RealTimePCR实验流程
实验试剂Total RNA Kit ：Omega：(Cat.No．R6834)First Strand cDNA Synthesis Kit：GeneCopoeia(Cat.No．C0210A)2xAllinOneTMQ-PCRMix：GeneCopoeia（cat.No．D0101A)Primer synthesis：invitrogen实验设备Real Time PCR：ABI实验材料样品为5个人源的细胞培养液，其编号分别为：NO.I、No.2、No.3、No.4、No.5，其中No.1为对照组，其它四个为不同的样品组。实验步骤1. RNA抽提1) 样品处理：取适量样本加入 1ml TRK 裂解液匀浆样品。室温 14,000 × g 离心 5 min去除不溶解的的杂质，小心转移上清至 1.5ml 离心管。2) 加入等倍体积 70% 乙醇至裂解液中，抽打或涡旋混匀。3) 将柱子套在收集管中，转移混合液至柱子中。室温 10,00......阅读全文
Realtime－PCR
实验概要The exponential amplification via reverse transcription polymerase chain reaction provides for a highly sensitive technique in which a very low
RealTime－or－Kinetic－PCR
The DNA Facility houses the “real-time” or kinetic PCR instrument, the Applied Biosystems Model 7700 sequence detection system (the TaqMan instrument)
实时定量PCR（Realtime－quantitative－PCR）
mRNA表达的研究 微小残留病变的检测 肿瘤耐药基因表达的研究 病毒感染的定量监测Vs普通PCR，RT-PCR的优势 采用封闭的检测模式，因此扩增产物导致污染的可能性比普通PCR要小得多 。 扩增产物的检测在PCR扩增过程中同时进行，并且数据的采集、分析全部由 仪器 自动完成，因此整个检测所 需的时
RealTime－PCR实验流程
实验试剂Total RNA Kit ：Omega：(Cat.No．R6834)First Strand cDNA Synthesis Kit：GeneCopoeia(Cat.No．C0210A)2xAllinOneTMQ-PCRMix：GeneCopoeia（cat.No．D0101A)Primer
RTPCR、QPCR、Realtime－PCR、realtime－RTPCR你真的区分的开吗？
多少同学能将 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR区分开？有多少同学还在犯晕？今儿这贴，师兄就带你区分区分，拨开那扇 PCR 迷雾。什么是 RT-PCR？RT-PCR就是逆转录 PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR(reverse transcr
Realtime－PCR－基础知识
理论基础 聚合酶链式反应作为一种革命性的方法在生物学研究的历史中占据了重要的地位。以此为基础发展出包括real-time PCR在内的多项应用技术。自诞生后real-time PCR技术持续发展，从简单的增扩到整个PCR过程，real-time PCR表现出比PCR更敏感、更明确的定量分析特
realtime－PCR体系的优化
实时定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，实验的条件对实验结果的影响非常大。在此谈谈体系优化的问题，希望对做相关试验研究的朋友有所帮助。1、基本参数的优化：1）MgCl2的浓度：在PCR反应中，MgCl2的浓度对酶的活
realtime－PCR－数据分析
无论所使用的real-time PCR是何种型号，正确的数据分析对于获得有效的实验结果都是至关重要的。这里介绍有关real-time PCR数据分析的知识。 在讨论基本分析过程之前，先介绍如何设计一个好的实验。如果你是自己设计的引物和探针，那有助于下一步的工作。但是在有些情况下，人们使用出版文献上的
Realtime－PCR与RTPCR的区别
实时荧光定量PCR原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。1．内标在传统定量中的作用由于传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重
实时荧光定量PCR（RealTime－PCR）实验流程
一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录)不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法，因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高，所以，正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法，在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在总rna的提取过程中，注意避免mRNA的断裂;取2u
从RNA的提取到PCR——Realtime－PCR经验
一 引物的设计引物的设计对于这个实验至关重要，因为real time pcr的检测灵敏度比较高，所以相应的对引物设计的要求就很高。普通的要求规则大家都知道，还有几点必须注意：1，引物的错配率（引物错配形成引物二聚体，但是SYBR照样能嵌入进去，结果导致实验结果的误差很大，重复性也不好）。2，引物的特
REALTIME－PCR－WITH－SYBR－GREEN－I－PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引
realtime－PCR－常用仪器和探针
1.SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。2.Taqman探针：
Realtime－PCR实验注意事项
实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器
realtime－PCR－常用仪器和探针
SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。 2.Taqman探针：
Realtime－PCR实验注意事项
Real-time PCR实验注意事项实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到zui大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是zui快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好
实时荧光定量PCR（Quantitative－Realtime－PCR－，qPCR）技术介绍
荧光定量PCR也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。荧光定量PCR的发展史是一部ABI、罗氏和伯乐等巨头的荡气回肠的斗争史，感兴趣的可以去查查。该技术是目前最成熟，使用最广泛的半定量PCR技术。 荧光染料法（SYBR
realtime－PCR技术的原理及应用
一、实时荧光定量PCR原理（一）定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 。（二）实时原理1、常规PCR技术：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。2、实时定量PC
Realtime－PCR－数据导出－——－ABI仪器篇
1. Real-time PCR数据：Real-time PCR完成后，所有数据并非可以直接导出，由于每一次实验的情况都不相同，仪器的很多默认设定都会对最终数据结果造成重大偏差，所以在完成PCR过程后，需要人为对实验结果进行条件设置，才能提取到科学有效的实验结果，进而完成对实验结果的分析和判断。
实时荧光定量PCR（Realtime－PCR，QPCR，荧光定量）分类以...
实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）分类以及实验步骤介绍实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）技术（Real-time quantitative PCR），是指在（QPCR，荧光定量）反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号积累实时监测整个（
realtime－PCR中内参基因的CT值
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的，而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多，内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的，那说明你的样本要么降解了，要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响，必须换一个基因做内参
realtime－PCR负对照有信号问题分析
引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。 引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。 镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的 mix 试剂盒。 模板有基因组的污染：RNA 提取过程中避免基因组 DNA 的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
realtime－PCR中内参基因的CT值
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的，而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多，内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的，那说明你的样本要么降解了，要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响，必须换一个基因做内参
realtime－PCR中内参基因的CT值
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的，而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多，内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的，那说明你的样本要么降解了，要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响，必须换一个基因做内参
realtime－PCR中内参基因的CT值
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的，而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多，内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的，那说明你的样本要么降解了，要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响，必须换一个基因做内参
Realtime－PCR实验心得和RNA提取心得
并不是所有的实验都可以做real－time的，技术路线要选好当你的基因表达量少或有些不表达具体就是做普通pcr跑胶条带比较弱，不是很亮的情况下个人觉得最好不要选择real，不容易做好，特别是融解曲线用sbgr green染料做的话，引物设计时扩增片断最好小于250bp，太长了不好扩预实验先rt－pc
realtime－PCR中内参基因的CT值
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的，而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多，内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的，那说明你的样本要么降解了，要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响，必须换一个基因做内参
realtime－PCR中内参基因的CT值
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的，而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多，内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的，那说明你的样本要么降解了，要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响，必须换一个基因做内参
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realtime－PCR中内参基因的CT值
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的，而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多，内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的，那说明你的样本要么降解了，要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响，必须换一个基因做内参