免疫组化问题及解决办法

1、染色过强 原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长 降低抗体滴度(一般指浓缩性抗体)抗体 孵育时间:室温1小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB显色时间过长或DAB浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟,以显微镜下 观察为准2、非特异性背景染色 原因 解决办法操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 组织中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长 组织中含内源性生物素 正常非免疫动物血清再封闭 血清蛋白封闭不充分 延长血清蛋白封闭时间 3、染色弱 原因 解决办法抗体浓度过低,孵育时间过短 提高抗体浓度,孵育时间不能少于60分钟试剂超过有效使用期 及时更换试剂操作中,滴加试剂时缓冲液未沥干,致使试剂稀释 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液(但防止切片干燥)室温太低,低于15......阅读全文

免疫组化问题及解决办法

1、染色过强 原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长 降低抗体滴度(一般指浓缩性抗体)抗体 孵育时间:室温1小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB显色时间过长或DAB浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟,以显微镜下 观察为准2、非特异性背景染色 原因

免疫组化常见问题及其解决办法

1、 一抗从4度拿出后,为什么要进行37度复温?(1)一方面,防止切片从4度直接放入PBS易脱片;(2)另一方面,使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。(3)

免疫组化常见问题及对策

  免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理,检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛,成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题,大体归纳起来,主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。

免疫组化常见问题及对策

免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理,检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛,成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题,大体归纳起来,主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。现在

雷达物位计常见问题及解决办法

  一、雷达物位计的天线结疤  常见问题:通常,介电常数较小的挂料现象,在干燥状态下对仪表测量基本没有影响,但介电常数偏高的挂料现象,常会导致测量结果不准确。  解决办法:针对这一情况,建议采用压缩空气吹扫或清水冲洗的方式解除挂料现象,如果结疤较为顽固,应及时采用酸性清洗液清洗碱性结疤污垢,但在清洗

PH计的测量问题及解决办法

同一样品,两次测量的pH值不一样?温度变化或样品本身发生了化学反应,都会引起pH值的变化。所以,应尽量保持温度一致,并且避免化学反应。 同一样品,同时在两台pH计上测量,读数不一致由于两台pH计的校正条件不一样(如不同时间做的校正),造成测量值有差异。所以要用同一缓冲液在同一时间里对pH计进行校正,

质粒提取常见问题及解决办法

涂布棒在酒精蘸一下,然后烧一下,能不能保证把所用的菌烧死? 参考见解:涂布棒可以在酒精中保藏,但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会,烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒还是干烧较长时间后,冷却了再涂。同时作多个转化时,应用几个涂布棒免得交叉污染。原先测序鉴定没有问题的细菌,37℃摇菌后发现质粒大

免疫组化染色中“杂音”染色片的种类及解决办法

免疫组化除正常的真实的阳性信号外常常会遇到不正常的背景着色,这些非正常的着色称为“杂音”染色。“杂音”染色种类繁多,产生的原因也多种多样,为了便于说明,笔者将其归纳为下面几种。1、全片着色全片着色是指整个切片全都染上了颜色,着色的强度可深可浅,总之,分不清那些组织是阳性那些组织是阴性。出现这种现象的

色谱图反映的问题分析及解决办法

D含量高的成分峰1、样品溶剂选择不恰当:减少样品载量E、早出的峰变形样品溶剂选择不恰当:a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰柱外效应:a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)b、使用小体积的流通池G、K′增加时,脱尾更严重1、二级保留效应,反相模式:a、加入三乙

旋转蒸发仪常见问题及解决办法

旋转蒸发仪是我们实验室zui常用的设备,那么使用过程中出现问题如何解决呢,看到以下几段话,想必大家都能快速了解是哪方便面出现故障以及如何解决它们!一.电机飞车(只有zui高速)故障现象1.检查测速发电机线圈是否断路,用万用表量七芯插头“1、2”脚(插头对正槽两边)正常电阻400Ω左右。2.发电机线圈

PCR仪关于引物的问题及解决办法?

  1. 应该选择哪种纯化方法?  取决于实验目的和引物的长度  2. 为什么我订购了50nmol,但是收到却只有40nmol?  50nmol是起始量  3. 怎样制备100μM的储液?  体积(μl)=质检报告上的nmol数目×10  4. 怎样设计引物?  *一般长度20-30bp;  *至少

ELISA试验中常出现问题及解决办法

ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。除了盒子本身质量外,操作中很多因素都影响试验的正常结果。最常出现的问题是显色淡,灵敏度偏低、重复性不佳、假阳性结果和假阴性结果,不管出现什么样的结果,不但浪费客户的金钱、样本、精力,更重要的是对临床做出了危险判断。在这里我们分析ELISA试验非正常检测结

ELISA试验中常出现问题及解决办法

  ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。除了盒子本身质量外,操作中很多因素都影响试验的正常结果。zui常出现的问题是显色淡,灵敏度偏低、重复性不佳、假阳性结果和假阴性结果,不管出现什么样的结果,不但浪费客户的金钱、样本、精力,更重要的是对临床做出了危险判断。在这里我们分析ELISA试验非正

旋转蒸发仪常见问题及解决办法

旋转蒸发仪是我们实验室最常用的设备,那么使用过程中出现问题如何解决呢,看到以下几段话,想必大家都能快速了解是哪方便面出现故障以及如何解决它们!一.电机飞车(只有最高速)故障现象1.检查测速发电机线圈是否断路,用万用表量七芯插头“1、2”脚(插头对正槽两边)正常电阻400Ω左右。2.发电机线圈与外壳短

COD测定中常见问题及解决办法

   1、 采不到试剂或水样报警  (1)采样管堵塞造成无法提到试剂,检查堵塞位置,清洗或更换堵塞管路。  (2)如果九通阀堵塞在外部无法清除堵塞物的情况下方可拆开九通阀进行清洗。  (3)采样管漏气,检查采样管和九通阀相连的各个螺丝,是否压紧,有无漏气现象,如有请从新连接管路并压紧。  (4)高低

DNA测序常见问题分析及解决办法

常见问题 具体情况 可能的原因 处理办法 备注 样品准备问题

离心机常见问题及解决办法

1. 急停开关出现异常问题分析此类报警一般在离心机出现紧急故障按下急停开关后或设备重启时出现此类报警。处理方法只需对设备进行复位键,如复位失败需等30s后驱动变频器开关能自动切断后再进行复位即可。2. 分散单元位置不对问题分析此类报警一般在离心机开启后准备进行操作时或在分散过程中刮刀走到位后出现,由

电泳槽常见问题及解决办法

电泳槽时凝胶时间不对,那么通常胶在60min,1H内凝,如果凝的太慢,可能是TEMEN,APS剂量不够或者失效。APS应该现配现用,TEMED不稳定,容易被氧化成黄色。如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量过多,此时胶太硬易裂,电泳时易烧胶。纹理和托尾现:由于样品溶解不佳引起的,克服的方法可以在

免疫组化常见问题及解决方法

当免疫组化染色没有出现预期结果时,应系统地查找原因,而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入,是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体,以及所用的检测系统是否和一抗

免疫组化没有任何着色的解决办法

DAB是否有效,可通过DAB直接与二抗反应,若不显色,则是DAB有问题或是二抗有问题, 是否DAB失效或是二抗浓度太低,可更换DAB或提高二抗浓度。排除这两者原因,再摸索最佳条件。首先要弄明白,所谓的DAB染色是怎样来的,DAB和过氧化氢是HRP的底物,可以说有三个环节1:DAB是否在有效期,和是否

固相杂交反应的特点、问题及解决办法

  杂交反应的条件类似于传统的Southern或Northern杂交。具体的选择视研究目的而定,例如,进行多态性分析或杂交测序时,要求能够区分单个碱基的变异,所以需要较高的杂交严谨性;而用于表达谱检测的芯片为了提高检测的特异性、保证较高的灵敏度,需要较长的杂交时间,高的严谨性、高的样品浓度、较低的杂

甲醛分析仪常见问题及解决办法

 甲醛分析仪广泛应用于工业、农业、医药、科研机构等行业。能对烟草、造纸、食品、茶叶、饲料、谷物、化工原料、制药原料、纺织原料等样品所含的游离水份进行含量测试及数据打印。甲醛分析仪使用时常见问题解答  1、仪器显示负值或数值波动  仪器显示负值通常是人呼出气体的影响,检测时应将采样管进气口离开检测者1

高效液相色谱仪漂移问题及解决办法

高效液相色谱仪漂移问题及解决办法 基线漂移一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要半个小时的平衡时间,如果你用了缓冲溶液或缓冲盐,还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,但如果你在实验过程中发现基线漂移,则你要考虑下面的原因: 1、柱温波动。解决方法:控制好柱子和流动相的温度,检查

液相色谱仪的常见问题及解决办法

  液相色谱仪作为一种高精密仪器,如果在使用过程中不按照正确操作的话,就容易导致一些问题。其中zui常见的就是柱压问题、漂移问题和峰型异常问题。本文主要说明柱压问题。一、柱压问题柱压问题是使用液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压

离子色谱仪常见问题及解决办法

、由流动相到泵之间的管路中有气泡,怎么排除?排除方法如下:先将与泵相连的塑料流路接头拧下来,用洗耳球吸满去离子水,从与泵段相连的流路管中注入,将流路管中的气泡排除干净。然后再将流动相瓶(一般为去离子水瓶)抬高,再将流路接头与泵连接好。启动泵,打开泵内排气阀选钮,将泵内气泡排除干净,一般观察为流出液比

ICPAES分析常见的故障问题及解决办法

1、影响等离子体温度的因素有:   ①载气流量:流量增大,中心部位温度下降;   ②载气的压力:激发温度随载气压力的降低而增加;   ③频率和输入功率:激发温度随功率增大而增高,近似线性关系,在其他条件相同时,增加频率,放电温度降低;   ④第三元素的影响:引入低电离电位的释放剂的等离子体,电子温度

离子色谱仪常见问题及解决办法

  1、电导检测器常见故障  电导检测器常见故障是检测池被污染。  故障原因:污染物主要来源于没有经过适当前处理的样品,如浓度过高、复杂的样品基体等。  2、分析泵常见故障  故障现象:基线的噪声加大,色谱峰形变差(出现乱峰)。  解决办法:分析泵常见故障是泵内产生气泡和漏液  3、抑制器使用中的常

真空泵油的常见问题及解决办法

  一、真空管路或系统内返油  1.油蒸汽返流至真空管路或系统中  2.油蒸汽压不对  3.停泵时,油返流  4.截流阀板上的密封件损坏   5.抽气管路底部密封件腐蚀或损坏   解决方法:  1.清洗真空泵后换符合要求的油  2.清洗真空泵后换符合要求的油  3.检查并更换截流阀  4.更换截流阀

离子色谱仪常见问题及解决办法

  1、电导检测器常见故障  电导检测器常见故障是检测池被污染。  故障原因:污染物主要来源于没有经过适当前处理的样品,如浓度过高、复杂的样品基体等。  2、分析泵常见故障  故障现象:基线的噪声加大,色谱峰形变差(出现乱峰)。  解决办法:分析泵常见故障是泵内产生气泡和漏液  3、抑制器使用中的常