RNA抽提和标记实验
实验材料从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液（PBS）TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTANaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1a. 若从收获的组织培养细胞开始：用 PBS 将细胞沉淀洗涤两次。1b. 若从组织培养的细胞开始：每 2×107 细胞加入 1 ml TRIzol 再晃动混匀。1c. 若从组织开始：每 100 mg 冰冻组织直接加入 4 ml TRIzol，用旋转刀片式组织匀浆器匀浆。2. 加入 1/5 体积氯仿，摇振 15 s，静置 3 min。4℃ 12 000 g 离心 15 min。3. 将上清轻轻转移到一个 15 ml 聚丙烯管内，记下体积。4. 边混匀边逐滴加入等体积的 70％ 乙醇（终浓度 35％）。5. 把从 2×107～1×10......阅读全文
DNA抽提
DNA抽提（主要内容如下）· Working with DNA· DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms· DNA Extraction from Cell and Tissue· Mitochondria DNA Isola
在抽提RNA时，有色素污染，怎样去除色
用Trizol法沉淀RNA容易有一些杂质的。部分色素是会和RNA一起沉下来。这种情况可以用75%冷的乙醇多洗几遍。对后续qRT-PCR多数情况下没什么影响。另外可以用硅胶柱法纯化RNA，色素残留会少一些。RNase 污染的10大来源1：手指头 – 手指头是外源酶的第一来源，所以必需戴手套并且频繁更换
血清中－miRNA－抽提和实验设计经验谈
人体内的血液循环系统犹如印度的圣河 – 恒河，河水中携带的养分滋养着古老的大地；洗涤带走地上的ㄧ切污秽，人们的一生都在河水中完成。如此的恒河可以想象，河水中充斥着各种物质，有废物有养分，只要你想都可以从河水中捞取。同样的我们的循环系统如同恒河；流动的血液如同恒河水，身体所需的ㄧ切由血液运送，身体
植物总DNA的快速少量抽提实验
实验方法原理 CTAB法：该方法简便、快速，DNA产量高(纯度稍次，适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂，植物材料在CTAB的处理下，结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7 mM）浓度下可溶，并稳
植物总DNA的快速少量抽提实验
CTAB法 实验方法原理 CTAB法：该方法简便、快速，DNA产量高(纯度稍次，适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂，植物材料在CTAB的
质粒抽提实验中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有什么作用
溶液Ⅱ主要成分为氢氧化钠(NaOH)和SDS。DNA在pH5～9的溶液中是稳定的，但当pH＞12或pH＜3时，就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L，加入溶液Ⅱ后，该系统的pH为12.0～12.6，因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子
质粒抽提实验中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有什么作用
溶液Ⅱ主要成分为氢氧化钠(NaOH)和SDS。DNA在pH5～9的溶液中是稳定的，但当pH＞12或pH＜3时，就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L，加入溶液Ⅱ后，该系统的pH为12.0～12.6，因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子
脂肪抽提仪开展脂肪抽提的四个步骤
脂肪抽提仪是 基于索氏抽提法原理研发生产的一款脂肪测定仪器。由于索氏抽提具有方便快捷的特点，因此脂肪抽提仪采用该原理来测定食品中的脂肪含量等，会更有优势，应用 会更加广泛。脂肪抽提仪的工作过程是通过在适当的温度下试剂对样品的浸提，最终实现目标物（如脂肪）的分离。应用脂肪抽提仪开展脂肪抽提，主要可以为
RNA－抽提中自备有机溶液的配制及保存问题
看了离心机的配平讨论帖，才决定发起该帖的。该帖的问题也比较简单，但人人都会遇到，所以帖之。实验者，5 成用心，3+ 成用脑，2- 成用手是也。假定你抽提 RNA 时使用到的有机试剂 - 氯仿、异丙醇、无水乙醇 - 都是国产的 (这是完全可以使用的)。我的问题是：你采取了什么措施来降低或者杜绝 RNa
蛋白质的抽提原理和方法
抽提是指利用某种溶剂使目的蛋白质和其他杂质尽可能分开的一种分离方法。其原理是不同蛋白质在某种溶剂中的溶解度不同，所以可以通过选择溶剂，使得目的蛋白质溶解度大，而其他杂蛋白质溶解度小，然后经过离心，可以去除大多数杂蛋白质。方法：溶剂的选择是抽提的关键，由于大多数蛋白质可溶于水、稀盐、稀碱或稀酸，所以可
乙醇固定样品DNA－抽提和直接PCR
实验概要本实验从乙醇浸泡的鱼苗中提取DNA，并利用直接PCR进行了鉴定。实验原理在实际的研究工作中，野外取样的地点一旦较为偏远，受条件的限制，很难保证得到的样品活体或能够快速冷冻；另外，对一些稀有物种和濒危种，鲜活样品的采集十分困难，一般为了解决这些问题，常采用乙醇和甲醛固定的方法来处理样品，再对样
蛋白质的抽提原理和方法
抽提是指利用某种溶剂使目的蛋白质和其他杂质尽可能分开的一种分离方法。其原理是不同蛋白质在某种溶剂中的溶解度不同，所以可以通过选择溶剂，使得目的蛋白质溶解度大，而其他杂蛋白质溶解度小，然后经过离心，可以去除大多数杂蛋白质。方法：溶剂的选择是抽提的关键，由于大多数蛋白质可溶于水、稀盐、稀碱或稀酸，所以可
植物总DNA抽提方法和优缺点
1、植物DNA的CTAB提取法：经典方法。效果较好，污染少。多用于核基因组提取。2、SDS提取法：较为简易，提取的为全基因组，但有蛋白污染可能。3、简易“一管法”提取方法：4、PCR研究的快速提取法：以上两者方法简单，快速，但污染多，不适合做酶切等操作。5、酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法：多
抽提萃取法展望
展望编辑萃取作为分离和提纯物质的重要单元过程，今后还会得到进一步的发展，其主要发展方向是：（1）研究新的萃取体系和新的萃取工艺；（2）合成和筛选高效萃取剂；（3）研究与发展新型萃取设备，重点应放在设备的自动化、连续化上；（4）开展萃取机理及理论的研究。 [2]
抽提萃取的特点
提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。不过，一般有机溶剂亲水性越大，与水作两相萃取的效果就越不好，因为能使较多的亲水性杂质伴随而出，对有效成分进一步精制影响很大。
CTAB法抽提核酸
CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 0
醇化办法核酸抽提
醇化办法核酸抽提 PC 抽提/醇沉淀办法，是一个永不陈旧办法。牢稳、靠得住、经济、便捷。PC 抽提可以彻底去除氨基酸，醇沉淀可以去除盐，对于普通的整洁的样品(杂质为氨基酸)，该办法足以取得高品质的核酸。固然每每PC 抽提都会亏损一小批核酸(由于没可能将水相所有移取)，以及低液体浓度核酸的
抽提萃取的分类
萃取的机理既有物理的溶解作用，又有化学的配合作用，是一个复杂的物理溶解过程 。一般而言，萃取那些简单的不带电荷的共价分子时为物理溶解过程。但在大多数情况下，被萃取物与有机相中一种或多种组分发生化学变化，生成新的化学物种后被萃入有机相，这便属于化学过程。按照萃取机理的不同，可分为五种类型： （1
裂解办法抽提核酸
裂解办法抽提核酸含蛋白酶的裂解办法，还是可以觉得是抽提基因组DNA 的首选。裂解涵盖膜蛋白的游离和与基因组DNA 衔接接的氨基酸的游离。蛋白酶的效用是使氨基酸变小，因而对氨基酸的游离有很大的增进效用；同时，很大的基因组DNA 是很容易“缠”住大分子的物品的，氨基酸被蛋白酶克化变小后，则不由得易被基因
抽提萃取的概念
利用化合物在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。经过反复多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。萃取时如果各成分在两相溶剂中分配系数相差越大，则分离效率越高、如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙
蛋白抽提指南（TRIZOL）
在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的步骤一）后剩余的苯酚—乙醇上清中可以抽提出蛋白。沉淀的蛋白可通过蛋白[质]印迹法对样品中某一特殊的蛋白质进行分析。试剂所需，但没有随同提供的物品：* 异丙醇* 0.3M盐酸胍(用95%酒精配制)* 无水乙醇* 1% SDS1.蛋白质的沉淀用异丙醇从苯酚—乙醇上清中
DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern a
细菌的核酸抽提
DNA Extraction· DNA Extraction from Bacteria (Julie B. Wolf,UMBC)Phenol/chloroform method· DNA Extraction From Bacteria (Triton Method
细菌细胞的制备实验实验——细胞抽提物的制备
实验材料细胞试剂、试剂盒弗氏破碎缓冲液匀浆缓冲液仪器、耗材弗氏破碎器实验步骤1. 将 5~10 g 新鲜或冻存的细胞沉淀物垂悬于弗氏破碎缓冲液中或者适当的匀浆缓冲液中。通常 4L 的大肠杆菌培养物可以获得大约 7.5 g 的细胞沉淀。2. 悬液中加入无 RNase 的 DNase 至终浓度为 2 μ
RNA标记
RNA labeling (Amersham Pharmacia)For the generation of radiolabelled, single stranded RNA for use as hybridization probes 32P-pCp 3' End-labeling
RNA标记
RNA标记是将标记物（如放射性同位素、荧光素或酶）共价地连接到RNA，通过检测标记物，进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛，在疾病诊断方面也很有前景。 理想的RNA标记方法应符合以下要求： 1. 操作简单，灵敏度高 2. 不影响碱基配对的特异性 3. 不影响RN
脂肪抽提仪操作须知
传统的脂肪提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成，利用的是溶剂回流和虹吸的原理。但是这一仪器有一弊端，各部分连接处容易漏气，且工作效率不高。今天小编要给大家介绍一下脂肪抽提仪，其根据索氏抽提原理，用重量测定方法来测定脂肪含量，常被用于食品、油密封圈受乙醚变形泄露的问题。脂肪抽提仪在给人们
全自动核酸抽提仪
全自动核酸抽提仪是一种用于基础医学、临床医学领域的分析仪器，于2016年10月25日启用。 技术指标 1.采用QIAGEN硅胶膜离心柱技术,2.针对多种生物样本（包括全血、血浆、血清、尿液、粪便、细胞和FFPE组织或新鲜组织等），可以实现对基因组DNA，病毒核酸，质粒DNA，microRNA
核酸抽提经验及原理
1、核酸抽提原理 简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐
植物总DNA的快速少量抽提实验——CTAB法
DNA分子是分子生物学研究的基本材料，依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。实验目的是了解植物DNA抽提的主要方法，掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。实验方法原理CTAB法：该方法简便、快速，DNA产量高(纯度稍次，适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂，