方案12胶内蛋白质的S吡啶乙基化实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒β-巯基乙醇还原缓冲液仪器、耗材冷冻干燥离心机去离子水温箱冷冻干燥机小离心管移液管塑料皿实验步骤方法 1: 整块凝胶的还原和 S-吡啶乙基化1.保证整块凝胶的正确染色和脱色（见方案 9)。2.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h。这一步骤是为了除去脱色液中的乙酸，否则乙酸会反方向地影响还原缓冲溶液的 pH 值。3.将凝胶转移到一个干净的器皿中。4.将凝胶浸在 50 ml 的还原缓冲溶液中（体积取决于凝胶和器皿的大小）。在 4℃ 孵育凝胶 2 h。5.加入 4-乙烯基吡啶到还原缓冲溶液中，终浓度为 2%(体积分数）。避光室温孵育 lh。6.加人过量的 2-巯基乙醇（终浓度 2%，体积分数），以终止烷基化作用。7.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h。这一步骤是为了除去/5-巯基乙醇，否则会干扰蛋白质水解。8.如果蛋白质条带不再可见，重......阅读全文
方案12－胶内蛋白质的S吡啶乙基化实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒β-巯基乙醇还原缓冲液仪器、耗材冷冻干燥离心机去离子水温箱冷冻干燥机小离心管移液管塑料皿实验步骤方法 1: 整块凝胶的还原和 S-吡啶乙基化1.保证整块凝胶的正确染色和脱色（见方案 9)。2.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验 方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化：大规模方法 方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化：微量方法 方案4 用Ellman 试剂测定自由巯基和二硫键实验 方案5 蛋白质的胰酶消化实验 方案6 用溴化氰切割 M
方案11－胶内蛋白质的硝酸银染色实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒乙酸显影液固定液甲醇硫酸银水溶液终止反应液仪器、耗材塑料皿摇床实验步骤1.将凝胶放在塑料皿中（用一次性的塑料皿或者彻底洗过的塑料皿），加入足量的固定液以覆盖凝胶。固定 20 min, 并轻轻摇动。2.弃掉固定液，加人足量的 50% 甲醇覆盖胶，轻轻摇动
方案10－胶内蛋白质的锌/咪唑负染色实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒固定液咪唑硫酸锌仪器、耗材摇床实验步骤方法 1: 直接用咪唑、SDS 和锌负染色1.将胶浸放在固定液中 20 min，并轻轻摇动。2.弃掉固定液，用去离子水洗胶 2 次，轻轻摇动 15 min。3.将胶与含有0.1%SDS 的 0.2mol/L 咪唑共孵
方案9－胶内蛋白质的考马斯亮蓝染色实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒考马斯亮蓝染色液脱色液仪器、耗材玻璃纸塑料制凝胶干燥框机械摇床塑料皿塑料包装纸高级纸巾实验步骤一、染胶除非特别提到，否则应在室温下进行染色。1.把含有目标蛋白质的凝胶放到装有考马斯亮蓝染色液的塑料皿中，使染色液覆盖凝胶。把塑料皿放到机械摇床上，在室温下染
方案13－胶内蛋白质的酶解和肽段提取实验
实验材料在二维凝胶电泳中分离的蛋白质试剂、试剂盒胶内胰酶消化缓冲液三氟乙酸（TFA)仪器、耗材冷冻干燥离心机小离心管水浴锅实验步骤1.切下凝胶上的蛋白质点，放人小离心管中。2.以 0.lmol/L NH4HCO3、50% 乙腈（用于胰酶）或 0.05mol/L Tris-HCl(PH9.3)、50%
方案3－蛋白质还原和S羧甲基化：微量方法
实验材料纯化的蛋白质样品试剂、试剂盒乙腈碘乙酸正丙醇还原缓冲液储存液仪器、耗材台式离心机HPLC 系统冷冻干燥离心机聚丙烯小管水浴或温箱实验步骤一、样品还原1.利用冷冻干燥离心机蒸发纯化的蛋白质样品溶液（含 0.01%~0.02% Tween-20)，直到少于 10ul。2.加入 150ul 储存液
方案2－蛋白质还原和S羧甲基化：大规模方法
实验方法原理蛋白质链间或链内完整的二硫键，会给酶解或化学裂解带来麻烦。如：1.二硫键连接的肽段洗脱物，在基于RP-HPLC的肽段作图中会产生单个的峰，从而使这些肽段图很难解释；2.最理想的方法是在序列测定之前，分离由S—S键连接的肽段，否则会使序列数据的解释变得复杂；3.没有断裂二硫键的蛋白质不便于
方案12－应用分子扫描器进行蛋白质组分析实验
试剂、试剂盒乙腈α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA)α-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（TAME）氨基黑封端（capping)试剂考马斯亮蓝 R250HCl石蜡油PBS-TweenTris-Cl胰酶凝胶电泳试剂仪器、耗材电转膜仪电泳系统IAV膜MALDI 样品板质谱仪PVDF 膜旋转杂交仪UV 可见分光光
蛋白质免疫印迹实验制备分离胶、积层胶
制备分离胶、积层胶 1）所需器材：制冰机、制胶槽、Teflon梳子、小烧杯、手套、大冰盒、去离子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸钠）、10%AP（过硫酸铵）、TEMED（四甲
用三乙基氧四氟硼酸的烷基化实验
实验方法原理蛋白质通过氨基键氧的烷化固定到聚合物上。这个反应的烷化试剂必须由二乙醚中的表氯醇（1-氯-2，3-环氧丙烷）和三氟化硼二乙基醚盐合成，方程式如下：合成过程中要严格避免水的痕迹，同时要考虑到试剂的毒性。实验材料蛋白质溶液试剂、试剂盒二乙醚表氯醇三氟化硼二乙基醚盐二氯甲醇仪器、耗材滴液漏斗实
用三乙基氧四氟硼酸的烷基化实验
基本方案 实验方法原理 蛋白质通过氨基键氧的烷化固定到聚合物上。这个反应的烷化试剂必须由二乙醚中的表氯醇（1-氯-2，3-环氧丙烷）和三氟化硼二乙基醚盐合成，
用三乙基氧四氟硼酸的烷基化实验
实验方法原理 蛋白质通过氨基键氧的烷化固定到聚合物上。这个反应的烷化试剂必须由二乙醚中的表氯醇（1-氯-2，3-环氧丙烷）和三氟化硼二乙基醚盐合成，方程式如下：合成过程中要严格避免水的痕迹，同时要考虑到试剂的毒性。实验材料 蛋白质溶液试剂、试剂盒 二乙醚表氯醇三氟化硼二乙基醚盐二氯甲醇仪器、耗材 滴
滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验
实验方法原理 凝胶过滤层析是根据蛋白质分子大小不同而达到分离效果的，凝胶过滤填料中含有大量微孔，只允许缓冲液及小分子量蛋白质通过，而大分子蛋白质及一些蛋白复合物则被阻挡在外。因此，高分子量的蛋白质在填料颗粒间隙中流动，比低分于量蛋白更早地被洗脱下来。最大的蛋白质分子最早流出柱子，因为它们在到达柱底前
滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验
凝胶过滤层析法 实验方法原理 凝胶过滤层析是根据蛋白质分子大小不同而达到分离效果的，凝胶过滤填料中含有大量微孔，只允许缓冲液及小分子量蛋白质通过，而大分子蛋白
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也没有 原因：比较多
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也没有 原因：比较多
方案5－蛋白质的胰酶消化实验
实验材料冻干的目标蛋白质试剂、试剂盒CaCl2NH4HCO3苯甲基磺酰氟（PMSF)胰酶贮存液Tween-20仪器、耗材聚丙烯试管水浴箱实验步骤1.冻干的蛋白质底物溶解在 1% 的碳酸氢铵中，控制使用尽量少的溶液体积，以达到较高的底物浓度。当蛋白质底物很微量（如小于 1mg) 时，加入 Tween-
方案1－蛋白质的过甲酸氧化实验
实验材料冻干的纯化蛋白样品试剂、试剂盒甲酸氢溴酸过氧化氢NaOH 固体仪器、耗材旋转蒸发器小试管实验步骤1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中，在室温下放置让，将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。3.在预冷的小试管中，将蛋白质溶解于 50ul 过甲酸中（
蛋白质组实验全套流程方案2
聚丙烯酰胺凝胶的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）5101520253040506% 水2.65.37.910.613.215.921.226.5 30%丙烯酰胺溶液123456810 1.
蛋白质组实验全套流程方案1
蛋白质组实验流程双向电泳的样品的制备样品制备原则样品制备是双向电泳中最关键的一步，将直接影响2-DE结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法，尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原则：1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；2）减少对蛋白质的人为修饰；3）破坏
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位点分析实验磷酸化位点的确定
实验方法原理 磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 l
蛋白质胶凝作用的原理
蛋白质的胶凝作用是溶胶或溶液在适当条件下转变为凝胶(冻胶)的过程。 可看作溶胶聚沉过程中的一个阶段。胶凝时胶体失去聚结稳定性，但仍有动力学稳定性，是特殊的半固体状态，胶体质点相互联结，形成网状结构，结构空隙中填满液体，不生成沉淀。胶体质点形状不对称和亲水性强时，在强电解质作用下可以发生胶凝。憎
磷酸化位点分析实验磷酸化位点的确定
磷酸肽的化学测序 磷酸肽的质谱分析 源后衰变 用酶和化学方法去磷酸化 实验方法原理 磷酸化位点的确定也使用一
方案12－通过阵列检测来研究蛋白质小分子相互作用
实验材料用于标记的小牛血清白蛋目标小分子载有蛋白质阵列的玻片试剂、试剂盒单功能活性染料Cy-3或Cy-5磷酸盐缓冲溶液含有 500mmol L甘氨酸的 PBS二琥珀酰亚胺戊二酸（DSG)NN’-二琥珀酰亚胺碳酸盐硫代琥珀酰亚胺酯含 0.01g ml小牛血清白蛋白（BSA)的 PBST仪器、耗材荧光玻
蛋白质提取分离纯化鉴定的实验方案
一.血清ǐ-球蛋白的初步提取1. 血细胞与血清分离：取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞，上部为血清).2. 乳糜粒分离：4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心梯度液配置：离心管下部3/4容积加血浆，上部1/4容积
蛋白质提取分离纯化鉴定的实验方案
一.血清ǐ-球蛋白的初步提取1. 血细胞与血清分离：取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞，上部为血清).2. 乳糜粒分离：4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心梯度液配置：离心管下部3/4容积加血浆，上部1/4容积