Nature子刊：蛋白质绝对定量的新方法
生物学研究离不开定量。对于绝对定量，通常需要利用已知浓度的分子绘制标准曲线。最近，麻省理工学院、梅约诊所和赛默飞世尔科技的研究人员在《Nature Communications》杂志上介绍了一种新方法，能利用串联质谱仪对多个蛋白质进行绝对定量。 这种方法称为MARQUIS（Multiplex Absolute Regressed Quantification with Internal Standards），依靠两种现成的技术：重同位素标记的合成肽段以及质谱的同位素标记试剂。iTRAQ和TMT等试剂有着相同的分子量，但在质谱仪内产生特征的片段。 在MARQUIS方法中，对于每个待定量的肽段，研究人员建立重同位素标记的肽段。他们以不同的量混合这些肽段，并在组织或细胞裂解后立即将一种混合物加入每个生物样品中。研究小组的负责人Forest White认为：“这是关键的一步。你要尽早加入这些肽段，这样重同位素标记肽段和......阅读全文
用质谱数据对肽段从头测序实验（二）
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤第二种方法，也称为"nested peptide secquendng", 是在一个 Edman 降解循环中多次加入多肽/蛋白质底物心在此法中加入过量易挥发的 Edman 试剂以使反应完全，每一循环中的过显试剂可通过蒸发被除去。经 MALDI-MS 分析得到肽
液质联用中的数据采集和分析
质谱仪器的主要控制系统包括电源控制、同步与时序控制、数据采集三大部分，三大部分的整合则是通过控制软件来达成，本文不再详述。下面主要介绍一些常见术语和一些特殊的方法。 1、质谱图 质谱图的X轴代表质荷比，Y轴代表离子峰的相对强度或以离子数目呈现。原始质谱图称作轮廓谱图（Profile Spec
蛋白质组学几种定量方法的案例解读（二）
经典案例题目：A tumour suppressor network relying on the polyamine-hypusine axis（一种基于多胺Hypusine轴（Polyamine-hypusine axis）的新型肿瘤抑制网络）期刊：Nature主要技术：iTRAQ定量文章摘要：
中科院Nature开源性刊物发表蛋白质研究新技术
来自中科院大连化学物理研究所的研究人员开发一种新型的同位素标记策略，可对6种不同的蛋白质样品进行可靠标记并进行同时定量。并证实这一策略适用于高通量检测蛋白质周转(turnover)动态。这一研究成果发表在国际著名刊物Nature旗下开源性刊物Scientific Reports上。 中
高效液相质谱联用法检测乳铁蛋白的介绍
质谱仪通过测量特定离子的质核比来对待测物进行准确定性，通常与高效液相色谱或气相色谱仪等联用来达到精确定量的目的。由于蛋白质分子质量太大，在对蛋白质的分析中，通常将其利用各种手段如胰蛋白酶水解为肽段的混合物，再通过对其中的特异性肽段的测定来检测该蛋白。有报道称研究人员将蛋白质组学技术、同位素标记技
质谱技术在蛋白质组研究中的分析方法介绍
2003年人类基因组精细图绘制完成，是人类科学史上一个里程碑式的事件。后基因组时代的研究重点自然落在了蛋白质头上。为啥？因为中心法则告诉我们，基因的产物——蛋白质，是生命活动的最终执行者。与基因组类比，研究生物体内全套蛋白质的科学，就是蛋白质组学。基因组计划完成的同年，人类蛋白质组计划启动，令人
赛默飞世尔科技精彩亮相第六届AOHUPO大会
2012年5月5~7日，第六届亚太人类蛋白质组组织(AOHUPO)大会在国家会议中心卡隆重召开，这是亚太地区规模最大、影响最广、学术水平最高的蛋白质组学学术峰会。赛默飞世尔科技作为此次大会的金牌赞助商，展示了其蛋白质组学领域的最新产品技术及解决方案。赛默飞世尔科技展台大会入口处摆设了赛
蛋白质定量技术――iTRAQ
摘要：同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术，具有较好的定量效果、较高的重复性，并可对多达四种不同样本同时进行定量分析。研究人员采用iTRAQ蛋白质定量技术加速蛋白质的定量研究，当然这门新兴的工具仍然需要进一步的完善。 仅仅知道蛋白质的身
iTRAQ技术常见问题与答疑
1、什么是iTRAQ？ iTRAQ技术，即同位素相对标记与绝对定量技术。该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究，具有较好的定量效果、较高的重复性。由于其能够同时对多达8种样品进行标记分析,故在生命科学的各个领域得到了广泛的应用。2、iTRAQ的原理是什么？
iTRAQ蛋白质组学研究原理、优势及实验流程介绍
大家好，我是黄博，吉凯一小兵，蛋白质组学实验狗。今天的故事是一个作文从没及格过的闷骚理科男（我一直是这么定位自己的）是如何被陈博内个大尾巴狼生生逼来写文章的故事，真的是有血、有泪、有shi！情节需要，中间可能会穿插一些技术方面的内容，请各位自动忽略。 那是一个月黑风高的晚上，本人和大尾巴狼
Orbitrap－Exploris－480：丰富的定量流程介绍（一）
前两期中，我们分别介绍了Orbitrap Exploris™ 480的设计原则和硬件性能，卓越的定性能力，FAIMS Pro可选组件以及对TMT定量的改进。本期，飞飞将为您展示Orbitrap Exploris™ 480最绚烂的一笔—— 极致丰富的定量流程BoxCar, SureQuant定量流程
一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白（二）
Skyline 中嵌入的 mProphet 软件会根据同一肽段的多个子离子峰的 feature 进行打分。 Feature 包括子离子共流出峰形、保留时间偏差、 dotp 值、信噪比等。为了区分假阳性的子离子峰， mProphet 可以建立 decoy 库，也可以将打分排名第二的肽段作为decoy，
军事医学科学院：差异表达蛋白统计研究方法比较
随着质谱技术的快速发展， 蛋白质组学已成为继基因组学、转录组学之后的又一研究热点， 寻找可靠的差异表达蛋白对于生物标记物的发现至关重要. 因此， 如何准确、灵敏地筛选出差异蛋白已成为基于质谱的定量蛋白质组学的主要研究内容之一. 目前， 针对该问题的研究方法众多， 但这些方法策略的适用范围不尽相同
军事医学科学院：差异表达蛋白统计研究方法比较
随着质谱技术的快速发展, 蛋白质组学已成为继基因组学、转录组学之后的又一研究热点, 寻找可靠的差异表达蛋白对于生物标记物的发现至关重要。 因此, 如何准确、灵敏地筛选出差异蛋白已成为基于质谱的定量蛋白质组学的主要研究内容之一。 目前, 针对该问题的研究方法众多, 但这些方法策略的适用范围不尽相同
一小时－DDA－鉴定－DIA－定量－4000－个－Hela－蛋白（二）
500 ng Hela 细胞裂解液用相同的色谱柱，相同的色谱梯度，将 QE HF 切换至 DIA 扫描模式进行 3 次 DIA 数据采集。在一次扫描循环中，目标母离子质核比范围 400–1000，四极杆的隔离窗口为 12 Da，包含 50 次 MS/MS 扫描。每一张 MS/MS 谱图中
液体闪烁计数的双标记同位素测量的应用
液体闪烁计数器特点之一是能作双同位素分析，配备两个或三个以上独立的脉冲高度分析器的多道装置，并具有脉冲相加和线性门装置，在每种同位素的最佳计数条件下同时测量它们，就能区分发射不同能量的同位素，假定有一个含有³H和C-14的样品，我们将仪器中脉冲高度分析器多道装置中的CH1调³H的
总cDNA探针的同位素随机标记及点杂交
实验概要本实验方法介绍了总cDNA探针的同位素随机标记及点膜杂交技术。实验步骤1. 总cDNA探针的同位素随机标记参照Promega公司试剂盒说明书提供的实验流程进行。 1) 将除Klenow大片段外的所有药品，在冰上溶化； 2) 取25ng总cDNA作为模板，100℃，l0min，立即冰上
放射免疫分析的同位素标记介绍
标记物标记物是指通过直接或间接的化学反应将放射性核素连接到被标记分子上所形成的化合物。制备高比度、高纯度和具完整免疫活性的标记物是建立高质量放射免疫分析法的重要条件。在放射免疫技术中,常用的放射性核素有放射γ射线和β射线两大类。前者主要为 125I、131I、57Cr 和 60Co;后者为3H、14
同位素标记亲和标签(ICAT)技术的技术原理
同位素亲和标签技术是一种用于蛋白质分离分析技术，此技术是蛋白质组研究技术中的核心技术之一。该技术用具有不同质量的同位素亲和标签( ICATs) 标记处于不同状态下的细胞中的半胱氨酸，利用串联质谱技术，对混合的样品进行质谱分析。来自两个样品中的同一类蛋白质会形成易于辨识比较的两个不同的峰形，能非常准确
哪种离子化方式产生的肽段易带多个电荷？
在蛋白质组学所涉及的质谱技术中，常见的离子化方式有 MALDI 和 ESI 。目前，对这两种方法的原理和离子化的具体细节还没有一个公认的阐述。但经验表明， MALDI 所产生的离子化肽段只带一个电荷（正离子方式）。而 ESI 所产生的离子化肽段往往带有多个电荷。
6495C三重四极杆LC/MS系统定量分析宿主细胞蛋白质杂质
摘要：本应用简报介绍了 mAb 产品中亚 ppm 宿主细胞蛋白质杂质的定量分析方法。本工作流程采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台、Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统和 Agilent 6495C 三重四极杆 LC/MS 系统。 前言：宿
多肽稳定标同位素记技术与甲基化修饰技术
1. 多肽稳定标同位素记技术 随着多肽在生物医药领域越来越广泛和深入的应用，标记和修饰性的多肽种类的需求越来越多，质量需求也越来越高。稳定同位素标记(同位素示踪法)就是其中典型的一种。稳定同位素标记多肽是指用稳定同位素标记的氨基酸合成的多肽。与标准氨基酸相比，同位素标记是指用2H，13C或1
荧光标记肽技术常用的多肽修饰荧光物质
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
timsTOF－Pro最新4D高通量超高灵敏度蛋白组学研究技术
分析测试百科网讯 近日在第15届美国人类蛋白质组学年会上，布鲁克宣布了Evosep One低流速色谱与timsTOF Pro液质联用系统在高灵敏度、高通量血浆蛋白质组学方面取得的进展。布鲁克还重点介绍了PEAKS，Protein Metrics和MaxQuant 4D蛋白质组学软件的进展，这些软
一小时－DDA－鉴定－DIA－定量－4000－个－Hela－蛋白（一）
引言数据非依赖性的扫描模式（data-independent acquisition, DIA）是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。它的理念是用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量。DIA 扫描模式中，超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并快
一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白（一）
引言数据非依赖性的扫描模式（data-independent acquisition, DIA）是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。它的理念是用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量。 DIA 扫描模式中，超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G 乙酸 甲醇 Achromobacter 胰蛋白酶 I 三氟乙酸 乙腈 2-丙醇
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
分子生物学中最重要的环节之一是对微量蛋白质进行分析，使对编码待研究蛋白的 cDNA 序列的克隆成为可能。为有效地做到这一点，通常需要知道蛋白质的内序列。在这一方面，肽段的有效分离是极重要的。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒考马斯亮蓝 G乙酸甲醇Achromobacte
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G乙酸甲醇Achromobacter 胰蛋白酶 I 三氟乙酸乙腈2-丙醇仪器、耗材 SpeedVac 型旋转浓缩器Tween-20UltrafreeTM MC 滤器C18 反相 HPLC 柱实验步骤 材料与设备考马斯亮蓝 G(0.05% 的乙酸-20% 甲醇溶液）乙酸 (5
PK120－的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
实验材料PK-120试剂、试剂盒Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S－200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪Applied Biosy