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（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原状并繁殖，该方法的转化效率为每微克DNA可获得105-106转化子。环状DNA比线状DNA分子转化效率高1000倍左右。本法的关键是选用的细菌必须处于生长对数期，实验操作必须在低温下进行。（2）电击法: 也称电穿孔法，电击法（electroporation）最早用于将DNA导入真核细胞，利用高压脉冲，在细菌细胞表面形成暂时性的微孔，重组DNA从微孔中进入，脉冲过后，微孔复原，在丰富培养基中生长数小时后，细胞增殖，重组DNA得到大量复制。除需特殊仪器外，它比CaCl2操作简单，无需制备感受态细胞，适用于任何菌株。其转化效率较高，每微......阅读全文
同源重组技术原理：基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为
哈喽，小伙伴们！走过不要错过，又到了科普知识的时间了，喜欢做分子实验的小伙伴一定听说过Southern blot这门检测技术，但大家知道为什么叫Southern吗？今天小编就为大家科普一下这门实验技术。 Southern Blot是最早出现的blot（印迹）技术，它是检测DNA的一种方法。
人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中，发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3～5％。基因组中绝大部
在中国科学院广州生物医药与健康研究院赖良学课题组用于研究的养猪场里，生活着一群特别的猪。这里不仅有十几头带有基因剪刀的工具猪，而且拥有六七百头其他在生物医药领域具有重要应用价值的基因修饰猪。而这些猪的用途听起来更加“骇人”，有些基因修饰猪可以模拟人类疾病，如老年痴呆症、渐冻人症和亨廷顿舞蹈症等，
在中国科学院广州生物医药与健康研究院赖良学课题组用于研究的养猪场里，生活着一群特别的猪。这里不仅有十几头带有基因剪刀的工具猪，而且拥有六七百头其他在生物医药领域具有重要应用价值的基因修饰猪。而这些猪的用途听起来更加骇人，有些基因修饰猪可以模拟人类疾病，如老年痴呆症、渐冻人症和亨廷顿舞蹈
近年来，由核酸酶介导的靶向基因组编辑技术发展迅速，CRISPR/Cas9基因编辑系统以其简便性、高效性等特点而备受关注。CRISPR/Cas9系统对致病基因突变进行纠正通常是利用DNA同源重组修复来实现的，该过程需要同时提供一个外源DNA作为供体以重新编码DNA序列达到基因编辑的目的。但伴随而来
秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）是著名的模式动物，以其细胞家族树而闻名，通过一系列的细胞分裂产生各种成体细胞类型。在二十世纪七十年代中期，科学家们付出了巨大的努力，在无数个小时的基本显微镜探索中记录了这棵细胞树，这是一个传奇。 近几十年来，体内标记和追踪细胞的方法已
图4. Southern blot鉴定同源重组事件[4]另外，在制备基因敲进和条件性基因敲除模式小鼠过程中，Southern blot检测是非常重要的一步。在我们以往的工作中，其中一例Cre定点敲进课题（如图5），Southern blot检测结果显示：小鼠1号，有明显的随机插入现象。图5