几种常用的转染方法

一、物理-化学方法 脂质体转染法:采用脂质体转染试剂,将遗传物质如质粒, siRNA等转移至细胞内。 此种方法易于操作且不需要许多步骤或特殊的专业知识。通常情况下,你只需要一种转染试剂和一种兼容的生长培养基 (通常是低血清且具有良好的缓冲作用,使细胞在转染过程中保持活性)。不同的厂商有自己的配方试剂,有些可以为特定的细胞系设计配方,所以检查你的细胞系是否有最佳脂溶性配方。此外,这种方法可与一系列细胞兼容,如HEK 293. 脂质体转染试剂价格昂贵,但转染效率高,从长远来看是值得的。 DEAE-葡聚糖法:它是一种阳离子聚合物,可以与带负电荷的DNA和蛋白质结合,进而被细胞吞噬。 聚合物浓度、核酸或蛋白质与聚合物的比值,以及转染的持续时间是重要的优化参数,另外,此方法对附着细胞的转染非常有效,也可用于某些悬浮细胞系。 缺点是一些细胞类型对葡聚糖特别敏感,可能会发生形态变化或者抑制细胞生长。 磷酸钙共沉淀法:DNA与......阅读全文

细胞转染无血清培养基

  转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。  物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;  化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;  生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。  理想细胞转染方法,应该具有转染效

细胞转染为什么要换无双抗培养基

影响细胞状态吧,抗生素这种东西,即使是平时培养细胞的时候,能不加也最好不加,尤其是细胞转染的时候,细胞更容易死,所以不要用双抗。

细胞转染

脂质体介导法 磷酸钙沉淀法             实验方法原理 外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的

细胞转染实验的实验步骤细胞转染

1)转染试剂的准备A.将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。B.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。2)选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡

细胞转染电穿孔转染法

电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下,高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂,可以大大的降低细胞的死亡率,同时提高电穿孔转染效率

细胞转染脂质体转染法

阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前实验室最方便的转染方法之一,其转染率较高,优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性

细胞瞬时转染

1. 1细胞瞬时转染 原理:通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。应用:    观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)一

细胞瞬时转染

细胞瞬时转染可用于(1)观察目的基因功能(2)表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。实验方法原理通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。

细胞瞬时转染

细胞瞬时转染             实验方法原理 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的

LSCM细胞转染

细胞转染对于活细胞实验,需要实验设备能够维持细胞的生长。显微镜上需要配备合适的热台,可控制一定的 CO2 浓度、合适的湿度和温度等。此外,是否是倒置显微镜? 能否使用高倍镜、油镜或水镜观察细胞? 为了便于成像,一般使用底部为玻璃片的细胞培养皿。由于显微镜并不是无菌的环境,因此对于一般的活细胞实验并不

细胞瞬时转染

摘要: 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 原理: 通过 脂质 体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细

什么细胞转染方法可以转染thp1细胞

如果细胞转染效率很低,可以试试LTX试剂,这种试剂比较贵,但是效率高。如果还是不行,那就只能电转了。

细胞转染快准狠GeneCopoeia转染试剂的适用细胞

细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物

细胞转染快准狠GeneCopoeia转染试剂的适用细胞

细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物

细胞转染的定义

  随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。

细胞转染的简介

  转染 ,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法

细胞转染的方法

  脂质体转染法  阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前实验室最方便的转染方法之一,其转染率较高,优于磷酸钙法。由于脂质

什么是细胞转染?

细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。

真核细胞转染实验

学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。实验材料真核细胞试剂、试剂盒脂质体 转染液仪器、耗材CO2孵箱 离心管 6孔板

真核细胞转染实验

真核细胞的转染 实验材料 真核细胞 试剂、试剂盒 脂质体 转染液

细胞转染的用途

随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。

细胞转染常用步骤

1. 转染试剂的准备① 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。② 震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。2. 选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体 [1]  体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGF

细胞转染实验目的

学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。

昆虫细胞转染实验

基本方案             实验材料 昆虫细胞 试剂、试剂盒

细胞转染实验介绍

一、实验目的学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。二、实验原理上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介

昆虫细胞转染实验

基本方案             实验材料 昆虫细胞 试剂、试剂盒

细胞瞬时转染技术

原理:通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。应用:观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。一般流程:1)细胞接种:转染实

昆虫细胞转染实验

实验材料 昆虫细胞试剂、试剂盒 胎牛血清脂质体转染剂仪器、耗材 培养皿锥形瓶培养箱离心机转子实验步骤 1.  接种2×106个Sf9细胞于60 mm 培养皿,在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养,于27℃培养30~60 min,让细胞贴壁。2.  相应于毎一待转染的培养皿,吸取40

细胞瞬时转染步骤

原理:通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。应用:观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。一般流程:1)细胞接种:转染实

昆虫细胞转染实验

实验材料昆虫细胞试剂、试剂盒胎牛血清脂质体转染剂仪器、耗材培养皿锥形瓶培养箱离心机转子实验步骤1.  接种2x106个Sf9细胞于60 mm 培养皿,在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养,于27℃培养30~60 min,让细胞贴壁。2.  相应于毎一待转染的培养皿,吸取40 ul 无菌