方案3蛋白质还原和S羧甲基化：微量方法
实验材料纯化的蛋白质样品试剂、试剂盒乙腈碘乙酸正丙醇还原缓冲液储存液仪器、耗材台式离心机HPLC 系统冷冻干燥离心机聚丙烯小管水浴或温箱实验步骤一、样品还原1.利用冷冻干燥离心机蒸发纯化的蛋白质样品溶液（含 0.01%~0.02% Tween-20)，直到少于 10ul。2.加入 150ul 储存液到含有近乎干燥的蛋白质样品的离心管中，轻轻弹击或振荡离心管，使样品彻底混匀，然后略微离心样品。3.加人 16ul 还原缓冲液，使 DTT 的终浓度为 15 mmol/L。4.样品在 40°C 孵育 4.5~5 h。二、样品烷基化5.还原过的蛋白质样品溶液置于室温。6.加入 20ul 0.5mol/L 碘乙酸，至碘乙酸的终浓度为0.05mol/L。7.25°C 避光反应 30 min。三、S-羧甲基化蛋白质的回收（脱盐和浓缩）8.将 2%~3%(约 300ng 蛋白质）的总混合物上样到反相微孔层析柱中（50 mm X 1mm 内径 HP......阅读全文
方案3－蛋白质还原和S羧甲基化：微量方法
实验材料纯化的蛋白质样品试剂、试剂盒乙腈碘乙酸正丙醇还原缓冲液储存液仪器、耗材台式离心机HPLC 系统冷冻干燥离心机聚丙烯小管水浴或温箱实验步骤一、样品还原1.利用冷冻干燥离心机蒸发纯化的蛋白质样品溶液（含 0.01%~0.02% Tween-20)，直到少于 10ul。2.加入 150ul 储存液
方案2－蛋白质还原和S羧甲基化：大规模方法
实验方法原理蛋白质链间或链内完整的二硫键，会给酶解或化学裂解带来麻烦。如：1.二硫键连接的肽段洗脱物，在基于RP-HPLC的肽段作图中会产生单个的峰，从而使这些肽段图很难解释；2.最理想的方法是在序列测定之前，分离由S—S键连接的肽段，否则会使序列数据的解释变得复杂；3.没有断裂二硫键的蛋白质不便于
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验 方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化：大规模方法 方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化：微量方法 方案4 用Ellman 试剂测定自由巯基和二硫键实验 方案5 蛋白质的胰酶消化实验 方案6 用溴化氰切割 M
方案12－胶内蛋白质的S吡啶乙基化实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒β-巯基乙醇还原缓冲液仪器、耗材冷冻干燥离心机去离子水温箱冷冻干燥机小离心管移液管塑料皿实验步骤方法 1: 整块凝胶的还原和 S-吡啶乙基化1.保证整块凝胶的正确染色和脱色（见方案 9)。2.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案3
技术和方案3 酵母 DNA 分离实验材料质粒DNA玻璃珠试剂、试剂盒YPD消解酶 100TTris-HClSDS乙酸钾TE 缓冲液RNaseA 溶液山梨醇无水异丙醇裂解缓冲液仪器、耗材三角瓶离心管实验步骤一、酵母 DNA 微量制备（40 ml)1.在 125 ml 三角瓶中用 40 mlYPD 培养
核酸、蛋白质等微量紫外吸光度测量的应用方案
引言核酸（DNA、RNA）、蛋白质等生物样品的微量紫外吸光度及浓度的检测，有助于基因测序、基因筛查、分子育种和动物克隆等生命科学的研究。多家生命科学领域的实验设备供应商已将海洋光学的微型光纤光谱仪应用在了其微量或者超微量紫外分光光度计设备中，并实现了全波段200-850nm，或
cDNA－文库的构建（三）
阶段 3:cDNA 的甲基化材料缓冲液和溶液将贮存液稀释到合适浓度。氯仿10XEcoRⅠ 缓冲液1XEcoRⅠ 甲基化酶缓冲液（选用)如希望，可替代步骤 1 中的 Tris-HCl,NaCl 和 EDTA。EDTA(0.5mol/L,pH8.0)乙醇MgCl2(1mol/L)NaCl(5mol/L)
cDNA－文库的构建2
阶段 3:cDNA 的甲基化 材料 缓冲液和溶液 将贮存液稀释到合适浓度。 氯仿 10XEcoRⅠ 缓冲液 1XEcoRⅠ 甲基化酶缓冲液（选用) 如希望，可替代步骤 1 中的 Tris-HCl,NaCl 和 EDTA。 EDTA(0.5mol/L,pH8.0) 乙醇 MgCl2(
大连化物所蛋白质组学研究取得进展
蛋白质甲基化是一种非常重要的翻译后修饰现象，其甲基供体为S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。由于甲基化可发生在氨基酸残基的N-,O-和S-中心，并且N-中心甲基化还存在不同状态，同时甲基化对分离行为影响非常细微，限制了对蛋白质甲基化组的解析。常规基于抗体的研究策略仅捕获了部分N-中心甲基化的信息。中国科
关于同型半胱氨酸代谢通路的介绍
（5-甲基四氢叶酸进入同型半胱氨酸代谢通路，亦称甲基传递通路） （1）5-甲基四氢叶酸在甲硫氨酸合成酶及其辅酶维生素B12的催化下提供一个甲基给同型半胱氨酸使之转化成为甲硫氨酸，而自身转换为四氢叶酸，甲硫氨酸则在ATP供能的情况下转化为S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。 （2）S-腺苷甲硫氨酸(S
生物转化的主要类型
葡萄糖醛酸化肝细胞微粒体中含有非常活跃的葡糖醛酸基转移酶，它以尿苷二磷酸葡糖醛酸（UDP-葡糖醛酸）为供体，催化葡糖醛酸基转移到多种含有极性基团的化合物（包括药物、毒药和激素）上，如酚、醇、胺和羧酸等，生成β-葡糖醛酸苷。生物转化硫酸化硫酸化反应是人体化学防御系统的一部分，同时在芳香胺、多环芳烃等许
蛋白质DNA相互作用的甲基化和尿嘧啶干扰分析法—甲基化
实验方法原理在甲基化干扰实验中，探针通过将鸟嘌呤N-7及腺嘌呤N-3位用硫酸二甲酯 (DMS)进行甲基化而产生。这些甲基化的碱基可被哌啶特异性切割。实验材料含有蛋白质结合位点的DNA片段试剂、试剂盒TE 缓冲液 pH 7.5 〜8.0硫酸二甲酯（DMS)DMS反应缓冲液DMS终止缓冲液10 mg m
生物转化的分类
生物转化中的结合反应由于结合物种类的不同可分为下列几种类型，各种类型结合反应举例如下：葡萄糖醛酸化肝细胞微粒体中含有非常活跃的葡糖醛酸基转移酶，它以尿苷二磷酸葡糖醛酸（UDP-葡糖醛酸）为供体，催化葡糖醛酸基转移到多种含有极性基团的化合物（包括药物、毒药和激素）上，如酚、醇、胺和羧酸等，生成β-葡糖
改良半微量检测方法检测鱼粉蛋白质的过程
鱼粉，鱼粉用一种或多种鱼类为原料经加工后的高蛋白质饲料原料。动物鱼类蛋白质检测主要包括新鲜度、药物残留、卫生指标等。新鲜度差，会严重降低鱼粉的品质，甚至丧失饲用价值。用标准酸液滴定从而计算含量。本试验根据此原理，在半微量检测方法的基础上改良，使检测更简易、快捷。 一、所需试剂 1、１
蛋白质与多肽提取分离方法3
1．3．4胶束电动毛细管层析（Micellar Electrokinetic Electorphoresis Chromatography, MECC）MECC的原理是在电泳液中加入表面活性剂，如SDS，使一些中性分子带相同电荷分子得以分离。特别对一些小分子肽，阴离子、阳离子表面活性剂的应用都可使之
方案1－蛋白质和多肽－MALDIMS－分析的一般方法
实验材料冷冻干燥样品试剂、试剂盒校准标准品基质溶液甲醇仪器、耗材MALDI 质谱仪MALDI 板实验步骤1.吸取 0.5ul 的基质溶液，加到 MALDI-MS 分析所用的金属样品板上的样品孔中（为了准确起见，请使用2ul 的移液器）。2.在基质干燥之前，迅速加入 0.5ul 的标准品或样品到基质中
基本方案2－直接－Southern－杂交检测异常扩增和甲基化实验
实验材料基因组DNA试剂、试剂盒5 X 限制性缓冲液10 X Ficoll载样缓冲液1 X TAE 缓冲液变性缓冲液转性缓冲液中性缓冲液杂交缓冲液仪器、耗材Whatman 3MM 滤纸Nytran SuPercharge Turboblotter Rapid Downward Transfer 系统
什么是甲基化
甲基化是指从活性甲基化合物(如S-腺苷基甲硫氨酸)上将甲基催化转移到其他化合物的过程。可形成各种甲基化合物，或是对某些蛋白质或核酸等进行化学修饰形成甲基化产物。在生物系统内，甲基化是经酶催化的，这种甲基化涉及重金属修饰、基因表达的调控、蛋白质功能的调节以及核糖核酸(RNA)加工
什么是甲基化？
甲基化是指从活性甲基化合物(如S-腺苷基甲硫氨酸)上将甲基催化转移到其他化合物的过程。可形成各种甲基化合物，或是对某些蛋白质或核酸等进行化学修饰形成甲基化产物。在生物系统内，甲基化是经酶催化的，这种甲基化涉及重金属修饰、基因表达的调控、蛋白质功能的调节以及核糖核酸(RNA)加工。
甲基转移酶的基本信息
已知有各种不同的转甲基酶，以S-腺苷蛋氨酸、甜菜碱（betain）和二甲基噻亭（dimethylthetin）作为甲基的供体，把氨基、羟基、硫氢基（thiol）甲基化。结合在四氢叶酸上的活性C1单位的还原而生成甲基，通过5-甲基四氢叶酸转甲基酶与同型半胱氨酸（homocysteine）被甲基化而生成
甲基转移酶的基本信息
已知有各种不同的转甲基酶，以S-腺苷蛋氨酸、甜菜碱（betain）和二甲基噻亭（dimethylthetin）作为甲基的供体，把氨基、羟基、硫氢基（thiol）甲基化。结合在四氢叶酸上的活性C1单位的还原而生成甲基，通过5-甲基四氢叶酸转甲基酶与同型半胱氨酸（homocysteine）被甲基化而生成
羧苄西林钠的检查方法
酸碱度取本品,加水制成每1ml中含20mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为6.0~7.5。溶液的澄清度与颜色取本品5份,各0.60g,分别加水10ml使溶解,溶液应澄清无色;如显浑浊,与1号浊度标准液(通则0902第一法)比较,均不得更浓;如显色,与黄色或黄绿色3号标准比色液(通则090
羧苄西林钠的检查方法
检查酸碱度取本品,加水制成每1ml中含20mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为6.0~7.5。溶液的澄清度与颜色取本品5份,各0.60g,分别加水10ml使溶解,溶液应澄清无色;如显浑浊,与1号浊度标准液(通则0902第一法)比较,均不得更浓;如显色,与黄色或黄绿色3号标准比色液(通则0
羧甲司坦的检查方法
检查酸度取本品,加水制成1%的混悬液,依法测定(通则0631),pH值应为2.8~3.0溶液的透光率取本品0.50g,加1mol/L氢氧化钠溶液10ml溶解后,照紫外-可见分光光度法(通则0401),在430nm的波长处测定,透光率不得少于95.0%氯化物取本品0.20g,加稀硝酸10ml使溶解,用
碳酸饮料中还原糖含量的检测方案
一、应用背景碳酸饮料（汽水）类产品是指在一定条件下充入二氧化碳气的饮料。碳酸饮料，主要成分包括：碳酸水、柠檬酸等酸性物质、白糖、香料，有些含有咖啡因，人工色素等。除糖类能给人体补充能量外，充气的“碳酸饮料”中几乎不含营养素，过量饮用对身体有害。还原糖是指具有还原性的糖类，能够还原斐林(H.vonFe
氧化还原电位和还原电位相等吗
不相等。1、氧化还原电位就是用来反映水溶液中所有物质表现出来的宏观氧化还原性，氧化还原电位越高，氧化性越强，氧化还原电位越低，还原性越强。2、还原电位，还原剂失掉电子的的倾向或氧化剂得到电子的倾向成为氧化还原电势。
羧苄西林钠的类别和规格
类别B-内酰胺类抗生素,青霉素类贮藏严封,遮光,冷处(2~10℃)保存。制剂注射用羧苄西林钠
3酮类固醇还原酶
中文名称3-酮类固醇还原酶英文名称3-ketosteroid reductase定 义编号：EC 1.1.1.270。一种依赖NADP(H)的酶，主要作用是使类固醇激素失活，催化4α-甲基-5α-胆固醇基-7-内-3β-醇与4α-甲基-5α-胆固醇基-7-内-3β-酮相互转化，也作用于5α-胆固基
蛋白质的微量测序分析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 凝胶缓冲液谷胱甘肽疏基乙酸考马斯亮蓝仪器、耗材 电泳仪微量注射器实验步骤 1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。4.
蛋白质的微量测序分析实验
本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒