siRNA表达载体的构建
siRNA表达载体构建可应用于：（1）作为后基因组时代基因功能分析的有力工具；（2）基因组学、细胞信号传导通路分析；（3）药物靶点筛选、疾病治疗。实验方法原理多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆 到相应载体的pol III 启动子下游。由于涉及到克隆 ，这个过程需要几周甚至数月的时间，同时也需要经过测序以保证克隆 的序列是正确的。 实验材料目的基因试剂、试剂盒LB培养基仪器、耗材离心管离心机水......阅读全文
RNAi片段siRNA设计原则
RNAi target selection rules:Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG).S
siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U
siRNA表达载体的技术特点
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
siRNA表达框架的技术特点
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
关于siRNA机制的基本介绍
1.长dsRNA（可来自发夹，互补RNA和RNA依赖性RNA聚合酶）被称为Dicer的内切核糖核酸酶切割。Dicer切割长dsRNA以形成短干扰RNA或siRNA；这使得分子能够形成RNA诱导的沉默复合物（RISC）。 2.一旦siRNA进入细胞，它就会被整合到其他蛋白质中以形成RISC。
关于siRNA表达框架的介绍
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SE
Small－interfering－RNA（siRNA）的概念
Small interfering RNA（siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
miRNA和siRNA简介及区别
1998年，Andrew Fire和Craig Mello提出了一项新技术：通过dsRNA诱导特异基因的沉默，即所谓RNAi。2000年，Amy Pasquinelli等将lin-4和let-7作小时序RNAs(stRNAs，mall temporal RNAs)。RNA干涉（RNAi）在实验室
Rules－of－siRNA－design－for－RNA－interference－(RNAi)
General GuidelinessiRNA targeted sequence is usually 21 nt in length.Avoid regions within 50-100 bp of the start codon and the termination codonAvoid
siRNA表达框架制备方法的特点
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
miRNA，siRNA，shRNA有什么区别
siRNA是小干扰rna；shRNA是小发卡rna，一段rna单链，形成茎环结构部分双链的小rna siRNA可以是天然产生也可以是人工导入的，shRNA一般都是指人工的 shRNA多是用dna载体构建，在宿主内自行转录成shRNA，再加工成像siRNA一样的小RNA，目的为了模仿。
hepg2细胞siRNA转染条件
之前我们用过Lipo，说明书上要求细胞的密度在70%左右，同时在转染后的4-6小时注意要换培养液，后来我们实验室换了RFect sRNA Transfection Reagent，细胞密度在45%左右 ,设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度最好做2个复孔，一
化学合成siRNA的技术特点
主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究。不适用于：筛选siRNA等长时间的研究
siRNA与shRAN有什么区别
siRNA是小干扰rna；shRNA是小发卡rna，一段rna单链，形成茎环结构部分双链的小rnasiRNA可以是天然产生也可以是人工导入的，shRNA一般都是指人工的shRNA多是用dna载体构建，在宿主内自行转录成shRNA，再加工成像siRNA一样的小RNA，目的为了模仿细胞内天然miRNA前
化学合成siRNA的方法特点
许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要
RNAi及siRNA转染相关实验攻略
RNAi 是一种高效的特异性强的基因表达抑制，应用RNAi生物学机制进行基因功能研究已经成为一种创新性的新方法，人们第一次可以如此快速和方便地抑制细胞中特定基因的表达水平，从而用于分析特定基因在细胞中的功能。RNAi 技术还为新药开发、疾病治疗提供了创新性的方法和途径，有着极其广阔的应用前景。转染是
siRNA－有望治疗ALS渐冻症
肌萎缩侧索硬化症（ALS）是一种渐进的神经退行性疾病，俗称渐冻症，患者上下运动神经元皆受累，导致神经元支配的肌肉出现肌无力、肌萎缩、震颤、痉挛等相关临床症状，病程多呈进行性发展，最后常由于呼吸麻痹而死亡。著名物理学家霍金所患的就是肌萎缩侧索硬化症（ALS）。 ALS 大多数病例为散发，病因至今
Cell新文章聚焦神秘的内源siRNA
来自加州大学旧金山分校的研究人员发现，一种独特的RNA分子在细胞核内发挥作用，可以触发线虫快速的行为改变。 新研究发现还进一步地证明了，这种RNA在控制基因活性中的重要性，其有可能在疾病中发挥了作用，是一个潜在的治疗靶点。 认识到这类RNA的重要性，美国国立卫生研究院和其他的研究机构
RNA干扰相关知识Small－interfering－RNA（siRNA）
Small interfering RNA（siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
dsRNA消化法制备siRNA的方法介绍
dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse Ⅲ通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。多数的研究显示这种情况通常不会造成影响。最适用于：快速
靶向－EGFR基因－siRNA表达载体的构建
实验材料靶向EGFR基因siRNA试剂、试剂盒pSilencer2.1-U6载体EcoR IBamH IT4 DNA连接酶鼠抗人anti-EGFRFITC标记兔抗小鼠IgGCy3标记兔抗小鼠IgG甘油多聚甲醛二甲基亚砜仪器、耗材流式细胞仪荧光显微镜二氧化碳细胞培养箱酶标仪培养板盖玻片载玻片利用Lip
Small－interfering－RNA（siRNA）是什么意思？
Small interfering RNA（siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
miRNA和siRNA的基本介绍及区别
1998年，Andrew Fire和Craig Mello提出了一项新技术：通过dsRNA诱导特异基因的沉默，即所谓RNAi。2000年，Amy Pasquinelli等将lin-4和let-7作小时序RNAs(stRNAs，mall temporal RNAs)。RNA干涉（RNAi）在实验室中是
siRNA表达载体制备方法的特点
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
siRNA实验成功的十个要点
1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA 序列为了找到潜在靶位点，扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA 靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析，去除那些与其它基因明显同源的靶位点。如果可能，siRNA 应根据mRNA 低二级结构
昆虫利用siRNA而非miRNA抵御病毒侵染
棉铃虫（Helicoverpa armigera），是夜蛾科昆虫的一种，寄主植物有20多科200余种，其中大部分为重要栽培作物，是棉花的主要害虫之一。棉铃虫单核衣壳核多角体病毒（HaSNPV）是一种杆状病毒,能专一性地感染棉铃虫，作为生物杀虫剂已得到广泛应用。近日澳大利亚昆士兰大学的研究人员对棉铃虫
关于小干扰RNA的siRNA设计介绍
最初，siRNA序列的选择是基于实验经验而获得的（Elbashir et al. 2001，2002）。最近，生物信息学工具被用来设计siRNA（表18-1），目前多个数据库收录了经过实验确证的siRNA和shRNA。值得推荐的是，在设计新的siRNA之前可以通过搜索已有的siRNA数据库和科研
RNAi技术突破：siRNA体内传递机制
小RNAs如何进入哺乳动物细胞？ 一切开始于花：上个世纪90年代挪威的研究人员发现在矮牵牛（petunias）中有一种特殊的基因的额外拷贝可以抑制其活性，而不是如之前假想的增强其活性。几年之后这种基因研究发现其机制基于细胞中mRNA的降解，最终在90年代末期诺贝尔获得者Andrew Fire和C
关于siRNA的体外制备的介绍
1、化学合成siRNA 合成siRNA应用广泛，这种方法的得率和纯度都比较高。对合成siRNA还可以进行一系列化学修饰以提高siRNA的稳定性、降低脱靶效应，以及（或者）阻止激活天然免疫反应。多家公司，包括Ambion、Thermo Scientific Dharmacon、QIAGEN和Si
siRNA数据库与设计工具
siRNA DatabaseSearchable database of Silencer ™ Validated and Pre-designed siRNAs to >34,000 human, mouse, and rat targets. All siRNAs in the database