吉大解析金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶三维结构

日前,吉林大学韩文瑜课题组与中国科学院生物物理研究所刘志杰课题组合作,解析了首个金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶(LysGH15)的三维结构,并揭示了其裂解金黄色葡萄球菌的分子机制。 目前,金黄色葡萄球菌的耐药性日益严重,尤其是“超级耐药菌株”(MRSA)的出现,给临床治疗带来了巨大的困难。噬菌体裂解酶可以特异地裂解包括耐药菌株在内的细菌,具有极大的研究价值与应用潜力。在前期的研究中,课题组筛选到一株对MRSA具有广谱、高效裂解活性的噬菌体(GH15)。 为了揭示LysGH15裂解MRSA的分子作用机制,研究人员对其三个活性片段(CHAP、amidase-2和SH3b)的蛋白质三维结构进行了解析。研究结果表明CHAP包含一个Cys-His-Glu-Asn四联体活性中心,该活性中心附近具有一个由12个氨基酸组成的Ca2+结合位点。 Ca2+对CHAP片段活性的发挥起到关键的调节作用,对维持三维结构的具有重要作用。Amidas......阅读全文

细胞裂解方法:化学裂解、酶裂解和机械裂解

裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂。这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞,

非同位素分析基因活性实验——冻融裂解细胞荧光素酶分析

实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒PBS仪器、耗材培养皿细胞刮子离心机实验步骤1.  用PBS分别洗3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶质粒的细胞。 2.  每只培养皿中加1 ml 提取缓冲液,立即用橡胶刮子刮下细抱,移至1.5 ml 微量离心管中。离心15~30 s,弃上清。3.  在细胞沉淀中

基因活性的同位素分析实验——原位裂解细胞的CAT分析法

实验材料转染细胞试剂、试剂盒Triton裂解液仪器、耗材培养皿培养箱实验步骤1.  60 mm 培养皿中转染了CAT表达质粒的细胞,用2 ml PBS洗1次。每培养皿加入2 ml 低渗缓冲液,在室温下温育2~5 min。2.  吸去低渗缓冲液,加入400 μl Triton裂解液。用橡胶刮子将细胞刮

质谱裂解机理中的特征裂解方式

有机质谱中的裂解是极其复杂的,但是通过对其质谱裂解方式和机理的探讨研究,我们可以发现有一些特征结构裂解方式在有机质谱的裂解中是普遍存在的,是世界上的大量质谱学家通过对大量的有机质谱裂解方式进行观察、研究后的概括性总结。所以其具有很重要的参考价值和应用价值,所以在有机质谱解析过程中,必须予以遵循,如此

新方法可观察评估光催化活性,有助于水裂解制氢

  光催化剂是水裂解制氢的重要组成部分。日本信州大学和佐治亚理工学院的科学家致力于改进2020年发表的一项钛表面研究。先关研究近日发表于《物理化学杂志C》。  用飞秒脉冲激光辐照二氧化钛及其表面吸附的染料,从染料分子转移到二氧化钛表面,观察到去质子化染料的荧光。  在紫外光的照射下,二氧化钛光催化剂

新方法可观察评估光催化活性,有助于水裂解制氢

  用飞秒脉冲激光辐照二氧化钛及其表面吸附的染料,从染料分子转移到二氧化钛表面,观察到去质子化染料的荧光。图片来源:J. Phys. Chem. C. 2021 American Chemical Society.  光催化剂是水裂解制氢的重要组成部分。日本信州大学和佐治亚理工学院的科学家致力于改进

建立裂解规律

虽然普遍意义上的质谱数据没有唯一解,但只要限定研究的范围和条件,那还是有解可循的。就如化合物的浓度与其UV响应的关系我们是没法知道的,可在一个很窄的范围内,就能用直线来近似他们的关系!那么如何限定质谱研究的范围呢?首先我有几项假设,所有的质谱推理都建立在它们之上:•假设1:结构相似的化合物具有相同或

热裂解气相色谱仪的裂解器

热裂解气相色谱仪是一种反应气相色谱仪,是在严格控制的操作条件下,使高分子有机物迅速高温热裂解,生成可挥发的小分子热裂解产物用气相色谱仪分离分析。裂解器是热裂解气相色谱仪的关键部件,有管式炉裂解器、热丝裂解器和居里点裂解器等。一、对裂解器的要求:1、由于裂解温度不同,裂解产物不同,裂解温度控制要,可重

碱裂解法原理

碱裂解法的原理是:高PH 的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要用碱处

DNA裂解分析实验

琼脂糖凝胶电泳 个体核的PI荧光 乙醇固定后PI染色 JAM分析             实验材料 细胞

罗伯逊裂解的概念

中文名称罗伯逊裂解英文名称Robertsonian fission定  义一条中央着丝粒染色体断裂成两条端着丝粒染色体的过程。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)

碱裂解法原理

碱裂解法的原理是:高PH 的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要用碱处

化学裂解法概述

  化学裂解法是DNA序列分析方法之 一。其反应的基本原理是,基于某些化学试 剂可以使DNA链在1个碱基或2个碱基处 发生专一性断裂的特性,精确的控制反应强 度,使一个断裂点仅存在于少数分子中,不 同分子在不同位点断裂,从而获得一系列大小不同的DNA片段,将这些片段经聚丙烯 酰胺凝胶电泳分离。  在

DNA裂解分析实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 溶解缓冲液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加样缓冲液仪器、耗材 Eppendorf 管移液管琼脂糖凝胶实验步骤 1. 将 5X105 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中,4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟,弃上清。2. 加入 20

热裂解仪简介

  热裂解仪是一种用于化学领域的分析仪器,于2015年11月06日启用。  技术指标  1、脉冲裂解:指单次裂解。灯丝温度:可编程的1℃-1400℃,加热速率:0.01-20.0℃/ms(10-20,000℃/s);2、程序裂解:指多次脉冲裂解。温度由低到高进行裂解,无需再次进样,GC能够启动;3、

DNA裂解分析实验

琼脂糖凝胶电泳 个体核的PI荧光 乙醇固定后PI染色 JAM分析             实验材料 细胞

碱裂解法原理

碱裂解法的原理是:高PH 的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要用碱处

细菌裂解的操作

一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌? 细胞的破碎方法 高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至zui慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。 2.超声波处理法:用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用

碱裂解法原理

碱裂解法是提取质粒的最常用也最有效的方法,是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的。原理:高pH使质粒DNA和染色体DNA变性,同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性,质粒DNA较小,很容易复性成双链。而染色体DNA较大,不会复性,缠结成网状不溶物质,从而可以通过离心除去。方法:依次

制备细胞裂解液

实验流程:1. 收集胰蛋白酶消化的细胞并离心,用PBS清洗。2. 用100μl 裂解缓冲液冰浴溶解沉淀10min(每500000个细胞20μl裂解缓冲液)。3. 10000rpm,4°C离心10min,取上清转移至新管。4. 用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。5. 用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml

热裂解气相色谱仪对裂解器的要求

热裂解气相色谱仪对裂解器的要求:1、由于裂解温度不同,裂解产物不同,裂解温度控制要精确,可重复进行。2、不同的物质需要不同的裂解温度,裂解温度要可调。3、裂解器热容量大,升温速度快。4、裂解器与接口的体积小,以减小死体积,防止色谱峰展宽。5、对裂解反应无催化反应,防止歧化反应和二次反应。

32-P-标记裂解培养细胞实验——SDS煮沸法裂解细胞

实验材料待标记的培养细胞固相化金黄色葡萄球菌(可选)试剂、试剂盒37℃标记培养液1 Ci/ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) /磷酸盐平衡盐水(PBS)SDS裂解缓冲液RIPA 校正液免疫沉淀洗液仪器、耗材橡皮细胞刮子Sorvall 冷冻离心机(或其他)树脂玻

什么是化学错配裂解?

中文名称化学错配裂解英文名称chemical mismatch cleavage;CMC定  义一种测定基因突变的方法。即将同位素标记的野生型DNA分子和突变型DNA或RNA片段混合变性,复性时可形成DNA-DNA或DNA-RNA异源双链、化学修饰突变部位的错配碱基、氮杂环己烷裂解被修饰的DNA片段

关于裂解疫苗的概述

  裂解疫苗中含有数量极少的物质可以刺激免疫系统产生抗体和专门作用于特定的病毒或细菌的细胞。免疫系统储存这些信息,此时,在体内产生少量记忆B细胞。过后,甚至许多年以后,当接受过免疫的人暴露在细菌或病毒的时候,记忆B细胞会刺激免疫系细胞因子统释放大量的抗体,做出快速有效的免疫应答。

裂解办法抽提核酸

裂解办法抽提核酸含蛋白酶的裂解办法,还是可以觉得是抽提基因组DNA 的首选。裂解涵盖膜蛋白的游离和与基因组DNA 衔接接的氨基酸的游离。蛋白酶的效用是使氨基酸变小,因而对氨基酸的游离有很大的增进效用;同时,很大的基因组DNA 是很容易“缠”住大分子的物品的,氨基酸被蛋白酶克化变小后,则不由得易被基因

裂解器类型有哪些?

裂解器类型1、管式炉裂解器管式炉裂解器通常由一个外壁加热的石英管制成,采用电热丝加热,裂解温度在300~1000℃,恒温精度高。当炉温达到设定温度时,将样品置于铂金小舟内,用推杆将铂金小舟送人裂解炉,样品不与管壁接触。管式炉裂解器结构简单,可定量进样,操作方便,裂解温度连续可调。但升温速率不可调,死

热裂解器特点介绍

热裂解器是热裂解气相色谱仪的关键部件,有管式炉裂解器、热丝裂解器和居里点裂解器等。 1、管式炉裂解器:管式炉裂解器通常由一个外壁加热的石英管制成,采用电热丝加热,裂解温度在300~1000℃,恒温精度高。当炉温达到设定温度时,将样品置于铂金小舟内,用推杆将铂金小舟送人裂解炉,样品不与管壁接触。管式炉

热裂解仪的特点

热裂解仪的特点:1、分离效率高: 热裂解气相色谱仪大都使用毛细管色谱柱,可以对复杂的裂解产物进行有效的分离,尤其是高分子有机物之间的微小差异,聚合物材料中的微量组分,都能在裂解色谱图上灵敏地反映出来,找到相应的特征。2、灵敏度高: 热裂解气相色谱仪一般采用氢火焰离子化检测器,灵敏度很高。3、样品用量

细胞裂解液怎么配制

裂解细胞的话:新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:先配150 mM NaCL+ 1% NP-40 (去垢剂) + 0.1% SDS (去垢剂)+2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)+2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)或1 mM PMSF

热裂解技术有望变废为宝

  近年来,废轮胎热裂解工艺技术不断规范,技术装备水平不断提升,热裂解行业的生产条件已经发生了质的飞跃。从长远看,要使热裂解在废轮胎循环利用中产生更大价值,避免个别市场主体“跑偏”,重走“土法炼油”的老路,既要有高技术支撑,更要有不断完善的政策法规体系保驾护航  走进位于山东省邹平县的山东开元润丰环