通过超滤去除DNA扩增产物中的寡核苷酸及过剩dNTP
PCR 反应结束后，从扩增 DNA 产物中去除扩增反应残余下来的寡核苷酸引物，引物二聚体及 dNTP 是非常必要的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理PCR 反应结束后，从扩增 DNA 产物中去除扩增反应残余下来的寡核苷酸引物，引物二聚体及 dNTP 是非常必要的。首先，DNA 扩增目的产物内残余的 dNTP 可以在剩余热稳定 DNA 聚合酶的作用下填平已被限制性内切核酸酶切割产生的 DNA 产物的黏末端，使后者难以被进一步克隆。其次，过量的寡核苷酸引物可导致用第一次 PCR 扩增的 DNA 产物作模板再进行第二次 PCR 扩增反应的效率降低。最后，引物二聚体内部的众多的限制性核酸内切酶酶切位点可与扩增 DNA 片段两末端的酶切位点竞争限制性核酸内切酶，从而影响扩增 DNA 片段的薄切效率。实验材料扩增反应产物试剂、试剂盒氯仿乙醇乙酸钠TE仪器、耗材制备性离心机或小型离心机浓缩器实验步骤一、材料1. 缓......阅读全文
筛选寡核苷酸针的原则
一.长18～50nt，较长探针杂交时间较长，合成量低；较短探针特异性会差些。二.碱基成分：G+C含量为40%～60%，超出此范围则会增加非特异杂交。三.探针分子内不应存在互补区，否则会出现抑制探针杂交的“发夹”状结构。四.避免单一碱基的重复出现（不能多于4个），如-CCCCC-。五.一旦选定某一序更
寡核苷酸微阵列的定义
中文名称寡核苷酸微阵列英文名称oligonucleotide array定 义将一定长度、序列不同的寡核苷酸有序地排列固定在支持物（如玻璃片、尼龙膜等）上，供分子杂交分析的系统。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
寡核苷酸微阵列的定义
中文名称寡核苷酸微阵列英文名称oligonucleotide array定 义将一定长度、序列不同的寡核苷酸有序地排列固定在支持物（如玻璃片、尼龙膜等）上，供分子杂交分析的系统。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
寡核苷酸介导的诱变实验
用突变的寡核苷酸引导模板的合成，从而改变DNA序列，突变效率可达50~80%。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材水浴锅电泳仪培养箱实验步骤1. 将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中
寡核苷酸探针的用途介绍
寡核苷酸探针还有一个重要用途。在用于检测单个碱基差异时尚可采用一种称为寡核苷酸限制（oligonucleotiderestriction）的技术。该技术只有在突变点位于某一限制性内切酶识别位点时才有效。例如，镰刀状红细胞贫血是因β珠蛋白基因的第6个寡码子由GAG变成GTG，从而导致所编码氨基酸由酪氨
寡核苷酸探针的来源介绍
DNA探针根据其来源有3种：一种来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）；另一种是从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到的探针，称为cDNA探针（cDNA probe）。与基因组探针不同的是，cDNA探针不含有内含子序列。此外，还可在体外人工合成碱基数不
寡核苷酸介导的诱变实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中，60℃温育5 min，以杀灭细菌细胞，剧烈振荡以释放琼脂中的噬菌体，
寡核苷酸定点诱变的概念
中文名称寡核苷酸定点诱变英文名称oligonucleotidedirected mutagenesis定 义人工获得特定核酸定点突变的一种方案。将需要改变的核苷酸置于一段合成的寡核苷酸中部，在单链噬菌体(如M13)模板上用克列诺酶合成有指定变化的负链，再通过噬菌体复制得到含突变的双链。应用学科生物
关于寡核苷酸探针的标记介绍
为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素-亲合素系统 、地高辛配体等作为标记物的方法。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。
寡核苷酸阵列的原理和应用
微阵列（DNA Microarray）也叫寡核苷酸阵列（Oligonucleotide array），是人类基因组计划（Human Genome Project，HGP）的逐步实施和分子生物学的迅猛发展及运用的产物，它是生物学家受到计算机芯片制造和广为应用的启迪，融微电子学、生命科学、计算机科学和光
寡核苷酸连接分析的技术方法
中文名称寡核苷酸连接分析英文名称oligonucleotide ligation assay定 义一种测定等位基因单碱基突变的方法，用以确定基因是正常(野生型)还是缺陷(突变型)的。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
反义寡核苷酸的基本内容
反义寡核苷酸(AON)是一类通过序列特异地与靶基因DNA或mRNA结合而抑制该基因表达，在基因水平调控的分子药物。而硫代反义寡聚核苷酸(phosphorothioate oligonucleotides，简称PS2ODNs)，是用硫原子将磷酸骨架上的非成键氧原子取代后形成的一类新的寡核苷酸类似物
寡核苷酸的功能特点和用途
寡核苷酸(Oligonucleotide)，一般是指2~10核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段，但在使用这一术语时，对核苷酸残基的数目并无严格规定，在不少文献中，把含有30甚至更多核苷酸残基的多核苷酸分子也称作寡核苷酸。寡核苷酸可由仪器自动合成，它可作为DNA合成的引物(Primer)
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
定制－40bp－寡核苷酸实验
实验步骤1. 制出正义链（top strand)。TRAFIG 程序可以在没有基因要翻译的情况下被运行，但可以指定输出为 40bp 长、度的线性链。这就可以很方便地提供一个设计序列的正义链的列表，它按 40bp 的线性链排序。如此每一个线性链都可以被标上一个名字或者编号，从而方便地以 E-mail
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
关于寡核苷酸引物诱变的介绍
寡核苷酸引物诱变是由加拿大生物化学家Michael Smith发明的一种基因定点诱变方法。其基本原理是：合成一段寡聚脱氧核糖核苷酸作为引物，其中含有需要改变的碱基，使其与带有目的基因的单链DNA配对，合成的引物除短的错配区外，与目的基因完全互补，然后用DNA聚合酶延伸引物，完成单链DNA的复制。
定制－40bp－寡核苷酸实验
1. 制出正义链（top strand)。TRAFIG 程序可以在没有基因要翻译的情况下被运行，但可以指定输出为 40bp 长、度的线性链。这就可以很方便地提供一个设计序列的正义链的列表，它按 40bp 的线性链排序。如此每一个线性链都可以被标上一个名字或者编号，从而方便地以 E-mai
定制－40bp－寡核苷酸实验
实验步骤 1. 制出正义链（top strand)。TRAFIG 程序可以在没有基因要翻译的情况下被运行，但可以指定输出为 40bp 长、度的线性链。这就可以很方便地提供一个设计序列的正义链的列表，它按 40bp 的线性链排序。如此每一个
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
合成寡核苷酸探针的技术步骤
首先使支持物羟基化，并用光敏保护基团将其保护起来。每次选取择适当的蔽光膜（mask）使需要聚合的部位透光，其它部们不透光。这样，光通过蔽光膜照射到支持物上，受光部位的羟基解保护。因为合成所用的单体分子一端按传统固相合成方法活化，另一端受光敏保护基的保护，所以发生偶联的部位反应后仍旧带有光敏保护基团。
分子遗传学词汇寡核苷酸
中文名寡核苷酸外文名Oligonucleotide适用领域DNA合成的引物、基因探针等 所属学科生物化学定义寡核苷酸(Oligonucleotide)，一般是指2~10核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段，但在使用这一术语时，对核苷酸残基的数目并无严格规定，在不少文献中，把含有30甚至更
FDA批准的寡核苷酸类药物及在研反义寡核苷酸类药物一览
寡核苷酸，是一类20个左右碱基的短链核苷酸的总称(包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸)。寡核苷酸可以很容易地和它们的互补链结合，所以常用来作为探针确定DNA或RNA的结构；而其作为药物候选应用的研究则始于大约30年前，包括了反义寡核苷酸(ASOs)，核酸适配体(apatmers)及
硫代磷酸寡核苷酸的特点和应用
中文名称硫代磷酸寡核苷酸英文名称phosphorothioate oligonucleotide定 义寡核苷酸链中磷酸上带双键的氧原子被硫原子取代的衍生物。能够抵抗核酸酶，从而延长其在体内的作用时间。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
分子遗传学词汇反义寡核苷酸
中文名称：反义寡核苷酸外文名称：antisense oligonucleotide定义：反义寡核苷酸(AON)是一类通过序列特异地与靶基因DNA或mRNA结合而抑制该基因表达，在基因水平调控的分子药物。而硫代反义寡聚核苷酸(phosphorothioate oligonucleotides，简称PS
关于酶标寡核苷酸的基本介绍
酶标寡核苷酸包括核苷酸5'； 末端标记HRP法和内部标记AP 法。前者是在HRP 中产生一个-SH 反应基团，在寡核苷酸合成结束时加在5'； 端，带一个C6 的-SH 基与活化的HRP 反应生成5*-HRP寡核苷酸。后者是在合成寡核苷酸过程中将一个5'； 带连接臂及CF； 基团
寡核苷酸5末端磷酸化实验
试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-ClT4噬菌体多核苷酸激酶寡核苷酸[γ-32P]ATP仪器、耗材 微量离心管水浴箱实验步骤 材料缓冲液与溶液稀释贮存液至适当浓度10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-Cl(1mol/L,pH8.0)酶和缓冲液T4噬菌体多核苷酸激酶野生型T4噬
简并寡核苷酸引物PCR－(DOPPCR)
实验方法原理 显微切割或流式分选的染色体经过PCR扩增制备整条染色体的DNA，被认为是对某条染色体全部涂染的高质量探针的首选途径。对于单个染色体、多色FISH(M-FISH)或光谱核型分析中所有24条染色体的涂染均是此种情况。下面提供的操作程序是简并寡核苷酸引物PCR(DOP-PCR)最原始操作程序
分子遗传学词汇反义寡核苷酸
中文名称：反义寡核苷酸外文名称：antisense oligonucleotide定义：反义寡核苷酸(AON)是一类通过序列特异地与靶基因DNA或mRNA结合而抑制该基因表达，在基因水平调控的分子药物。而硫代反义寡聚核苷酸(phosphorothioate oligonucleotides，简称PS
寡核苷酸的基本信息和用途
寡核苷酸(Oligonucleotide)，一般是指2~10核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段，但在使用这一术语时，对核苷酸残基的数目并无严格规定，在不少文献中，把含有30甚至更多核苷酸残基的多核苷酸分子也称作寡核苷酸。寡核苷酸可由仪器自动合成，它可作为DNA合成的引物(Primer)