NatureMethods发布CRISPR新技术：CRISPRX
斯坦福大学遗传学系，药理学系的几位学者合作，开发出了一种为原位蛋白质工程重利用体细胞超突变的新技术—— CRISPR-X ，这将能帮助科学家们创建复杂的原始遗传突变文库，分析完善蛋白质工程。 这一研究成果在线公布在10月31日的Nature Methods杂志上，文章的通讯作者是斯坦福大学Michael C Bassik副教授，他曾参与研发多项CRISPR新技术，比如前年研发的SunTag，这是一套分子挂钩，其能够将多个拷贝的生物活性分子挂到可用来靶向一些基因或其他的分子的蛋白质支架上，利用SunTag能增加CRISPR的变化。 目前通过定向进化法分析蛋白功能，进行蛋白质工程研究受限于整体诱变，或DNA文库构建方面的技术问题。这篇文章针对于此，研发出了一种为原位蛋白质工程重利用体细胞超突变的新技术：CRISPR-X。 研究人员催化激活休眠的 dCas9，令其召集携带MS2修饰sgRNAs的胞嘧啶脱氨酶(cytidine......阅读全文
大连化物所等发展出利用原位化学交联解码细胞中蛋白质动态结构的策略
近日，中国科学院大连化学物理研究所生物技术研究部生物分子高效分离与表征研究组研究员赵群、张丽华等，与中国科学院精密测量科学技术创新研究院副研究员龚洲合作，提出了利用原位化学交联-质谱技术（in vivo XL-MS），解码细胞中蛋白质动态结构的策略。该策略将AlphaFold2的结构作为先验信息
荧光原位杂交实验
实验方法原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变
荧光原位杂交介绍
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH）是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子（reporter molecule）结
原位杂交的应用
①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；④基因在染色体上的定位；⑤检测染色体的变化，如染色体数
原位PCR的基本方法
①固定组织或细胞:将组织细胞固定于预先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛处理，再灭活除去细胞内源性过氧化物酶.②蛋白酶K消化处理:用60ug/ml的蛋白酶K将固定好的组织细胞片55℃消化处理2h后，96℃2min以灭活蛋白酶K.③PCR扩增:在组织细胞片上，加PCR反应液，覆盖并加液体石蜡后，直接
原位PCR的应用范围
组织处理的要求 处理后的标本，既要保持组织，细胞的形态结构，并增加细胞膜通透性，又要充分暴露拟扩增的目的DNA或RNA，使引物、探针能有效进入胞浆中发生反应。 应用范围 主要应用于两方面： （1）检测外源性基因片段，提高检出率，集中在病毒感染的检查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；
RNA荧光原位杂交
原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点，应带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DAN或 RNA
原位杂交应用案例
对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。 将少数菌落转移到硝酸纤维素滤膜上 （1） 在含有选择
肽核酸原位杂交
肽核酸（peptide nucleic acids，PNA）是20世纪90年代初发现的新型DNA／RNA同类物，是一类人工合成的以电中性的肽链酰胺2—氨乙基甘氨酸组成的多聚酰胺键取代DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架而形成的类似核苷酸的物质。像传统的DNA序列那样，PNA寡聚体的氨基末端相当于DNA的5’
原位杂交实验步骤
原位杂交实验步骤一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1． 取400uL XL1-Blue菌种加入到含200ml LB培养基的锥形瓶中，37 ℃、100 rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1 mol／L CaCl_2重悬细菌，冰浴30 min， 离心，弃上清，倒
什么是原位测试技术
软土地区工程地质勘察应增加原位测试工作量，其布置应与钻探、室内试验的配合和对比，以提高勘察质量。原位测试成果的使用应考虑地区性和经验性。原位测试一般包括静力触探试验、十字板剪切试验，标准贯入试验、旁压试验、载荷试验及波速试验等。选用原位测试方法应以土层情况、设计参数的要求以及建筑物等级等因素确定。～
原位划痕仪基本试验
材料去除机理的研究对精密超精密制造具有重要意义。通过安装在扫描电子显微镜内的原位划痕试验装置，可以研究残留切屑对块体金属玻璃材料去除过程的影响。在刮擦过程中整个BMG的去除过程可以实时观测。动态观察立方隅角压头前刀面上片状切屑的形成和生长情况。实验结果表明，当大量切屑堆积在压头的前刀面上，阻碍物料向
原位PCR的反转录
原位PCR的反转录不同于原位PCR的过程包括两个：即蛋白酶消化后用无RNA酶的DNA酶消化过夜和原位PCR的反转录过程。此处主要介绍这两个过程，其余方法同原位PCR。1．DNA酶消化【试剂与配制】无RNA酶的DNA酶10×缓冲液：35μl 3mol/L NaAc，5μl 1mol/L MgSO4，6
原位光电分析测试系统
原位光电分析测试系统以扫描电子显微镜为基础，集成阴极荧光谱、微纳机械臂、外部电学测量等功能，构建了一个直观、实时和原位地研究先进功能材料和器件物理性能的系统，不仅可以实现对纳米材料或器件的原位发光的检测和电学物性的测试、纳米尺度的操作和控制、以及特定纳米光电子器件的构筑，还可以实现实时原位研究
RNA原位杂交实验
实验方法原理 原位杂交的原理是含有互补序列（探针）的被标记的单链 DNA 或 RNA 片段在适当 的条件下与细胞的 DNA 或 RNA 杂交形成稳定的杂交体。无论是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC
DNA探针原位杂交
1、4—6微米切片,用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鲜二甲苯脱蜡,10minX2（趁热脱蜡） 4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空气干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释,浓度为25μg/ml）,37℃消化1
原位杂交技术原理
荧光，又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。 在日常
原位电镜气相反应
气相反应气相反应因其在多领域的应用引起人们的广泛关注。很多化学反应是在催化剂辅助下，气相条件下发生的。对于纳米材料和生物分子，在实验条件下原位观察可以得到更多重要的信息。因此，原子尺度下原位研究气相反应，特别是气固界面的反应，可以帮助研究者们进一步理解材料的合成，性能及用途。文章总结了原位电镜在气相
原位电镜确认立方冰
水是宇宙中含量仅次于氢气的物质，而冰是宇宙中最常见的固体。它们是恒星形成的基础，也是生命之源。人们对冰的观察可以追溯到公元前。在西汉，诗人韩婴发现“凡草木花多五出，雪花独六出”；科技革命先驱开普勒曾发出疑问“为什么飘落的雪花总是六角片状？”。现在我们知道，这是因为在自然界中冰是一种属于六角密堆结构
荧光原位杂交实验
实验方法原理 用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上
原位电镜确认立方冰
自然界中常见的降雪大多都是水分子在灰尘矿物质等表面的凝聚生长，是最普遍的晶体生长现象，相应气固、液固相变物理/化学过程对应的物理机制被视为经典相变理论的原型模板。但这一自然条件下常见的宏观相变的微观机理受制于显微技术的发展一直面对着众多争议，其中一个受到气象学、晶体学、以及生物学等多个领域广泛关注但
荧光原位杂交实验
实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、
原位合成的应用范围
复合材料制备传统复合材料制备方法有粉末冶金法、喷射成型法和各种铸造技术即模压铸造、流变铸造和混砂铸造等。所有这些方法是将事先制备好的增强相加入处于熔融状态或粉末状态的基体材料中,于是传统的增强相被称为外加的。外加法制备的复合材料存在增强体颗粒尺寸粗大、热力学不稳定、界面结合强度低等缺点。为了克服这些
原位TLCFTIR法
该方法是采用红外漫反射光谱（DRIFTS）测定法对TLC板上的色谱斑点进行直接检测，最初是在1975年由Percival和Griffiths报道的。傅里叶红外光谱仪的漫反射装置见图11-6-25。一般在未点样前先测得薄层板背景光谱图，点样层析后再测得同样位置的分离谱带的红外光谱图，前后谱图经差谱可得
原位变温XRD表征
Bruker的Advanced D8上配备了变温台，而且是能通入反应气体，在基本模拟反应条件下观察一些催化反应的变化，其中XRD对应于催化剂结构的变化，而出来的气体通过GC等分析手段来分析温度变化对于催化性能的影响。 高温下催化剂通常有多种变化，我就我了解说几个，一个是非晶态催化剂在高温下会有相变化
原位热脱附技术
原位热脱附技术特别适合重污染的土壤区域，包括高浓度、非水相的、游离的以及源头的有机污染物。目前，原位热脱附技术可用于处理的污染物主要为含氯有机物(CVOCs)，半挥发性有机物(SVOCs)，石油烃类(TPH)，多环芳烃(PAHs)，多氯联苯(PCBs)以及农药等。目前，热脱附技术在石化工厂、地下油库
原位杂交实验步骤
原位杂交实验步骤 一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1． 取400uL XL1-Blue菌种加入到含200ml LB培养基的锥形瓶中，37 ℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1 mol／L CaCl_2重悬细菌，冰浴30 min，离心，弃上清，倒置，再加
原位杂交(含FISH)
原位杂交组织化学常用试剂及处理 一、杂交前准备 （一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售
原位合成芯片的概念
原位合成芯片是指将多个寡核苷酸片段用单核苷酸底物直接合成到载体的特定位置上制备的芯片。
RNA原位杂交实验
实验方法原理 原位杂交的原理是含有互补序列（探针）的被标记的单链 DNA 或 RNA 片段在适当 的条件下与细胞的 DNA 或 RNA 杂交形成稳定的杂交体。无论是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC RNA) 探针均能用于定位 DNA 和 mRNA，并