Cell子刊突破:用CRISPR来控制基因激活的新策略
来自芬兰赫尔辛基大学的研究人员开发出了一种新方法,可以在不改变基因组的情况下激活细胞内的基因。这种方法的应用包括引导干细胞分化。相关研究论文发布在干细胞研究领域领先期刊《Stem Cell Reports》上。 开发这种方法的是在赫尔辛基大学Meilahti医学院Timo Otonkoski教授实验室攻读博士的年轻研究人员Diego Balboa和Jere Weltner。 调控细胞分化是当前干细胞研究最热门的课题。该分化过程是建立在细胞中的一些基因激活及失活这一基础之上,因此研究人员正在致力寻找一些方法来控制基因的激活。研究人员梦想着能够在特定时刻精确地激活和失活一些基因。 Otonkoski说:“我们可以利用特化细胞来生成未分化的干细胞,又称作诱导多能干细胞(iPS细胞),并且我们可以通过提供适当的生长环境来调控这些细胞的分化。然而,我们却无法充分控制这一分化过程——这一过程有可能进展顺利,但在最后关头,在至关重要......阅读全文
胚胎中细胞基因打靶方法
胚胎中细胞基因打靶方法置换型设计物的制备1.选择靶基因的一个部分作为设计物的组成,还包括有靶基因的另一个部分作为Southern杂交探针,以鉴定细胞中是否已发生同源重组之用。2.在质粒载体中构建一个克隆;neo基因能阻断靶基因的表达,在neo的两侧保持保留同源区;在同源区外的置换型设计物中包含一个胸
体细胞基因治疗的方法介绍
体细胞基因治疗(somatic cell gene therapy)是指将正常基因转移到体细胞,使之表达基因产物,以达到治疗目的。这种方法的理想措施是将外源正常基因导入靶体细胞内染色体特定基因座位,用健康的基因确切地替换异常的基因,使其发挥治疗作用,同时还须减少随机插入引起新的基因突变的可能性。对特
体细胞基因治疗的方法介绍
体细胞基因治疗(somatic cell gene therapy)是指将正常基因转移到体细胞,使之表达基因产物,以达到治疗目的。这种方法的理想措施是将外源正常基因导入靶体细胞内染色体特定基因座位,用健康的基因确切地替换异常的基因,使其发挥治疗作用,同时还须减少随机插入引起新的基因突变的可能性。对特
外源基因进入细胞主要方法介绍
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和
简化人类细胞基因编辑的新方法
用RNA指导的CRISPR-Cas9系统的动物和植物基因组工程,正在改变着生物学。与其他基因工程工具相比,这种技术更容易使用,并且更有效,因此,在其发现后的短短几年内,就已经被广泛应用于世界各地的实验室,也成为编辑人类多能干细胞、人类胚胎干细胞基因组最常用的技术。1月6日,Cell子刊《Cell
新型治疗方法:细胞与基因治疗技术
细胞与基因治疗技术作为新型治疗方法,为无数罕见病及癌症患者带来了希望。 据Pharmaprojects发布的《Pharma R&D Annual Review 2020》一文中,预计2020年全球范围的基因治疗领域的在研管线可达1273,对比2019年同比增长接近50%;预期2020年全球范围
镰形细胞性贫血的基因诊断方法
镰形细胞性贫血的基因诊断:已知突变基因是编码β珠蛋白链的第6位密码子由GAG变为GTG,从而使缬氨酸取代了甘氨酸,因此可用如下方法进行诊断。1)RFLP诊断:已知限制酶MstⅡ切割的识别顺序是CCTNAGG,它能切割正常β链中CCTGAGG序列,但不能切割突变了的CCTGTGG(A→T)。这样,由于
癌细胞-PCR基因扩增原理及方法步骤
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右
肺细胞-PCR基因扩增原理及方法步骤
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右
细胞学图进行基因定位的方法介绍
通过种种方法可以测得基因之间的距离,但图距并不表示绝对长度,而且在不同的生物中同一图距代表不同的实际长度。通过细胞遗传学的方法可以测定基因的实际位置,这样绘制的基因位置图称为细胞学图,而通过一般遗传学方法绘制的图则称为遗传学图。在杂合的二倍体生物中,由于显性的野生型基因的存在,隐性的突变基因得不到表
检测肝癌细胞基因表达的实验方法!
检测肝癌细胞基因表达的实验方法! 材料与方法 ⒈材料 人肝癌细胞系HepG2由中国医科大学科学实验中心保存。DMEM培养基和胎牛血清购自BioInd公司。细胞转染试剂Lipofectamine 3000和Trizol购自Invitrogen公司。BDNF AS质粒、BDN
检测肝癌细胞基因表达的实验方法
材料与方法⒈材料人肝癌细胞系HepG2由中国医科大学科学实验中心保存。DMEM培养基和胎牛血清购自BioInd公司。细胞转染试剂Lipofectamine 3000和Trizol购自Invitrogen公司。BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒以及空载体质
关于基因转移转染细胞的处理方法介绍
①如果不进行其它处理(如用氯喹、甘油或丁酸钠等试剂处理,见后),可在细胞培养16~24h后,吸出培养液和沉淀物,用PBS将单层细胞再洗一次。然后按下述③d操作。 ②在许多情况下,同时用氯喹处理细胞,可提高DNA摄入率。氯喹可能是通过抑制溶酶体水解酶类对DNA的降解而起作用的。氯喹浓度及其处理时
细胞化学词汇细胞癌基因
中文名称:细胞癌基因存在位置:正常的细胞基因组激活前作用:促进正常细胞生长增殖分化和发育激活后作用:使细胞发生恶性转化定义:存在于正常的细胞基因组中,与病毒癌基因有同源序列,具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能。细胞癌基因:存在于正常的细胞基因组中,与病毒癌基因有同源序列,具有促进正常细
新方法:超低细胞数表观基因组研究
日本九州大学和东京理工学院的科学家们研发了一种使用非常少量的细胞,范围从100到1000的细胞,来分析DNA-蛋白质相互作用的新技术。他们的方法可以捕获前所未有的细胞内表观遗传组信息,该技术奖促进生物标记的发现并为精准医学开辟新道路。 这项被称为染色质整合标记测序(Chromatin Inte
体细胞交换法进行基因定位的方法介绍
三点测验和着丝粒距离法中所测定的都是发生在减数分裂中的染色体交换。1936年美国遗传学家C.斯特恩在果蝇中发现体细胞在有丝分裂过程中也可以发生染色体交换(见连锁和交换)。50年代中G.蓬泰科尔沃等在研究构窠曲霉时发展起来一种利用体细胞交换的系统的基因定位方法。在进行有丝分裂的杂合二倍体细胞中,体细胞
Nature方法:大型单基因敲除人类单倍体细胞库
由奥地利科学院和维也纳Haplogen的研究人员领导的一个研究小组,利用一种称之为“基因捕获”( gene trap)的技术构建出了一个人类单倍体细胞库,该细胞库中包括有3000多种细胞系,每个细胞系都具有一种不同的突变基因。这项研究工作发布在8月25日的《自然方法》(Nature Me
基因编辑细胞疗法
17日,Sangamo Therapeutics公司宣布,欧洲药品管理局(EMA)孤儿药委员会(COMP)公布了详细资料,支持授予其在研体外基因编辑细胞疗法BIVV003孤儿药资格,治疗镰刀型细胞贫血病(SCD)。
Science:新方法在活细胞中改变基因组
来自MIT Broad研究所和Rockefeller大学的研究者发展了一种新的方法,能够在活细胞内精确地增减基因,从而操作基因组。研究人员称,这项技术可以提供一种简单易行,并且相对低价的方法来从事各项研究,包括设计能够产生生物能源的有机体,设计动物模型来研究人类疾病,发展新的治疗方法等。
新方法可在大量细胞内自动测定基因表达
《自然—方法学》报道了一种可在数千个人体细胞中自动测量基因表达的方法。该方法使单分子荧光原位杂交技术(smFISH)成倍放大,并能确定细胞内RNA转录发生的位置,为了解RNA转录的生物功能提供了重要线索 通过将目标与荧光探针相结合,smFISH可用于检测细胞内的特定RNA序列,但要将每个R
基因转移方法
(1)特异正常基因的分离与克隆:应用重组DNA和分子克隆技术结合基因定位研究成果,已有不少基因并将会有更多人类基因被分离和克隆,这是基因治疗的前提,在当代分子生物技术条件下,一般来说,只要有基因探针和准确的基因定位,任何基因都可被克隆。除此,如今既可人工合成DNA探针,还可用DNA合成仪在体外人工合
“基因剪刀”让皮肤细胞“变身”干细胞
美国科学家用“基因剪刀”编辑实验鼠细胞的基因组,成功使皮肤细胞转变成干细胞,为培育诱导多能干细胞开辟了新路。诱导多能干细胞是对成熟细胞“重编程”得到的,像胚胎干细胞一样具备分化成多种细胞的潜力,可用于修复受损的组织和器官。 “基因剪刀”指CRISPR基因编辑技术,用它能像在电脑上编辑文章一
单细胞分离用于单细胞基因扩增
单细胞分离连接不同管径大小的毛细玻璃针,可分离捕获各种非贴壁状态的单细胞和微粒等,如细菌、酵母、藻类细胞、植物花粉、原生动物单细胞、悬浮细胞、血液细胞、免疫细胞、卵细胞、各种悬液中单细胞及特殊标记的单细胞等。 单细胞分离用于各种类型的细胞分离培养、纯化、检测;获得单克隆细胞;用于单细胞基因扩增,
“基因剪刀”让皮肤细胞“变身”干细胞
美国科学家用“基因剪刀”编辑实验鼠细胞的基因组,成功使皮肤细胞转变成干细胞,为培育诱导多能干细胞开辟了新路。 诱导多能干细胞是对成熟细胞“重编程”得到的,像胚胎干细胞一样具备分化成多种细胞的潜力,可用于修复受损的组织和器官。“基因剪刀”指CRISPR基因编辑技术,用它能像在电脑上编辑文章一样,
《细胞》:单细胞测序助力基因重组图谱
来自斯坦福大学医学院等处的研究人员发表了题为“Genome-wide Single-Cell Analysis of Recombination Activity and De Novo Mutation Rates in Human Sperm”的文章,首次公布了来自一个成人男子91个
细胞化学词汇基因重复
中文名称:基因重复外文名称:Geneduplication意 义:含有基因的DNA片段发生重复原 因:因同源重组作用
细胞化学词汇开关基因
中文名称:开关基因英文名称:switch gene定 义:控制个体发育途径及起始和终止的基因。引起总发育体系在可选择的相关的细胞途径中进行转换。开关基因的产物控制具有正常功能的发育,某些情况下也可造成致癌性的转化。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇核基因
中文名称:核基因英文名称:nuclear gene定 义:真核生物中位于细胞核内染色体上的基因。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇时序基因
中文名称:时序基因英文名称:temporal gene定 义:按照发育阶段的顺序进行表达的基因。应用学科:遗传学(一级学科),发育遗传学(二级学科)
细胞化学词汇结瘤基因
中文名称:结瘤基因英文名称:nodulation gene;nod gene定 义:根瘤菌与豆科植物共生时宿主根部生结节所必需的基因。应用学科:遗传学(一级学科),经典遗传学(二级学科)