外遗传物质,线粒体DNA构象的变化可能通过影响线粒体功能而导致细胞命运的改变。目前

原子力显微镜(AFM)的应用有哪些?

p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; line-height: 19.0px; font: 13.0px 'Helvetica Neue'}随着科学技术的发展,生命科学开始向定量科学方向发展。大部分实验的研究重点已经变成生物大分子,特别是核酸和蛋白质的结构及其

F1000推荐中科院973项目新成果

  “F1000(Faculty of 1000 Medicine)”又名“千名医学家”,是由美国哈佛大学和英国剑桥大学等全世界2500名国际顶级医学教授组成的国际权威机构。   来自中科院动物研究所的研究人员发现转录能够远程诱导DNA产生G-四链体结构,这表明基因组DNA双链中下游基因的转录

表观遗传修饰的细胞中DNA发生B-Z构象转变被揭示

  细胞核中,缠绕在组蛋白上的双链DNA一般以右手螺旋的B-DNA构象存在,但也会存在其它构象。组蛋白的乙酰化修饰是表观遗传学研究的重要内容。当组蛋白发生乙酰化时,DNA 与组蛋白八聚体的紧密缠绕被解开。那么,组蛋白的乙酰化是否影响DNA的构象,甚至导致B-DNA构象向其它构象包括Z-DNA构象转化

分子杂交技术 -1

互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。  杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方

动物所发现转录能够远程诱导DNA产生G-四链体结构

  含有连续鸟嘌呤碱基的核苷酸能够形成G-四链体结构,倾向形成G-四链体结构的序列(PQS)广泛分布在原核生物和真核生物的基因组中,G-四链体结构参与一些重要的生理和病理过程,如DNA的复制,转录和癌症的发生等。然而对于G-四链体结构如何在基因组中产生这一问题仍然不清楚。   中科院动物研究所端粒

真核生物基因组-1

真核生物的基因组比较庞大,并且不同生物种间差异很大,例如人的单倍体基因组由3.16×109 bp组成。在人细胞的整个基因组中实际上只有很少一部份(约占2%~3%)的DNA序列用以编码蛋白质。 第一节 真核生物基因组特点 真核生物体细胞内的基因组分细胞核基因组与细胞质基因组,

质粒DNA的制备和纯化

实验概要质粒(plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1~200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型:

杆状病毒介绍

状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒,病毒粒子呈杆状,基因组为双链环状DNA分子,DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内,大小在90~180 Kb之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。 杆状病毒只来源于无脊椎动物,虽然已发现600多种杆状病毒,但进行

mRNA 3'末端体外加工

            实验材料 对数生长期的 HcLa 细胞 与所使用启动子相对的 RNA 聚合酶 酵母 tRNA 经超卢断裂鲑精 DNA

体外转录合成单链RNA探针

实验方法原理 制备特异性的单链 RNA 探针不仅比 DNA 探针更容易,在杂交反应中一般也比具相同比活性的 DNA 探针产生更强的信号,这可能是由于含有 RNA 的杂合链固有的更高稳定性的缘故(Casey and Davidson 1977)。虽然 DNA 探针仍普遍地应用于 No

体外转录合成单链RNA探针

            实验方法原理 制备特异性的单链 RNA 探针不仅比 DNA 探针更容易,在杂交反应中一般也比具相同比活性的 DNA 探针产生更强的信号,这可能是由于含有 RNA 的杂合链固有的更

北京大学《BJC》文章发表致癌分子机制新发现

来自北京大学肿瘤学院北京癌症研究院,安阳肿瘤医院(Anyang Cancer Hospital)等处的研究人员通过对140个宫颈癌和161个食道癌样品的分析,发现人乳头瘤病毒(humanpapillomavims,HPV) 16的早期转录区E6可以通过Akt 激活p70 S6激酶下游途径的机制来修改

3.9 mRNA 3'末端体外加工

体外实验有两种策略;一是将 包 含 Po ly( A) 位点目标基因的质粒与无细胞提取物共同孵育,以 使 RNA 聚 合 酶 II 转录目标基因,并对最初的转录进行加工;另一种策略是利用标准的噬菌体聚合酶驱动系统合 成 前 mRNA,然后与无细胞提取物共同孵 育 。实验材料对数生长期的 HcLa 细

RNA聚合酶在大肠杆菌细胞内的空间组织及其与转录的关系

  2019年9月16日,PNAS杂志在线发表了约翰霍普金斯大学医学院肖杰博士团队的研究成果,题为“Spatial organization of RNApolymerase and its relationship with transcription in Escherichia coli”。该

RNA聚合酶在大肠杆菌细胞内的空间组织及其与转录的关系

  2019年9月16日,PNAS杂志在线发表了约翰霍普金斯大学医学院肖杰博士团队的研究成果,题为“Spatial organization of RNApolymerase and its relationship with transcription in Escherichia coli”。该

嵌合抗原受体T细胞介绍

  过继性细胞免疫治疗是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方法之一。随着技术的日趋成熟, 已在多种实体瘤和血液肿瘤的临床治疗中取得较好疗效。  摘要: 过继性细胞免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy, ACI)是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方法之一。随着技术的日趋成熟,

mRNA 3'末端体外加工

实验材料 对数生长期的 HcLa 细胞与所使用启动子相对的 RNA 聚合酶酵母 tRNA经超卢断裂鲑精 DNAS1 核酸酶 KlenowDNA 聚合酶仪器、耗材 MWCO3500(1 ml cm) 透析袋Dounce 匀浆器 Gorrex 离心管15 mlFalcon 或 Corning 离心管Ec

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

小鼠β-actin基因的克隆表达(2)

实验步骤:   (1)目的基因与表达载体的连接反应: ①表达载体和目的片段的酶切   管号 ① ② pGEX 4T-1

中科院动物所《PNAS》发表研究新成果

  来自中科院动物研究所的研究人员在斑马鱼中证实Foxn1通过mcm2维持胸腺上皮细胞,支持了T细胞发育。相关论文“Foxn1 maintains thymic epithelial cells to support T-cell development via mcm2 in zebraf

体外转录合成单链RNA探针:体外转录法

体外转录法l        体外转录合成单链RNA探针1.      用适当的限制酶消化超螺旋质粒DNA制备5 pmol的线性模板DNA。取一小份消化的DNA(

HindIII和Bamh1酶切位点保护碱基的详解

用于基因工程的工具酶一,限制性内切酶(Endonucleosase)(一)限制性内切酶(Endonucleosase)的发现与分类1) 50年代初发现细菌能将外来DNA片段在某些专一位点上切断,从而保证其不为外来噬菌体所感染,而其自身的染色体DNA由于被一种特殊的酶所修饰而得以保护,这种现象叫做限制

蛋白质是怎样“梳妆打扮”的

  9月23日,美国伯克利大学教授迈克尔·瑞普(Michael Rape)在《自然》杂志上在线发表了一篇论文,谈到了泛素化修饰依赖的蛋白质翻译的调节决定了细胞的命运。  许多人都知道,细胞内的各种生理生化过程,主要是由蛋白质来负责完成的。一个小小的细胞之内可以含有上百万个蛋白质分子,而蛋白质分子是由

Cell:细胞重编程让小鼠“返老还童”

  众所周知,干细胞在一定条件下可以分化为各种类型的细胞,此外,它们还有一个惊人的能力——永葆青春。来自Salk研究所的研究人员利用干细胞的这种能力延长了早衰小鼠的寿命,并使它们的机体组织重获新生。这项发表于Cell期刊上的突破性研究虽然还不能让人类返老还童,但它的确有潜力让人类的身体在衰老之后保持