Nature子刊：蛋白质绝对定量的新方法
生物学研究离不开定量。对于绝对定量，通常需要利用已知浓度的分子绘制标准曲线。最近，麻省理工学院、梅约诊所和赛默飞世尔科技的研究人员在《Nature Communications》杂志上介绍了一种新方法，能利用串联质谱仪对多个蛋白质进行绝对定量。 这种方法称为MARQUIS（Multiplex Absolute Regressed Quantification with Internal Standards），依靠两种现成的技术：重同位素标记的合成肽段以及质谱的同位素标记试剂。iTRAQ和TMT等试剂有着相同的分子量，但在质谱仪内产生特征的片段。 在MARQUIS方法中，对于每个待定量的肽段，研究人员建立重同位素标记的肽段。他们以不同的量混合这些肽段，并在组织或细胞裂解后立即将一种混合物加入每个生物样品中。研究小组的负责人Forest White认为：“这是关键的一步。你要尽早加入这些肽段，这样重同位素标记肽段和......阅读全文
赛默飞世尔科技“蛋白质组学解决方案”网络视频讲座
3月30日下午，赛默飞世尔科技蛋白质组学市场专员唐佳向大家作了题为《蛋白质组学研究方法和Thermo蛋白质组学解决方案》的报告
多磷酸化肽标记技术
蛋白质磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一种蛋白质翻译后修饰，20世纪50年代以来一直被生物学家看作是一种动态的生物调节过程。在细胞中，大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关，如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质及多
质谱检测法如何进行蛋白质分析？
MS/MS操作模式 串联质谱仪通常使用的都是离子模式来鉴定蛋白质的氨基酸序列。目前所有的MS/MS质谱仪都具有该功能。不过其它特殊的质谱仪也具有MS/MS功能。如果要发现蛋白质中的某个功能基团则需要用到母离子扫描功能或者中性丢失扫描功能，而这就必须用到三重四级杆质谱仪，如Q-Q-Q质谱仪，或四
方案10－定量蛋白质组学的体内蛋白质同位素标记实验
实验材料酿酒酵母试剂、试剂盒丙酮乙腈NH4HCO3细胞生长培养基干冰冰水2-巯基乙醇甲醇铁氰化钾蛋白提取试剂组合蛋白酶抑制剂硫代硫酸钠仪器、耗材离心蒸发仪离心管血细胞计数器孵育器MALDI- TOF 质谱仪和 LC-MS MS 系统超声波破碎仪分光光度计实验步骤一、培养细胞二、提取蛋白的细胞准备三、
iTRAQ蛋白质组学研究原理、优势及实验流程（二）
“那iTRAQ的原理是什么，有哪些优势？”“iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）技术由美国AB SCIEX公司研发，最早于2004年美国质谱年会上被提出，是一种基于体外等重同位素标记的相对定量技术。该技术利用同
稳定同位素标记技术的原理
高中生物实验中涉及的同位素标记主要有3H、18O、14C、42K、131I、35S、32P、15N等，那么这些元素是否都具有放射性呢？其实不然！所谓同位素是指具有相同原子序数（即质子数相同，因而在元素周期表中的位置相同），但质量数不同，亦即中子数不同的一组核素。如果某同位素能够自发地从原子核内部放出
稳定同位素内标物/标记物的介绍
同位素标记 (同位素内标)较于其同种元素的未标物具有质子数相同中子数变化的特点，通过用同位素取代特定原子来标记反应物，然后使反应物进行反应，并检测中子数变化的原子，可通过反应、代谢途径或细胞跟踪同位素。同位素内标物与对应的未标物理化性质相似，通过光吸收和免疫的方法无法区分，在色谱中如果将同位素内标物
介绍DNA探针的同位素标记方法
1.缺口平移法(nick translation)缺口平移法是最常用的探针标记法,反应体系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三种三磷酸脱氧核糖核苷酸、一种同位素标记的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如
稳定同位素标记技术的原理
高中生物实验中涉及的同位素标记主要有3H、18O、14C、42K、131I、35S、32P、15N等，那么这些元素是否都具有放射性呢？其实不然！所谓同位素是指具有相同原子序数（即质子数相同，因而在元素周期表中的位置相同），但质量数不同，亦即中子数不同的一组核素。如果某同位素能够自发地从原子核内部放出
稳定同位素标记技术的原理
高中生物实验中涉及的同位素标记主要有3H、18O、14C、42K、131I、35S、32P、15N等，那么这些元素是否都具有放射性呢？其实不然！所谓同位素是指具有相同原子序数（即质子数相同，因而在元素周期表中的位置相同），但质量数不同，亦即中子数不同的一组核素。如果某同位素能够自发地从原子核内部放出
稳定同位素标记技术的原理
高中生物实验中涉及的同位素标记主要有3H、18O、14C、42K、131I、35S、32P、15N等，那么这些元素是否都具有放射性呢？其实不然！所谓同位素是指具有相同原子序数（即质子数相同，因而在元素周期表中的位置相同），但质量数不同，亦即中子数不同的一组核素。如果某同位素能够自发地从原子核内部放出
定量蛋白质组学方法分类介绍
【蛋白研究系列专题】-4丨定量蛋白质组学方法，您值得拥有 1 背景和意义 从生命活动的直接执行者——蛋白质的角度研究生命现象和规律（特别是疾病防治和病理研究）已成为研究生命科学的主要手段。而这些研究往往离不开对细胞、组织或器官中含有蛋白质种类和表达量的研究。对处不同时期、不同条件下
定量蛋白质组学方法分类
1 背景和意义从生命活动的直接执行者——蛋白质的角度研究生命现象和规律（特别是疾病防治和病理研究）已成为研究生命科学的主要手段。而这些研究往往离不开对细胞、组织或器官中含有蛋白质种类和表达量的研究。对处不同时期、不同条件下蛋白质表达水平变化的研究，识别功能模块和路径，监控疾病的生物标志物，这些研究都
Orbitrap－Exploris－480：丰富的定量流程介绍（二）
平行反应监控（Parallel Reaction Monitoring, PRM）是Orbitrap系列仪器上的高分辨靶向定量方法，类似于三重四极杆质谱上的选择反应监控（Selected Reaction Monitoring, SRM）,其是进行潜在标志物验证的金标准方法之一。 但是PRM
清华大学仪器共享平台QE－plus－纳升液相色谱串联orbitrap高分辨质谱
仪器名称：QE plus 纳升液相色谱串联orbitrap高分辨质谱仪器编号：A23000063产地：美国生产厂家：Thermo fisher型号：QE plus出厂日期：20230828购置日期：20230828所属单位：药学院>药学技术中心>PKPD平台放置地点：郑裕彤医学楼E206固定电话：0
马来酸酐二次衍生技术的定量蛋白质组学方法研究
基于马来酸酐二次衍生技术的定量蛋白质组学方法研究田姗姗1，柏雪1，翟贵金1，张锴*,1，张玉奎2（1天津医学表观遗传学协同创新中心，天津医科大学基础医学院，天津 3000702中国科学院大连化学物理研究所，国家色谱研究分析中心，辽宁省大连市 116023）摘要：定量蛋白质组学在当前生物医学研究中发挥
形形色色的蛋白标签（二）
体内标记 对于in vivo标记，人们通常用化学标记的营养物喂养细胞，让它们掺入新合成的蛋白、核酸或代谢物。之后收获细胞，分离出这些分子，从整体上查看细胞行为，或利用抗体或其他捕获试剂来研究某个蛋白。 蛋白质组研究人员常用的方法是SILAC，即细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记。两
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒二硫苏糖醇 碘代乙酰
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸
用质谱数据对肽段从头测序实验
方案一 方案二 方案三 实验方法原理 单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列，即相邻肽段间相差一个氨基酸残基，用质谱分析肽阶梯，通常用 MALD
用质谱数据对肽段从头测序实验
实验方法原理 单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列，即相邻肽段间相差一个氨基酸残基，用质谱分析肽阶梯，通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱，但碎片离子由人工完全解析。用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生，由 C 未端或N未端
指尖“质谱”：纳米孔技术打造便携肽段质谱仪
质谱仪对蛋白质研究来说可谓是无价之宝，但是它们通常体积庞大，价格昂贵，局限于专门的实验室。当下，生物医学领域的下一个革命直指蛋白质组学——对不同细胞类型中表达的蛋白质进行大规模分析。尽管你的身体里每一个细胞似乎都携带相同的DNA，但不同细胞类型的蛋白质表达差异很大。此外，蛋白质生产出来后会被修饰
蛋白质组学几种定量方法的案例解读
上期分享的蛋白组学内容，是不是有些小伙伴还绕在云里雾里呀？这次，小编用实例说话，帮您梳理清楚。 一、Label-free定量 Label-free定量，顾名思义就是不需要对比较样本做特定标记处理，只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化
质谱技术在蛋白质组研究中的分析方法
2003年人类基因组精细图绘制完成，是人类科学史上一个里程碑式的事件。后基因组时代的研究重点自然落在了蛋白质头上。为啥？因为中心法则告诉我们，基因的产物——蛋白质，是生命活动的最终执行者。与基因组类比，研究生物体内全套蛋白质的科学，就是蛋白质组学。基因组计划完成的同年，人类蛋白质组计划启动，令人激动
非同位素标记探针的酶法检测
实验材料 探针试剂、试剂盒 PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺仪器、耗材 盖玻片水浴锅实验步骤 1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片（“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步）。2. 由1×SSC中取出玻片，尽可能吸去残留玻片上的缓冲液，但不要使玻片干涸。加200 μl 封
蛋白质组学几种定量方法的案例解读（一）
一、Label-free定量Label-free定量，顾名思义就是不需要对比较样本做特定标记处理，只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化，通常用于分析大规模蛋白鉴定和定量时所产生的质谱数据。Label-free技术又可分为基于谱图数（Spectra Co
蛋白质计量是什么
蛋白质存在于我们生活的每一个角落，几乎无处不在。通常来讲，蛋白质研究包括对氨基酸序列的鉴定和量值分析两部分，简单讲就是要搞清楚“是什么、有多少”。蛋白质计量是对蛋白质量值进行精确测定的活动，其定量结果可以溯源至质量的国际单位制（SI），最终实现单位统一、量值准确一致
液质联用中的数据采集和分析
质谱仪器的主要控制系统包括电源控制、同步与时序控制、数据采集三大部分，三大部分的整合则是通过控制软件来达成，本文不再详述。下面主要介绍一些常见术语和一些特殊的方法。 1、质谱图 质谱图的X轴代表质荷比，Y轴代表离子峰的相对强度或以离子数目呈现。原始质谱图称作轮廓谱图（Profile Spec
蛋白质组学几种定量方法的案例解读（二）
经典案例题目：A tumour suppressor network relying on the polyamine-hypusine axis（一种基于多胺Hypusine轴（Polyamine-hypusine axis）的新型肿瘤抑制网络）期刊：Nature主要技术：iTRAQ定量文章摘要：