制备电泳实验——洗脱

蛋白质的分离纯化是研究其结构、特性和功能的基础,诸如一级结构、溶液构象、晶体结构、免疫功能和生物机理等研究都必须用一定量并具有活性的纯样品作为研究材料。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编:郭尧君。实验方法原理严格来说洗脱不能达到制备的目的,它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品通过某种电泳方法进一步分离纯化后,再用扩散洗脱或电泳洗脱收集纯样品,继而用作其他分析的需要。实验材料凝胶切片仪器、耗材解剖刀匀浆器实验步骤1. 扩散洗脱扩散洗脱是用解剖刀或匀浆器将凝胶切片捣碎,以增加凝胶的表面积,然后用大约 3 倍体积的合适的缓冲液浸泡。如果蛋白对温度不敏感,则可在 37℃ 或更高温度下保温,以改善洗脱的效果。对大体积的缓冲液虽然能得到良好的产率,但洗脱后样品稀释倍数太大,难以回收。洗脱后的凝胶碎片可简单地用离心方法除去。2. 电泳洗脱电泳洗脱通常是用一定的装置从某种电泳分离后的凝胶中电泳洗脱蛋白质,并分别移入小室中......阅读全文

制备电泳实验——洗脱

蛋白质的分离纯化是研究其结构、特性和功能的基础,诸如一级结构、溶液构象、晶体结构、免疫功能和生物机理等研究都必须用一定量并具有活性的纯样品作为研究材料。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编:郭尧君。实验方法原理严格来说洗脱不能达到制备的目的,它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品

制备电泳实验

实验方法原理 严格来说洗脱不能达到制备的目的,它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品通过某种电泳方法进一步分离纯化后,再用扩散洗脱或电泳洗脱收集纯样品,继而用作其他分析的需要。实验材料 凝胶切片仪器、耗材 解剖刀匀浆器实验步骤 1. 扩散洗脱扩散洗脱是用解剖刀或匀浆器将凝胶切片捣

制备电泳实验

洗脱 连续电泳 等电聚焦制备电泳             实验方法原理 严格来说洗脱不能达到制备的目的,它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品

制备电泳实验——连续电泳

仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖电泳实验步骤1. 连续洗脱电泳使用连续洗脱的聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖电泳能制备微克到毫克级的多肽,蛋白或核酸。装置可以是各种各样的。有的是把样品直接加在固体凝胶的表面,分子经过电泳分离后,由流动的缓冲液洗脱,纯化后的分子被浓缩,并由蠕动泵和部分收集器收集。2. 连

制备电泳实验——等电聚焦制备电泳

实验方法原理等电聚焦制备电泳是一种非变性制备技术。由于等电聚焦电泳技术的特点,因而是一种理想的制备方法。试剂、试剂盒电极液两性电解质Ultrodex实验步骤一、液体介质垂直柱状蔗糖密度梯度等电聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制备和分析目的的等电聚焦方法。载体两性电解质在蔗糖密度梯度柱中形成 pH

通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验

来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备,通常有两种方法:① 平板裂解,这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法;② 小量液体培养,这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备

通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验

            实验方法原理 来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备,通常有两种方法:① 平板裂解,这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法;② 小量液体培养,这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。

通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验

实验方法原理 来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备,通常有两种方法:① 平板裂解,这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法;② 小量液体培养,这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。实验材料 λ 噬菌体原种大肠杆菌铺平板细菌试剂、试剂盒 氯仿SM仪器、耗材 LB 或

微量制备毛细管电泳实验

多次分离 单次分离             实验方法原理 实验材料 多肽:ACTH 4-10

微量制备毛细管电泳实验

实验方法原理 实验材料 多肽:ACTH 4-10试剂、试剂盒 血管紧缩素I和血管紧缩素II 0.05 mmol/L 和 0.25 mmol/L 磷酸钠缓冲液(pH 2.30 存储于 4℃)0.1 mol/L 氢氧化钠仪器、耗材 75 μm 内径的融合硅毛细管柱CE 仪器锥形微量瓶实验步骤 1. 低压

微量制备毛细管电泳实验——多次分离

实验材料多肽:ACTH 4-10试剂、试剂盒血管紧缩素I和血管紧缩素II0.05 mmol/L 和 0.25 mmol/L 磷酸钠缓冲液(pH 2.30 存储于 4℃)0.1 mol/L 氢氧化钠仪器、耗材75 μm 内径的融合硅毛细管柱CE 仪器锥形微量瓶实验步骤1. 低压下(0.5 lb/in2

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒 丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵 NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇(2-丁醇)二乙醚 NaOAcMgCl2 乙醇TBE 甲酰胺加样缓冲液 TE仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤 材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵(10%;w/v)N,

微量制备毛细管电泳实验——单次分离

实验材料多肽:ACTH 4-10试剂、试剂盒4:1(V/V)0.5 mol/L 磷酸钠缓冲液(pH 2.50)/乙烯乙二醇0.1 mol/L 氢氧化钠仪器、耗材150 μm 内径的融合硅毛细管柱CE 仪器锥形微量瓶实验步骤1. 制备多肽混合物和预处理柱子(见多次分离步骤 1 和 2)。2. 在 0.

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验             试剂、试剂盒 丙烯酰胺 双丙烯酰胺 尿素

用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇(2-丁醇)二乙醚NaOAcMgCl2乙醇TBE甲酰胺加样缓冲液TE仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵(10%;w/v)N,N,N'

溶胶的制备及电泳

可以减少溶液间的扩散现象,使界面保持清晰。电导大的辅助液,离子浓度大,离子进入溶胶,容易引起溶胶凝聚,还降低溶胶内部的电场强度,降低电泳速度。

DNA-污染的洗脱后去除实验

            试剂、试剂盒 EDTA DNA 酶Ⅰ DNA 酶Ⅰ缓冲液 RNA 样品 仪器、耗材

DNA-污染的洗脱后去除实验

试剂、试剂盒 EDTADNA 酶ⅠDNA 酶Ⅰ缓冲液RNA 样品仪器、耗材 水浴锅实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水EDTA,25 mmol/L2. 酶和酶缓冲液DNA 酶Ⅰ, 扩增级(无 RNA 酶)DNA 酶Ⅰ缓冲液,10X3. 核酸和寡核苷酸RNA

DNA-污染的洗脱后去除实验

述方案是 Dilworth 和 Huang 方案的修改(DilworthandMcCarey1992;Huangetal.2000)。它可以用于从大多数商用试剂盒和试剂制备的 RNA 中去除 DNA 污染。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒EDTADNA 酶Ⅰ

免疫电泳实验_电泳

试剂、试剂盒Tris-巴比妥缓冲液贮液电极缓冲液琼脂糖溶液实验步骤电泳时温度可控制在 10~15℃,同前述电泳的方法一样,先在冷却板上铺一层煤油,再铺胶。电极芯与凝胶的边缘接触 5~10 mm,并保持平行,电泳时的电场强度约为 20 V/cm。

凝胶中蛋白质的洗脱实验

实验步骤 一、通过扩散来洗脱凝胶中的蛋白质 将 SDS 从蛋白质中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 发表,但当用于微量的蛋白质时,这个方法既麻烦又会造成大部分蛋白质的损失。 这一领域较多的早期方法已经发

细胞同步化实验_离心洗脱法

实验材料细胞仪器、耗材洗脱离心机培养基锥形瓶洗脱仪实验步骤1. 准备下列仪器:洗脱离心机装有一个大容器中的 20 L 培养基,含 0.5%~1% 血清和抗生素,置于室温20 个 1 L 的锥形瓶,用以收集各洗脱组分2. 至少提前 10 天开始培养细胞,进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太

凝胶中蛋白质的洗脱实验

SDS-PAGE 在确定样品中多肽的数量和大小方面已被证明是极有用的分析方法。若能熟练运用的话, 它还具有分离许多大小不一的单体蛋白质的能力。许多人在凝胶电泳应用的早期希望可以利用凝胶的高分辨率特性来获得小量的纯净蛋白质。实验步骤一、通过扩散来洗脱凝胶中的蛋白质将 SDS 从蛋白质中移除的早期方法由

凝胶中蛋白质的洗脱实验

一、通过扩散来洗脱凝胶中的蛋白质将 SDS 从蛋白质中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 发表,但当用于微量的蛋白质时,这个方法既麻烦又会造成大部分蛋白质的损失。这一领域较多的早期方法已经发表(HagerandBurgess,1980),但却需要重新讨论 (butbear

DNA测序电泳的样品制备

  当在预电泳时,即可进行样品的制备,将反应完毕的样品在沸水浴中加热1~3分钟,立即置于冰上即可。如果样品长时间不用,则应重新处理。可使用4~6%聚丙烯酰胺凝胶,胶厚0.4 mm。厚度小于0.4 mm的胶可能导致信号太弱。加样时不必吸去上层覆盖的矿物油,但要小心地吸取矿物油下的蓝色样品。

火箭电泳实验

实验方法原理在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。实验材料待检血清试剂、试剂盒巴比妥缓冲液琼脂粉仪器、耗材微量进样器打孔器玻璃板电泳仪实验步骤1.  抗体琼脂板的

火箭电泳实验

火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为:在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。一、材料1. 诊断血清(抗体):抗人IgG或IgA免疫血清。2. 待检血清(抗原)

火箭电泳实验

实验方法原理 在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。实验材料 待检血清试剂、试剂盒 巴比妥缓冲液琼脂粉仪器、耗材 微量进样器打孔器玻璃板电泳仪实验步骤 1.  抗

核酸电泳实验

琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶EB(德元国际Cat# LY5009)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外

关于核酸电泳—琼脂糖凝胶电泳凝胶的制备和电泳介绍

  (1) 琼脂糖凝胶电泳凝胶的制备和电泳—用透明胶将玻璃板或电泳装置所配备的塑料盘的边缘圈封,制成胶模,置水平工作台上;  (2) 琼脂糖凝胶电泳凝胶的制备和电泳—称取适量琼脂糖,置电泳缓冲液中,加热使琼脂糖溶解;  (3) 琼脂糖凝胶电泳凝胶的制备和电泳—待溶液冷至60℃,加入10mg/ml E