检测肝癌细胞基因表达的实验方法！
检测肝癌细胞基因表达的实验方法！ 材料与方法 ⒈材料 人肝癌细胞系HepG2由中国医科大学科学实验中心保存。DMEM培养基和胎牛血清购自BioInd公司。细胞转染试剂Lipofectamine 3000和Trizol购自Invitrogen公司。BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒以及空载体质粒购自上海和元生物公司。无内毒素质粒中提试剂盒购自天根生化科技公司。Goscript TM Reverse Transcription System反转录试剂盒和GoTaq ® qPCR Master Mix试剂盒购自Promega公司。BDNF AS和BDNF引物购自Origene公司。BDNF兔抗人一抗和GAPDH引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司。β-actin小鼠抗人一抗和羊抗兔IgG、羊抗小鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术公司。BCA蛋白质含量检测试剂盒购自南京......阅读全文
检测肝癌细胞基因表达的实验方法
材料与方法⒈材料人肝癌细胞系HepG2由中国医科大学科学实验中心保存。DMEM培养基和胎牛血清购自BioInd公司。细胞转染试剂Lipofectamine 3000和Trizol购自Invitrogen公司。BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒以及空载体质
检测肝癌细胞基因表达的实验方法！
检测肝癌细胞基因表达的实验方法！ 材料与方法 ⒈材料 人肝癌细胞系HepG2由中国医科大学科学实验中心保存。DMEM培养基和胎牛血清购自BioInd公司。细胞转染试剂Lipofectamine 3000和Trizol购自Invitrogen公司。BDNF AS质粒、BDN
Science：新型单细胞基因表达检测技术
发表在最新一期《科学》(Science)杂志上的一篇研究论文，证实了一种新型的大规模平行测序技术可借助于新一代测序(NGS)在单细胞水平上检测基因表达。 论文作者、来自Cellular Research, Inc公司的Christina Fan博士、Glenn Fu博士以及Stephen Fo
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
实验材料 带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒pVgRXR培养的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 新霉素松甾酮 AZeocin培养液实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。新霉素松甾酮 A蜕皮激素的另一种类似物是 muristerone A(Sig
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
实验材料 带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒 带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒 pVgRXR 培养的哺乳动物细胞
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
下面的方案是从蜕皮激素诱导的哺乳动物表达系统（Invitrogen 公司）附带的方案修改而来。Stratagene 公司也出售相似的系统。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验材料带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并
哪些实验方法可检测细胞中某种蛋白表达量
蛋白质分子中关键活性部位氨基酸残基的改变，会影响其生理功能，甚至造成分子病（molecular disease）。例如镰状细胞贫血，就是由于血红蛋白分子中两个β亚基第6位正常的谷氨酸变异成了缬氨酸，从酸性氨基酸换成了中性支链氨基酸，降低了血红蛋白在红细胞中的溶解度，使它在红细胞中随血流至氧分压低的外
表达蛋白检测实验
实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒
表达蛋白检测实验
免疫印迹法 免疫沉淀法 点印迹法 实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是
基因表达的系列分析实验
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技术的一种高灵敏度研究基因表达的方法，可得到 mRNA 文库的定性及定量信息。自 1995 年此技术产生以来，发表了大量的相关文章，表明 SAGE 可同时检测大量基因的表达水平的变化。实验材料玻璃及塑料器皿试剂、试剂盒溶液与缓冲液引
基因表达的系列分析实验
实验材料 玻璃及塑料器皿 试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 引物
基因表达的系列分析实验
实验材料 玻璃及塑料器皿试剂、试剂盒 溶液与缓冲液引物仪器、耗材 试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤 一、一般原则若用于 SAGE 的 RNA 有足够的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按实验方案 A 进行。这里我们还提供了实验方案 B，它在多
细胞的分化与基因表达
细胞分化是个体发育过程中细胞之间产生稳定差异的过程。所以，细胞分化是指同源细胞通过分裂，发生形态、结构与功能特征稳定差异的过程。细胞分化的实质是基因选择性表达的结果，在个体发育过程中基因按照一定程序相继激活的现象，称为基因的差次表达（differential expression）或顺序表达（Seq
表达基因的克隆策略与分离表达基因序列的技术方法
人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中，发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3～5％。基因组中绝大部
bcl2凋亡基因表达的检测原理和方法
（一）原理：细胞凋亡是一个受基因调控的主动过程，bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因，正常细胞的激活和发育过程中都有表达，但在发育成熟的细胞中，其表达降低，在低分化或癌变的细胞中，bcl-2高表达与肿瘤的发生、发展相关，bcl-2过量表达常导致对化疗药物的耐药性而阻止细胞凋亡，影响治疗效果，一旦细胞发
多药抗药基因的表达实验
多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测特定基因的过度表达。一、细胞总RNA提取1. 收集约5×107个细胞，冷PBS洗涤。2. 加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的异硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸钠，0.025 mol/l 构橼酸钠pH7.0，0.25 mol/
多药抗药基因的表达实验
实验方法原理 大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。实验材料 RNA试剂、试剂盒 PBS氯仿异丙醇萘酸异硫氰酸肽十二烷基肌酸钠构橼酸钠乙酸钠二疏基乙醇乙醇Taq酶仪器、耗材 离心机紫外分光光度计琼脂糖凝胶电泳PCR仪实验步骤 一、细胞总RNA提取1. 收集约5×107
多药抗药基因的表达实验
PCR扩增法 实验方法原理 大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。 多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测这些特
除了基因检测，还有哪些方法可以检测肿瘤抑制基因的表达或功能状态？
除了基因检测，以下方法也可用于检测肿瘤抑制基因的表达或功能状态：免疫荧光法（IF）：类似于免疫组织化学，但是在荧光显微镜下观察荧光标记的抗体与目标蛋白的结合情况，能更清晰地显示蛋白的定位和表达。酶联免疫吸附测定（ELISA）：定量检测体液（如血液、脑脊液等）中肿瘤抑制基因编码的蛋白含量。转录组分析：
单个脑细胞的基因表达谱
科研人员报告了一种根据基因表达谱为人类大脑的单个细胞分类的方法。人类大脑含有许多种类的细胞，它们的基因表达模式有差别。此前为这些细胞类型分类的方法一直限于使用几个基因或蛋白质标记物以及分析整个细胞群。Stephen Quake及其同事使用单细胞RNA测序分析了来自人类大脑组织的466个个体细胞的
痘苗病毒系统基因表达实验
实验方法原理 本方案从构建外源基因位于 PT7 和 T7 终止子之间的质粒载体开始，然后用重组质粒通过脂质体介导转染已经被vTF7-3（可以持续表达T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的细胞。收获后，基因产物在细胞内的表达可以用脉冲标记的方法或用「重组痘苗病毒及其产物的鉴定实验」中叙述的方法分
痘苗病毒系统基因表达实验
重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染 两种重组痘苗病毒共感染细胞 实验方法原理 本方案从构建外源基因位于 PT7 和 T7 终止子之间的质
表达谱基因芯片实验
表达谱基因芯片可应用于：（1）疾病诊断；（2）新药开发；（3）环境保护。实验方法原理按照预定位置固定在固相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微点阵阵列。在一定条件下，载体上的核酸分子可以与来自样品的序列互补的核酸片段杂交。如果把样品中的核酸片段进行标记，在专用的芯片阅读仪上就可以检测到杂交信号
基因表达系列分析实验（SAGE）
实验材料感兴趣的细胞或组织试剂、试剂盒糖原EDTA缓冲液SDSBSATween 20连接子T4 DNA 连接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸钠乙醇DMSOPCR引物乙酸铵DNA ladder聚丙烯酰胺 TBE凝胶DNA参照pZErO-1 质粒TE缓冲SOC培养液Tris · Cl仪器、耗材微量离心
癌基因编码蛋白表达的检测
实验步骤展开
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏，zui可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和
最准确的基因表达检测方法——RNA测序遭遇“信任”危机？
当前，RNA测序成为了一种常用工具。 利用RNA测序，研究人员能够定量地检测各种生物体的基因表达，从而更好地了解细胞中正在发生的事情以及特定基因的功能。 RNA测序的准确性 早在2014年，《Nature Biotechnology》上发表了三篇文章。它们属于RNA测序质量控制（SEQC）
环境对果蝇基因表达的效应实验
表型的许多方面都受到生物体遗传组成和其生存环境的影响,因此可以说表型是基因型与环境相互作用的产物。果蝇卷曲翅基因的表达常受到环境的修饰,通过观察该基因在不同环境下的表达情况,即可显示环境对基因表达的影响。卷曲翅基因(cu)对温度敏感,纯合体(cu/cu)果蝇在高温下培养时翅膀顶端弯曲(图7-1),但
环境对果蝇基因表达的效应实验
实验方法原理 实验材料 弯翅果蝇试剂、试剂盒 果蝇培养基 乙醚仪器、耗材 恒温培养箱 立体解剖镜 培养瓶及麻醉瓶实验步骤 1.从保种的弯翅果蝇(基因型为cu/cu)培养瓶中建立3种培养体系,雌蝇不要求是处女蝇。在培养瓶上贴上20℃、25℃、28℃标签,初始培养温度均为25℃,一直培养到化蛹(这样可以