细菌中制备基因组DNA实验——小量制备
真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。实验材料细菌试剂、试剂盒TE氯化铯溴化乙锭NaCl乙醇CTAB仪器、耗材离心机摇床实验步骤1. 培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态，取1.5 ml 的培养物离心2 min。2. 沉淀物加入567 ul 的TE缓冲液，用吸管反复吹打使之重悬。3. 加入30 ul 10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K，混匀，于37℃温育1 h。 4. 加入100 ul&nb......阅读全文
DNA片段探针的应用实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 杂交液洗膜液仪器、耗材 注射器超声仪水浴锅实验步骤 1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸1
DNA片断的酶切实验
实验材料 DNA片段试剂、试剂盒 TE缓冲液仪器、耗材 离心机 恒温水浴取液器电泳仪电泳槽紫外观测仪实验步骤 一、EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ单酶切及双酶切1. 取2支干净、灭菌新Eppendof管，分别按下表加入 A（μl） B（μl）灭菌水 13 13EcoR Ⅰ缓冲液 2 0Hind Ⅲ缓
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 DMSO(30%) 含血清培养基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸钠要转染的 DNA仪器、耗材 最低基础培养基组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。DMSO(30%)/含血清培养基第 3
质粒DNA导入细菌细胞实验
实验材料 菌落质粒DNA试剂、试剂盒 CaCl2仪器、耗材 培养基平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）
制备DNA测序模板实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材 巴斯德吸管试管离心机实验步骤 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA，以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 细菌克隆试剂、试剂盒 LB培养基抗生素葡
DNA印迹杂交分析实验
实验方法原理 本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。实验材料 DNA试剂、试剂盒 SDSSSC仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。2. 将膜的DNA面朝上置于杂交管中，ATP溶
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶缓冲液PCR 反应缓冲液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相当产品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 样品（即方案 2 第 16 步中的各消减样品
DNA的Tm值测定实验
紫外分光光度法 实验方法原理 当DNA 的稀盐溶液加热到80～100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生
DNA－酶－I－足迹分析实验
试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚 氯仿乙醇聚乙烯醇竞争 DNA 缓冲液 Z'(或缓冲液 Ze）DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 终止液蛋白酶 K甲酰胺加样缓冲液实验步骤 材料32P-标记 DNA 酶 I 足迹探
DNA印迹法实验凝胶处理
1)凝胶照相后切去包括标记带在内的多余部分。将凝胶的一角(·点第一个样品的一侧)切去作为标记 以便于定位。精确测量凝胶大小然后将凝胶放入一个方形瓷盘中 。 2)变性：将凝胶浸泡于适量的碱变性液中，室温下变性30分钟。期间更换变性液一次，不断地轻轻摇动。如果先进行酸变性酸变性，则凝胶中溴酚兰的颜
DNA片段的亚克隆实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 在20 μl 反应体积内用合适的酶完全消化DNA。75℃加热15 min，灭活酶。如若无需进一步的酶促处理，接歩骤6。2. 如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA 试剂、试剂盒 雾水乙醇 EDTA T4 DNA连接酶 TE
DNA作图实验——多种酶消化
主要用于显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。实验方法原理应用遗传学技术构建能显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。实验材料DNA试剂、试剂盒限制酶缓冲液仪器、耗材电泳仪实验步骤1. 用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。 2. 从每个反应取小份样品作电泳分析，用已知的分
DNA测序实验怎么做
历史是 Rober Holley，1965年发表于Science杂志上的文章报道了酵母丙氨酸tRNA序列，77碱基。 吴瑞博士（Dr. Ray Wu）提出引物-延伸的测序策略。1971年首次成功的测定了λ噬菌体的两个粘性末端。 F.Sanger，1977年，发表在Nature和PNAS上的文章描述了
DNA核酸浓度的测定实验
实验方法原理 构成核酸的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使核苷核和核酸在紫外线光具有特征性的吸收光谱，最大吸收峰为260nm。窄光带紫外分光光度计，长260nm．，比色杯光径1cm，1个吸光度值（1A）相当于50ug/ml双螺DNA，40ug/m1单螺旋DNA或RNA），20ug/ml寡核苷酸实验材料
质粒DNA的小量制备实验
碱裂解小量制备法 煮沸法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 培养基试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇VTE仪器、耗材 平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中，在37°C培养至饱和状态（过夜）。2. 取1.5 ml培养液以最大转速离心20 S。弃上清。3. 沉淀用10
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
在本方案所描述的反应中，差异 DNA 被选择性地扩增。每个实验至少应该有 4 个反应：①已消减的检测 DNA;②未消减的检测者对照（1-c);③反向消减的检测 DNA;④反向未消减的对照（2-c)。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂
DNA的Tm值测定实验
实验方法原理 当DNA 的稀盐溶液加热到80～100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生改变: 260 nm 区紫外吸收值增高(增色效应) , 粘度降低, 浮力密度降低等。DNA 的变性的特点是爆发式的, 变性作用发生在一个很窄的范围。通常把D
双脱氧法DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器、耗材 离心机离心管微量滴定板实验步骤 1. 对于每个单链模板：将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中（1）0.5 pmol 单链DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×测序酶缓冲液（4
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验 实验材料 指数生长的哺乳动物细胞
DNA胶回收实验技术总结
胶回收一. 提高胶回收量的办法：1) 增加电泳时的上样量。2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有
dna提取实验步骤是什么
利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M。加入2倍体积95%乙醇，立即用搅拌法搅出。分别用66%，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品。此法提取的DNA中
质粒DNA的大量制备实验
碱裂解法 氯化铯/溴化乙锭平衡离心法 层析法 实验方法原理 大量碱裂解方法不仅相当快捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。煮沸法的大量制
DNA探针的标记实验
实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。
DNA探针的标记实验
核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否存在互补链，可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀
动物DNA提取实验——浓盐法
动物肝脏DNA提取可以：（1）用于法医学鉴定；（2）诊断和系统发育研究；（3）用于进一步的聚合酶链式反应（PCR）以获得DNA。实验方法原理在浓氯化钠（1-2 mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小，在稀氯化钠（0.14 mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小
DNA片段的亚克隆实验——凝胶块中DNA连接
实验材料DNA试剂、试剂盒TAE琼脂糖仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 重复基本方案中的步骤1~5。 2. 在高质量的低融点胶中分离久DNA（0.7%，TAE缓冲液），切下体积尽可能小的所需DNA条带（20~50 μl ）至小离心管中。3. 在70℃融化低融点胶10 min 以上，每个连接反
DNA重组技术(Recombinant－DNA)实验原理、用品和步骤（二）
【实验步骤】 1．PCR产物纯化 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，应用凝胶回收试剂盒回收纯化目的DNA片段。 2．目的DNA片段连接至T/A克隆载体 即重组DNA分子的构建 反应体系及条件如下： 3．转化 3.1 将感受态细胞置冰中融解。 3.2 将60μl感受态细胞移至无菌