纯化剪接因子SR蛋白实验
前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR（serine/argininc rich，富含丝/苏氨酸）蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子，该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR（serine/argininc rich，富含丝/苏氨酸）蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子，该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。实验材料超纯硫酸铵试剂、试剂盒SR 蛋白提取缓冲液SR 透析缓冲液丙烯酰胺溶液蛋白加样缓冲液丙酮盐酸胍考马斯亮蓝染色液仪器、耗材大探头超声仪相差显微镜离心机离心管透析袋聚丙烯酰胺凝胶电泳装置实验步骤一、材料与设备1. 从细胞和组织中纯化 SR 蛋白家族(1) 低速......阅读全文
蛋白质印迹实验
从SDS凝胶上转移蛋白质 从琼脂糖凝胶上转移蛋白质 从等电聚焦凝胶上转移蛋白 检测 试剂、试剂盒
酪蛋白激酶分析实验
实验方法原理 实验材料 β-酪蛋白（溶于水）有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCA SDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中：
蛋白质定量实验步骤
(1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品，可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比值太高, 可能会增加反应混合物的 PH 而导致反应背景较高
蛋白质的分离实验
凝胶层析法 IEF（等电点聚焦电泳）法 实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串
糖化血清蛋白测定实验
实验方法原理 血清葡萄糖能与白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基上发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构．此酮胺结构能在碱性溶液中与硝基四氮唑蓝（NBT）发生还原反应，生成用甲胺，并以1－脱氧―1―吗啉果糖（OMF）为标准参照物进行比色测定，本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指
酪蛋白激酶分析实验
基本方案 用 β-酪蛋白 备择方案 用多肽底物 实验方法原理 实验材料 β-酪蛋
蛋白质的纯化实验
胶体过滤法 实验材料 Sephacryl S-300胶体 试剂、试剂盒
相互作用蛋白鉴定实验
实验方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达 LexA 与目的蛋白的融合体的质粒。这种质粒转化到包含 LEU2 和lacZ 报道基因的报道酵母株中，并要行一系列的对照实验来鉴定所构建的诱饵蛋白是否适用，是否需要修饰，或是否应改变酵母菌报道条件。这些对照实验实现了诱饵蛋白在酵母菌中作为
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸
蛋白质的纯化实验
实验材料 Sephacryl S-300胶体试剂、试剂盒 缓冲液buffer A-150仪器、耗材 色析管柱铁夹试管铁架水平仪收集器浓缩用离心机 浓缩用离心管实验步骤 一、仪器设备色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；部分收集器（frac
铁蛋白免疫电镜实验
铁蛋白免疫可应用于：（1）检测抗原；（2）定位细胞内铁蛋白抗体位置。实验方法原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。实验材料马脾铁蛋白试剂、试剂盒硫酸铵硫酸镉双异氰酸镉二甲苯硼盐酸缓冲液硫酸铵液 PBS蒸馏水仪器、耗材
蛋白质纯度测定实验
蛋白质纯度测定实验 实验步骤 在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂
无蛋白血滤液制备实验
实验方法原理 钨酸法实验原理：钨酸钠与硫酸混合，生成钨酸，钨酸可以与血液中蛋白质结合生成蛋白质盐沉淀，经离心将蛋白质除掉。三氯醋酸法实验原理：血液中蛋白质能与三氧醋酸作用于生成不溶性的蛋白质盐沉淀，经离心将蛋白质除去，上清液为无蛋白血滤液．实验步骤 一、钨酸法实验试剂：1. 100g/L钨酸钠溶液：
蛋白质的分离实验
实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝胶过滤法则能将盐除尽
蛋白质印迹实验
试剂、试剂盒 甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤 1. 溶液配置(1) 连续缓冲系统甘氨酸 39 mmol/L；Tris 48 mmol/L；SDS 0.0375% ( W/V)；甲醇 20% (V/V)。溶液均需用双蒸水配置。这个缓冲系统可用作阳极缓冲液，也可用作阴极缓冲液。(2) 不连续缓冲系统阳
膜蛋白的纯化实验（二）
三、膜蛋白的纯化一 旦 使 用 了 合 适 的 去 污 剂 将 膜 蛋 白 从 细 胞 膜 中 増 溶 出 来 ，就 可 以 分 离 目 标 蛋 白 质 了 。传 统 色 谱 层 析 技 术 ，如 凝 胶 过 滤 、亲 和 、离 子 交 换 和 层 析 聚 焦 （chromatofocusi
植物蛋白提取实验说明
植物蛋白提取试剂适用于多种植物根，茎，叶及果实等的新鲜或冻存组织。植物组织成分复杂，含有较多酚类物质、多糖、色素、次生代谢物质等，致使植物蛋白质的分离提取变得困难和复杂。本试剂采用优化的试剂和程序，能有效提取多种植物中的可溶性和疏水性蛋白成分，有效去除植物组织所含的多酚、多糖、醌、色素、脂质、次生代
蛋白质纯度测定实验
实验步骤在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
融合蛋白的酶解实验
基本方案 辅助方案 备选方案1 辅助方案 备选方案2 备选方案3 实验材料 融合蛋白
无蛋白血滤液制备实验
无蛋白血滤液制备实验可以用于：（1）蛋白质沉淀剂沉淀蛋白；（2）用过滤法或离心法除去沉淀的蛋白。实验方法原理钨酸法实验原理：钨酸钠与硫酸混合，生成钨酸，钨酸可以与血液中蛋白质结合生成蛋白质盐沉淀，经离心将蛋白质除掉。三氯醋酸法实验原理：血液中蛋白质能与三氧醋酸作用于生成不溶性的蛋白质盐沉淀，经离心将
蛋白酶的测定实验
Anson 测定法 酪蛋白测定法 偶氮酪蛋白测定法 茚三酮测定法 实验方法原理 血红蛋白不是很贵，被用来做这个实验。由于处于天然
【实验技巧】BCA－法蛋白定量
BCA 蛋白定量法是实验室常用的蛋白质定量方法。Invent 所有蛋白提取试剂盒提取的蛋白均可使用 BCA 法进行定量！那么今天小编就手把手的教大家该如何用 BCA 来定量！BCA 法原理碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为 Cu+，Cu+与 BCA 试剂相互作用形成紫色的络合物，该水溶性的复合物在
蛋白质含量测定实验
folin—酚试剂法 考马斯亮蓝法 实验方法原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（
铁蛋白免疫电镜实验
实验方法原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。实验材料 马脾铁蛋白试剂、试剂盒 硫酸铵硫酸镉双异氰酸镉二甲苯硼盐酸缓冲液硫酸铵液 PBS蒸馏水仪器、耗材 离心机显微镜微孔滤膜实验步骤 一、材料与试剂准备 1. 马
融合蛋白的酶解实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 SDS仪器、耗材 水浴锅培养箱离心机实验步骤 1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间： （1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒二硫苏糖醇 碘代乙酰
蛋白质浓度分析实验
BRADFORD分析（BIORAD) BCA分析(PIERCE) 三氯乙醇沉淀 实验材料 标准蛋白质
膜蛋白的纯化实验（一）
一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
蛋白质的纯化实验
不发生电泳现象，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向负极移动，蛋白质粒子带正电荷；在等电点偏碱性溶液中，在电场中向正极移动，可以将蛋白质进行分离纯化。这种现象称为蛋白质电泳(Electrophoresis).蛋白质的分离纯化的一般原则①高回收率②高纯度③高活性④方便与快捷⑤经济蛋白质的分离纯化的一般步骤①