iTRAQ蛋白质组学研究原理、优势及实验流程（二）

“那iTRAQ的原理是什么，有哪些优势？”

“iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）技术由美国AB SCIEX公司研发，最早于2004年美国质谱年会上被提出，是一种基于体外等重同位素标记的相对定量技术。该技术利用同位素试剂标记多肽，经高分辨质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白质表达量，同时兼具灵敏度高、分离能力强、适用范围广、高通量、结果可靠和自动化程度高等优点。iTRAQ 技术已成为目前定量蛋白质组学中一个十分重要的技术，其作用已经在许多生物体和组织研究中得到证明。

iTRAQ试剂由三部分组成：报告基团（Report Group），平衡基团（Balance Group）和肽反应基团（Peptide Reactive Group）。肽反应基团可与肽段N-端或赖氨酸侧链发生反应形成共价键从而完成对肽段的标记。”

大尾巴狼：“这不挺好吗，再好好改改，端午节后上班之前必须给我！”

……

节后上班前一天晚上，我点了大尾巴狼的秋秋……

“陈博，iTRAQ文章好难写啊！”

“少废话，稿子先给我看看。”

文件传输中……

“写你妹呀，你这不还是上周的内容吗，就没怎么改啊！”

“哦……”

“哦你个头啊，你讲完原理，不要讲讲iTRAQ是怎么做的，实验流程是怎样吗？”

“iTRAQ实验流程：分为预备实验和正式实验两部分（见下图）。预备实验中蛋白质定量跑胶以及预质谱数据库比对结果为重要质量控制点，其目的在于质控和评价蛋白质质量和样本间的蛋白表达谱平行性、蛋白质总量和浓度以及查询的蛋白质序列数据库选取是否合理。正式实验是在预备实验的基础上进行， LC-MS/MS串联质谱中，一级质谱时，平衡基团可以确保无论用哪种报告离子标记的肽段都显示为相同的荷质比，这样一来，不同来源的相同肽段在此时都表现为一个峰；在二级质谱时，iTRAQ试剂中的平衡基团发生中性丢失，信号离子表现为不同质荷比的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以得到同一蛋白在不同样本中的表达差异；同时，肽段的MS/MS结果结合数据库检索可以鉴定出相应的蛋白种类。”

“你特么是牙膏啊，挤一下冒一点，还有啥你能不能一口气给我说完？”

“还有，还有就是iTRAQ不同实验机器的区别、分级以及质谱时间对结果的影响、iTRAQ的串联质谱能打出多少蛋白以及数据的处理。”

“那你还不快说？”

“内什么，陈博啊，微信文章篇幅有限，要不先写这么多，其它的下次再写？”

“呦呵！长能耐啦！开始学会花式拖稿啦！看你下周搞出什么鸟来！”

“喳……”