酵母菌基因克隆实验——互补法
实验材料酵母菌实验步骤1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过夜培养之后，含插入互补cdc 101-1突变基因片段的质粒的菌落以及含随机非互补质粒的潜在CDC 101+回复突变体均可能生长。 重新将平板上出现的每个单菌落划线并保存作进一步分析。 3. 用酵母菌候选株取得失去质粒的Leu- 菌株，观察它们在 37℃生长的能力，保留那些能含有质粒时才能在37℃生长的转化子。 4. 从步骤3中确认的转化酵母菌中提取总DNA，分别转化大肠杆菌，从而分离出质粒DNA。重新将质粒DNA转化到突变的酵母菌株中，并证实已分离到正确的质粒......阅读全文
酵母菌基因克隆实验——互补法
实验材料酵母菌实验步骤1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过夜培养之
酵母菌基因克隆实验
实验材料 酵母菌实验步骤 1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过
基因互补实验
实验方法原理互补作用可以用来确定两个突变是属于同一基因还是属于不同的基因。如果是同一基因内两个不同位点的突变,它们就不能互补;如果是不同基因的突变则是互补的,此为基因间互补。有时同一基因内的两个突变位点也能发生基因内互补,但基因内互补所恢复的酶活性一般最多只有野生型酶活性的25%,而基因间互补则为1
基因互补实验
实验方法原理 互补作用可以用来确定两个突变是属于同一基因还是属于不同的基因。如果是同一基因内两个不同位点的突变,它们就不能互补;如果是不同基因的突变则是互补的,此为基因间互补。有时同一基因内的两个突变位点也能发生基因内互补,但基因内互补所恢复的酶活性一般最多只有野生型酶活性的25%,而基因间互补则为
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
构建LacZ融合载体研究酵母菌基因调控。由于这种检测方法简便而且灵敏度高，因此，酵母菌基因经常以LacZ基因的功能 部分作标签，来指示待研究酵母菌基因的表达调节功能。融合蛋白被这样构建：酵母基因的启动子加上这个基因编码蛋白的N端的几个氨基酸残基融合在LacZ基因的羧基 端，由此编码的蛋白质片段仍保持
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
实验方法原理 实验材料 包含lacZ融合基因的酵母菌株试剂、试剂盒 选择培养基平板液氮Z缓冲液20 mg mL×-gal溶于二甲基甲酰胺仪器、耗材 30℃孵育箱圆形硝酸纤维素滤膜Whatman 3MM 滤纸实验步骤 1)在含有适当选择培养基的培养平板上点接种或者划线接种酵母菌克隆，在30℃培养直至生
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
实验方法原理 实验材料 包含lacZ融合基因的酵母菌株 试剂、试剂盒 选择培
酵母菌RNA制备实验—poly（A）+法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤一、热酸酚方案（基本方案1）1. TES及酸酚溶液的体积增加到4 ml。2. 操作时使用50 ml 聚丙烯离心管。3. 将得到大约10 mg RNA。 二、玻璃珠方案（备择方案1）1. 将体积增加到15 ml
酵母细胞中质粒的加工实验——从酵母细胞中分离质粒
利用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1，它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°C生长，而不能在37°C形成菌落。如果用一个酵母菌基因组文库转化cdc101-1菌株，通过分离温度不敏感菌落，那么就可能分离到一个可以互补这种突
酵母功能互补实验
实验概要本实验将在构建了大蒜重金属抗性基因表达载体并转入大肠杆菌DH5α的基础上，选择鉴定准确的质粒转化酵母细胞，对转化子进行了PCR鉴定和RT-PCR分析，及重金属抗性实验。主要试剂YPD培养基，醋酸锂，PEG(50%)，乙醇，少量酵母菌总RNA快速抽提试剂盒主要设备摇床，离心机，水浴锅，PCR仪
酵母菌RNA制备实验—玻璃珠法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1. 培养并收集酵母菌细胞，冷冻细胞沉淀。2. 用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。 3. 加1体积冷的酸洗玻璃珠（体积与约200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA缓冲液平衡的25：24 ：1酚/
酵母菌基因组DNA的提取实验
基本方案 实验材料 酵母菌 试剂、试剂盒
酵母菌基因组DNA的提取实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液 Tris仪器、耗材 高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤 1. 1.5 ml 对数生长期细菌细胞。2. 离心，12 000 rpm，1-2 min。3.
小量细菌克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 主琼脂板上和覆盖于另一块琼脂板表面的硝酸纤维滤膜或尼龙膜上的细菌克隆可以被定位， 经过一段时间，已经在滤膜上生长的克隆可以被原位裂解以备杂交之用。同时，主琼脂板可置于 4℃ 保存，直到筛选的结果出来为止。
小量细菌克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 主琼脂板上和覆盖于另一块琼脂板表面的硝酸纤维滤膜或尼龙膜上的细菌克隆可以被定位， 经过一段时间，已经在滤膜上生长的克隆可以被原位裂解以备杂交之用。同时，主琼脂板可置于 4℃ 保存，直到筛选的结果出来为止。实验材料 E.coli试剂、试剂盒 LB 或 SOB 琼脂板仪器、耗材 硝酸纤维素
基因克隆
外源DNA和质粒载体的连接反应 外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交
酵母菌培养实验
今年就开始做这个天然酵种面包，一开始看了好多关于日本和台湾的书籍，关于天然酵种的做法，感觉是很简单的，但是又看到网上很多人都说失败率很高，我也看了好多高手做天然酵种，之前是对天然酵种是有点了解，但没亲身做过，自从德州农民做了天然酵种面包以后，好多人都在做天然酵种面包。我知道日本有很多面包房就用
靶向克隆法
靶向克隆法是一种新的基因克隆方法，该克隆方法的特点是：在基因克隆过程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组，从而达到克隆基因的目的。LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，无需传统基因克隆所需要的限制性内
荧光素酶互补（Luc）实验
【导入】基于荧光素酶（Luciferase）的发光原理，形成了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海参荧光素酶（Renilla luciferase）。两者可与各自的底物发生氧化作用产生生物荧光，产生的荧光值即表示两种酶的表达量多少。图片来源
酵母菌基因组转座子的诱变实验
基本方案 小载体聚合酶链反应 mTn诱变基因产物的表位标记 实验方法原理 实验材料
酵母菌基因组转座子的诱变实验
实验方法原理 实验材料 诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒 10×TE缓冲液 pH 8.0无菌 E. coli tets kans (如 DH5c×)14 cm的LB培养基平板培养基中加入3 mg mL的四环素和40μg mL的卡那霉素LB培养基丙三醇无菌NotⅠ非限制性内切核酸酶及
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中 采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中 采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。实验材料
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。本实验来源「分子克隆实验指南第
小量细菌克隆的杂交法筛选实验步骤
小量细菌克隆的杂交法筛选实验步骤，一、材料1. 培养基含有适当抗菌素的 LB 或 SOB 琼脂板。含有氯霉素的 LB 或 SOB 琼脂板。2. 专用设备(1) 硝酸纤维素膜（Millipore HAWP，或类似产品）或尼龙膜。滤膜不必是无去污剂污染或无菌。(2) 注射器（3cc )，针头（18 号）
利用α互补现象筛选带有插入片段的重组克隆的原理
现在使用的许多载体都带有一个E.coli DNA的短区段，其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因（lacZ’）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息。这个编码区中插入了一个MCS，它并不破坏读框，但是可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于编码β-半乳糖苷酶C端部分序列
含有目的基因真核表达－pEGFPC1载体的构建实验_克隆法
实验方法原理在设计引物时,一对引物两端分别加了两个酶切位点,这两个酶切位点与pEGFP-C1 载体多克隆位点中的酶切位点相吻合,且位置和方向都合适。这样, 目的基因片段和pEGFP-C1 载体经双酶切后,由于酶切位点一致,在T4 DNA 连接酶的作用下就可以连接。实验材料DNA 片段试剂、试剂盒pE
酵母菌落直接质粒转化法
酵母菌落直接质粒转化法1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PL
T克隆绿色荧光蛋白（GFP）基因实验
【原理】经TaqDNA聚合酶扩增后的PCR产物末端都带有单个A。正是基于这一原理，pGEM-T质粒经EcoRV切成平端后，在开口端加上一个T制成T载体，一方面避免了自身环化，另一方面由于T-A互补，从而提高了T载体与PCR产物之间的连接效率。由于T-A克隆只需纯化PCR产物，因而操作较为简便。pGE
关于单克隆抗体有限稀释法克隆法介绍
1．材料 （1）微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞（即饲养细胞）每孔2万～4万。 （2）HT培养基 2．操作方法 （1）取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色，计数。 （2）用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和