细菌中制备基因组DNA实验——小量制备
真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。实验材料细菌试剂、试剂盒TE氯化铯溴化乙锭NaCl乙醇CTAB仪器、耗材离心机摇床实验步骤1. 培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态，取1.5 ml 的培养物离心2 min。2. 沉淀物加入567 ul 的TE缓冲液，用吸管反复吹打使之重悬。3. 加入30 ul 10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K，混匀，于37℃温育1 h。 4. 加入100 ul&nb......阅读全文
纯化DNA实验_基因组DNA的快速纯化
试剂、试剂盒尾部缓冲液蛋白酶 K仪器、耗材离心管玻璃棒实验步骤第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液（配 25 ml）50 mmol/L
非程序DNA合成检测实验
实验方法原理非程序DNA合成（Unscheduled DNA Synthesis：UDS）即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期，但当处于非S期细胞DNA受损伤时，随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象，即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时，也诱导DNA
鲑精担体DNA制备实验
实验材料 鲑精DNA试剂、试剂盒 TE酚氯仿乙酸钠仪器、耗材 离心机摇床超声仪实验步骤 1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中，至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后，用搅拌棒于4℃搅拌过夜，最终获得一种均匀粘稠液体。 2. 将一个较大的超声波探头插入烧杯
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材 培养箱水浴锅实验步骤 1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在质粒的目的区域产生一嵌套式的5’或3端'缺失突变体。首先在目的序列附近用一限制酶使质粒线性化，在用Bal 31消化时，应确定其切割效
质粒DNA的大量制备实验
实验方法原理 大量碱裂解方法不仅相当快捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。煮沸法的大量制备也简单易行，但得到的DNA比较粗制。高纯度的质粒DNA可通过氯化铯/溴化乙锭平衡离心法或层析法进一步纯化粗制DNA得到。实验材料 培养基菌株试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇乙酸钾异丙醇仪器、耗材 离心管实验
DNA片段探针的应用实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 杂交液洗膜液仪器、耗材 注射器超声仪水浴锅实验步骤 1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸1
DNA片断的酶切实验
实验材料 DNA片段试剂、试剂盒 TE缓冲液仪器、耗材 离心机 恒温水浴取液器电泳仪电泳槽紫外观测仪实验步骤 一、EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ单酶切及双酶切1. 取2支干净、灭菌新Eppendof管，分别按下表加入 A（μl） B（μl）灭菌水 13 13EcoR Ⅰ缓冲液 2 0Hind Ⅲ缓
质粒DNA导入细菌细胞实验
实验材料 菌落质粒DNA试剂、试剂盒 CaCl2仪器、耗材 培养基平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）
制备DNA测序模板实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材 巴斯德吸管试管离心机实验步骤 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA，以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 细菌克隆试剂、试剂盒 LB培养基抗生素葡
DNA印迹杂交分析实验
实验方法原理 本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。实验材料 DNA试剂、试剂盒 SDSSSC仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。2. 将膜的DNA面朝上置于杂交管中，ATP溶
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶缓冲液PCR 反应缓冲液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相当产品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 样品（即方案 2 第 16 步中的各消减样品
非程序DNA合成检测实验
实验方法原理 非程序DNA合成（Unscheduled DNA Synthesis：UDS）即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期，但当处于非S期细胞DNA受损伤时，随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象，即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时，也诱导DN
DNA－亲和介质的制备实验
试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-
DNA裂解分析实验_JAM分析
实验材料细胞试剂、试剂盒胸腺嘧啶脱氧核苷HBSSPBSEDTA仪器、耗材新鲜培养基组织培养板实验步骤1. 实验前一天，将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地渗入 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷。2. 收获细胞，在新鲜培养基中以 1X106 细胞/ml 重悬，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧
DNA探针的标记实验
探针标记法 实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一
DNA片段的亚克隆实验
基本方案 凝胶块中DNA连接 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DNA片段探针的应用实验
甲酰胺法 水溶液中杂交 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
制备DNA测序模板实验
制备单链M13噬菌体DNA 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性 实验材料 大肠杆菌
双脱氧法DNA测序实验
测序酶进行标记测序反应 α-标记核苷酸进行热循环测序反应 实验材料 DNA
质粒DNA导入细菌细胞实验
CaCl2转化法 一步法制备和转化感受态细菌实验 电转化法 实验材料 菌落 质粒DNA
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶缓冲液PCR 反应缓冲液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相当产品）3. 核酸和寡核苷
DNA－亲和介质的制备实验
DNA 亲和介质的制备实验 试剂、试剂盒 ATP [y-32P]ATP T4多核苷酸激酶
DNA－酶－I－足迹分析实验
DNA 酶 I 足迹分析实验 试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针 酚 氯仿
鲑精担体DNA制备实验
基本方案 实验材料 鲑精DNA 试剂、试剂盒
质粒DNA的小量制备实验——
实验采用国产的质粒小量抽提试剂盒。它是一种新型的离子交换柱，在特定的条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。实验材料DNA试剂、试剂盒LB培养基卵清溶菌酶异丙醇TE仪器、耗材离心机漩涡混合器水浴锅实验步骤一、实验步骤1. 接种一
痘苗DNA检测实验——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 杂交可以检测病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 点迹杂交方法检测在分离的噬斑中的重组病毒。本实验主要介绍用这3种方法来检测痘苗DNA。实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
下面讲述的 Polybrene 与 DMSO 转染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改进。利用此方法可以有效地将质粒 DNA 转染中国仓鼠卵巢细胞与角化细胞，产生的转化体比磷酸钙-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 时两种方法的转染效率无明显差别。本实验来源于分子克
DNA片断的酶切实验
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,这类酶的发现和应用可以用于以DNA重组为基础的生物工程技术。实验方法原理酶切指采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。实验材料DNA片段试剂、试剂盒TE缓冲液仪器、耗材离心机恒温水浴取液器电
DNA的接头分区诱变实验
Linker scanner mutations （接头分区突变）：体外在限制性片段加上位点，使两个DNA分子发生重组产生，结果在重组的位点加上连接序列。实验材料DNA试剂、试剂盒雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材培养箱水浴锅实验步骤1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核