高产学者Nature揭示RNA甲基化的新功能
MicroRNA（miRNA）是一类约22nt大小的内源RNA，在基因表达中起着重要的调控作用，参与了多种生理和病理过程。miRNA生成是一个复杂的过程，初级miRNA（pri-miRNA）需要经过细胞核和细胞质内的一系列加工才能形成成熟的miRNA。 整个流程的第一步是microprocessor复合体加工pri-miRNA。microprocessor复合体由RNA结合蛋白DGCR8和内切酶Drosha组成，DGCR8负责识别pri-miRNA茎环结构，然后招募DROSHA切割双链RNA，生成前体miRNA（pre-miRNA）。虽然人们对pri-miRNA加工机制研究得比较透彻，但至今还不清楚DGCR8在众多转录本二级结构中识别并结合pri-miRNA的机制。 洛克菲勒大学的研究团队发现，m6A是促进miRNA生成的关键性转录后修饰。这项研究发表在三月十八日的Nature杂志上，文章的通讯作者是洛克菲勒大学副教授S......阅读全文
RNA－标准转录反应
实验材料 模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒 TE 异丙醇 3mol LNaAc 无水乙醇 5×转录缓冲液 l00 mmol L DTT RNasin rATPrGTPrUTP 各 2.5 mmol L [α42P] rCTP SPGT3 或 T7RNA 聚合酶 TE-饱和的酚氯仿异戊醇 DN
3.3－核转录分析
核转录失控分析时，在体外将细胞核分离出来，然后在放射性同位素标记的核苷酸存在下进行转录，所合成的 KNA 均因掺入同位素而被标记，此混合 RNA 与固定在硝酸纤维素滤膜 h 的某一特定甚因的 DNA 探针杂交，就可以反映出该基因的转录狀态和转录速率。实验材料cDNA0.45um 硝酸纤维素 尼龙膜酵
转录图谱的定义
转录图谱是在识别基因组所包含的蛋白质编码序列的基础上绘制的结合有关基因序列、位置及表达模式等信息的图谱。在人类基因组中鉴别出占具2%~5%长度的全部基因的位置、结构与功能，最主要的方法是通过基因的表达产物mRNA反追到染色体的位置。
转录的定义介绍
转录（Transcription）是遗传信息从DNA流向RNA的过程。即以双链DNA中的确定的一条链（模板链用于转录，编码链不用于转录）为模板，以A、U、C、G四种核糖核苷酸为原料，在RNA聚合酶催化下合成RNA的过程。作为蛋白质生物合成的第一步，进行转录时，一个基因会被读取并被复制为mRNA，即特
什么是转录中止？
转录终止： 当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键，RNA-DNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复成双链状态，而RNA聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来，这就是转录的终止（termination。
转录组测序原理
而转录组测序即是利用高通量测序技术，将细胞或组织中的全部或部分mRNA, miRNA, lnc RNA 进行测序分析的技术。通过RNA-seq，也就是转录组测序，可以帮助我们了解各种比较条件下所有基因的表达差异包括：正常组织与肿瘤组织；药物治疗前后的表达差异；发育过程中，不同发育阶段，不同组织的表达
RNA－大量转录合成
实验材料 模板 DNA 或质粒 试剂、试剂盒 TE TE 饱和酚 氯仿
RNA－标准转录反应
实验材料 模板 DNA 或质粒 试剂、试剂盒 TE 异丙醇 3mol LNaAc
胞外转录反应
实验概要RNA聚合酶由一条多胜肽 (polypeptides)所构成，其在进行转录反应时所须辨认的启动子长度仅20bp左右，而且转录起始位置非常明确，转录效能良好，成了目前进行胞外转录反应时的最佳选择。要进行胞外转录反应时，仅需将目标基因次选殖 (subclone)至带有SP6，T3或T7启动
转录物的定义
中文名称转录物英文名称transcript定 义在DNA模板上由RNA聚合酶催化转录生成的mRNA。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
共转录的定义
中文名称共转录英文名称cotranscription定 义(1)原核生物的基因以多顺反子或操纵子形式存在,被转录为一个共同的信使核糖核酸(mRNA)。(2)通过基因操作使不同的基因同时在细胞或组织中一起转录。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调控(二级学科)
什么是转录作图？
中文名称转录作图英文名称transcription mapping定 义标明转录物序列在基因组上的位置。应用学科遗传学（一级学科），基因组学（二级学科）
rRNA转录加工过程
主要加工方式是切断。真核细胞的rRNA基因（rDNA）属于一种被称为丰富基因（redundant gene）族的DNA的序列，即染色体上一些相似或完全一样的纵列串联基因（tandem gene）单位的重复。由不能转录的间隔区（spacer）把这些单位分隔开。在这里，间隔区与内含子是不同的概念。在分类
转录因子和转录因子之间可以有相互作用吗
可以转录因子真核生物转录起始十分复杂，往往需要多种蛋白因子的协助，转录因子与RNA聚合酶Ⅱ形成转录起始复合体，共同参与转录起始的过程。根据转录因子的作用特点可分为二类；第一类为普遍转录因子,它们与RNA聚合酶Ⅱ共同组成转录起始复合体时，转录才能在正确的位置开始。除TFⅡD以外，还发现TFⅡA，TFⅡ
体外转录合成单链RNA探针:体外转录法
体外转录法l 体外转录合成单链RNA探针1. 用适当的限制酶消化超螺旋质粒DNA制备5 pmol的线性模板DNA。取一小份消化的DNA（100ng）进行琼脂糖凝胶电泳分析。如有必要，再补加限制性酶进行温育，直至不再残存痕量的未消化DNA。2. 如必须用产生3’突出端
反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法
实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸，盖上平板，置于37℃培养箱中温育1~2 h。2. 将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或
筛选或验证RNA修饰直接靶点，研究RNA修饰靶基因的调控...
筛选或验证RNA修饰直接靶点，研究RNA修饰靶基因的调控机制技术简介用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过Western Blot检测特定的RNA结合蛋白是否与R
聚乙二醇修饰剂（PEG修饰剂）及其他衍生物（一）
一、聚乙二醇修饰剂 近年来，蛋白质多肽等生物大分子药物和天然产物药物分子被越来越多的应用于疾病治疗领域，极大地推动了医药事业的发展。然而，生物大分子在药用过程中的作用却由于其半衰期短、容易产生免疫原性抗原性、易被酶解、有一定药理毒性等问题被大大限制。为有效解决该问题，国家生化工程技术研
聚乙二醇修饰剂（PEG修饰剂）及其他衍生物（二）
分枝型PEG修饰G-CSF 、直链型PEG修饰G-CSF及未修饰G-CSF 的药代动力学比较，分枝型PEG修饰产物半衰期可提高5倍以上。PEG-PTS修饰G-CSF的HPSEC检测，证明其具有高的修饰选择性，且活性保持60%以上 mPEG-hydrazide修
聚聚乙二醇修饰剂（PEG修饰剂）及其他衍生物
一、聚乙二醇修饰剂 近年来，蛋白质多肽等生物大分子药物和天然产物药物分子被越来越多的应用于疾病治疗领域，极大地推动了医药事业的发展。然而，生物大分子在药用过程中的作用却由于其半衰期短、容易产生免疫原性抗原性、易被酶解、有一定药理毒性等问题被大大限制。为有效解决该问题，国家生化
限制修饰系统作用机理
有些细菌体内含有限制酶，可将双股DNA切断，之后其他的内切酶再将切下的片段降解，因此能将入侵的外来DNA摧毁；有些病毒则演化出对抗此系统的机制，它们的DNA经过了甲基化或糖基化的修饰，可阻碍限制酶的作用；另外还有一些病毒，如T3及T7噬菌体，则合成出一些可抑制限制酶的蛋白质；而为了进一步对抗病毒，有
修饰性PEG的用途介绍
聚乙烯亚胺在细胞培养中可增强黏附力较弱的细胞的黏附力。PEI是阳离子聚合物，细胞外表面的负电荷附着到覆盖有PEI的培养皿底面，为细胞和平板之间提供了更强的附着力。不过，聚乙烯亚胺有很强的细胞毒性。聚乙烯亚胺是历史上继多聚赖氨酸之后发现的第二种聚合物转染试剂。PEI能将DNA缩合成带正电荷的微粒，这些
修饰性工具酶功能应用
（一）末端转移酶（terminal transferase）l 末端转移酶是一类不依赖于DNA模板的DNA聚合酶。l 特性：该类酶可以在没有模板链存在的情况下，将核苷酸连接到dsDNA或ssDNA的在3’－OH。特别是对于平末端的双链DNA末端加尾十分有用。l 最常见的用途：给外源DNA片段及载体分
糖基化修饰过程
一、 糖基化修饰蛋白质的糖基化是一种最常见的蛋白翻译后修饰，是在糖基转移酶作用下将糖类转移至蛋白质和蛋白质上特殊的氨基酸残基形成糖苷键的过程。研究表明70%人类蛋白包含一个或多个糖链1%的人类基因组参与了糖链的合成和修饰。二、糖基化修饰功能在参与糖基化形成的过程中,糖基转移酶和糖苷酶扮演了重要的角色
多肽修饰合成常用策略（一）
多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物，普遍存在于生物体内，迄今在生物体内发现的多肽已达数万种。多肽在调节机体各系统、器官、组织和细胞的功能活动以及在生命活动中发挥重要作用，并且常被应用于功能分析、抗体研究、药物研发等领域。随着生物技术与多肽合成技术的日臻成熟，越来越多的多肽药物被开发并应
糖肽多肽糖基化修饰
通过化学键将单糖（如葡萄糖、半乳糖）或者多糖连接到多肽上的过程，我们将其称之为多肽糖基化修饰，通过糖基化修饰后得到的多肽，我们称之为糖肽（Glycopeptides）；糖肽对膜蛋白功能常常有很重要的影响，对特异的生物学功能起介导作用，比如：对细胞具有保护、稳定、组织及屏障等多方面作用；可作为外源性受
关于修饰酶的相关介绍
体内有些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，使该酶活性发生改变，这种调节称为共价修饰调节(covalent modification regulation)，这类酶称为修饰酶(prosessing enzyme)。 碱性磷酸酶去除5′－P，可防止二分子DNA片段5′端P基团自身空间障
多肽修饰合成常用策略（二）
4、豆蔻酰化和棕榈酰化用脂肪酸酰化N末端可以让多肽或蛋白质与细胞膜结合。N末端上豆蔻酰化的序列可以使Src家族的蛋白激酶和逆转录酶Gaq蛋白靶向结合细胞膜。利用标准的偶联反应即可将豆蔻酸连接到树脂-多肽的N末端，生成的脂肽可在标准条件下解离并通过RP-HPLC纯化。5、糖基化糖肽类如万古霉素和替考拉
修饰酶的基本信息
体内有些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，而使其在高活性形式和相对较低的活性形式之间互相转变，这种调节称为共价修饰调节(covalent modification regulation)，这类酶称为修饰酶(prosessing enzyme)。例如某些酶的巯基发生可逆的氧化还原，一些酶以
RNA修饰相关酶PCR芯片
应用场景：通过关键酶/蛋白的RNA表达变化，确定样品表型与特定RNA 修饰的联系 优势：预制的PCR板,覆盖68个针对不同RNA修饰的Writers/Erasers/Readers基因。精心优化的引物Tm值均一，并经过了严格的预实验验证，无须摸索引物设计和测试。工业化生产的高度均一的PCR