发布时间:2019-09-17 16:54 原文链接: 昆虫细胞转染实验

  • 基本方案

           

实验材料

昆虫细胞

试剂、试剂盒

胎牛血清 脂质体转染剂

仪器、耗材

培养皿 锥形瓶 培养箱 离心机 转子

实验步骤

1.  接种2x106个Sf9细胞于60 mm 培养皿,在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养,于27℃培养30~60 min,让细胞贴壁。

2.  相应于毎一待转染的培养皿,吸取40 ul 无菌水,加入一支无菌聚苯乙烯管中,加入5 ul 线性化的AcMNPV DNA和5 ul  100 ng/ul 的质粒DNA。将Lipofectin 充分混匀后,往DNA溶液中加入50 ul,轻柔混匀,于室温温育15 min。


3.  在15 min 的温育期间,用1.5 ml 不含胎牛血清的完全培养液代替培养皿中的培奍液。

4.  往培养皿中遂滴加入Lipofectin-DNA复合物,同时轻柔旋转平皿加以混匀。于27℃温育4~5 h。

 

5.  往每个培养皿中加入1.5 ml 含10%胎牛血清的完全培养液(或含有5%胎牛血清的无血清培养液),在27℃加湿培养箱中温育60~72 h。

 

6.  从每个堉养皿中将转染上清(由培养液和病毒组成)转移至无菌的15 ml 锥形离心管中4℃ 1 000 g 离心10 min。将病毒上清转移至新的灭菌试管,4℃避光保存备用。

            展开


相关文章

阻碍胶质母细胞瘤化疗反应的新障碍被发现

胶质母细胞瘤(GBM)是原发性脑和中枢神经系统(CNS)肿瘤中最具侵袭性和致命性的一种。手术切除肿瘤后,胶质母细胞瘤患者通常接受放射治疗和化疗药物替莫唑胺(TMZ)治疗。尽管患者最初对该药物反应良好,......

稀有脂肪分子帮助细胞死亡

哥伦比亚大学的科学家报告说,他们发现一种罕见的脂质是铁死亡(一种细胞死亡形式)的关键驱动因素。这些发现提供了关于细胞在铁死亡过程中如何死亡的新细节,并可以提高人们对如何在神经退行性疾病等有害发生铁死亡......

纳米材料与细胞相互作用研究获新进展

近日,山东大学晶体材料国家重点实验室教授仇吉川、刘宏与基础医学院教授郝爱军发展了一种用于改善纳米颗粒与细胞的相互作用的普适性策略。研究成果发表于《德国应用化学》。纳米材料在药物递送、组织工程、生物成像......

《细胞》编辑团队发布创刊50周年祝词

1月11日,《细胞》(Cell)编辑团队向《中国科学报》发来创刊50周年祝词,回顾创刊历程,并展望了未来的发展。以下为相关内容:1984年,《细胞》创刊。自创刊伊始,《细胞》的目标便是发表“令人兴奋的......

生物反应器国重实验室新进展!纳米机械天然杂合细胞

近日,华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室叶邦策教授课题组在DNA传感装置的设计及生物纳米杂合系统研究中取得了重要进展。该研究构建了纳米机械-天然杂合细胞,赋予了天然细胞非传统信号分子的感知、分析......

2023获批数创新高,明年这9款疗法可能获批|细胞和基因疗法年度盘点

美国FDA曾在几年前预计,到2025年,每年将批准10-20款细胞和基因疗法。随着这一领域在全球范围内的迅猛发展,今年批准的细胞和基因疗法再创新高,不仅朝着这一目标大步迈进,也为全球病患带来了更多创新......

省重点实验室,精准“狙击”让癌细胞无处遁形

设计系列纳米酶,与光热治疗、光动力治疗、免疫治疗等结合,用于癌症、老年病等重大疾病的治疗;突破太阳能电池关键技术瓶颈,构建高能、低成本、高效率的全新有机太阳能电池体系,将有机太阳能电池效率快速提升至1......

首个免疫细胞图谱,揭示人类肺部发展中免疫细胞的秘密作用

国际研究团队将先进的单细胞技术与肺部器官样体研究相结合,以绘制人类早期肺部免疫细胞的发展过程。他们的研究结果概述了这些细胞在人类肺部组织的发育过程中如何起到积极而密切的指导作用,揭示了免疫系统和呼吸系......

推动细胞和基因疗法工艺标准的发展

Polyplus,萨多利斯集团的一部分,已同意与韩国细胞和基因疗法(CGT)的CDMOMarkHerz合作,开发以降低治疗产品每剂的成本并提高质量为重点的新的CGT效率标准。团队将通过利用Polypl......

近红外光驱动的分子凿岩锤:治疗癌症的突破

以下是对您提供的文本的中文翻译:使用于医学成像的荧光合成染料类别,嵌入在癌细胞的膜中并快速振动,诱发坏死。由于整个分子的振动持续时间不到一皮秒,这些振动的氨基青黄素可以在低光水平或浓度下干扰事物的运作......