植物总DNA的快速少量抽提实验
实验方法原理 CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的处理下,结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7 mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5 mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用70-75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。再经过氯仿/异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA,最后经异丙醇或乙醇等DNA沉淀剂将DNA沉淀分离出来。实验材料 水稻叶片试剂、试剂盒 液氮CTAB氯仿异戊醇乙醇NH4ACEtOH仪器、耗材 离心管离心机实验步骤 1. 采集适量幼嫩叶片,用液N2研成粉末,0.4 g装入1.......阅读全文
植物总DNA的快速少量抽提实验
实验方法原理 CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的处理下,结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7 mM)浓度下可溶,并稳
植物总DNA的快速少量抽提实验
CTAB法 实验方法原理 CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的
植物总DNA的快速少量抽提实验——CTAB法
DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。实验目的是了解植物DNA抽提的主要方法,掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。实验方法原理CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,
水稻总DNA的快速少量抽提CTAB法
DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的 DNA 。 实验目的:了解植物 DNA 抽提的主要方法,掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 实验材料及试剂: 水稻 叶片,1.5 × CTAB ,氯仿 / 异戊醇 (24:1) ,
植物总DNA抽提方法和优缺点
1、植物DNA的CTAB提取法:经典方法。效果较好,污染少。多用于核基因组提取。2、SDS提取法:较为简易,提取的为全基因组,但有蛋白污染可能。3、简易“一管法”提取方法:4、PCR研究的快速提取法:以上两者方法简单,快速,但污染多,不适合做酶切等操作。5、酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法:多
DNA抽提
DNA抽提(主要内容如下)· Working with DNA· DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms· DNA Extraction from Cell and Tissue· Mitochondria DNA Isola
植物DNA的提取实验中吸收样品、抽提应注意什么
抽提时应缓慢摇匀,不能太用力,时间要适当长一点。离心后吸取上清要慢,枪头最好用蓝枪头或是剪过的黄枪头,注意千万不能触到蛋白膜。原因就是DNA链容易断裂,所以要轻,要用口大的枪头。为了抽提效果好所以延长时间。
DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后,匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后,DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern a
WB生物样本总蛋白抽提
一、贴壁细胞蛋白提取A1..将水浴锅的温度调至100℃,等水浴锅达到100℃温度后,取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。2.将缓冲液(1Xloading buffer)置于100℃水浴锅中预热10min。(loding buffer: 是5Xloding buffer用纯水稀释到1Xlodingbu
质粒DNA的抽提与纯化
目的 : 采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术原理 : 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完
蛋白质的抽提实验
实验方法原理 蛋白质在细菌中表现后,以反复的冷冻-解冻方法打破细胞,再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来,此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。 实验材料 转
蛋白质的抽提实验
实验材料 转型菌株pQG11 M15 [pREP] 单一菌落试剂、试剂盒 LB amp kan液体培养基IPTGNa3PO4·12H2ONaClEDTATriton X-100液氮仪器、耗材 恒温震荡培养箱高速冷冻离心机离心管冰筒实验步骤 一、仪器用具恒温震荡培养箱37℃;高速冷冻离心机及离心管 (
血与泪的RNA抽提抽提经验
对大部分实验人员来说,RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上,现有的 RNA 抽提方法/试剂,如果用于从培养细胞中抽提 RNA,比抽提基因组 DNA 更方便,成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提,总会碰到问题呢?组织 RNA 抽提失败的两大现象是: RNA 降解和组
简述沥青快速抽提仪的主要特点
一、沥青快速抽提仪的主要特点: 1、使用洗净室和旋转筛桶洗提沥青 2、使用高性能离心分离机分离填充料、沥青和溶剂 3、加上蒸馏单元,可以分离沥青和溶剂 4、干燥矿粉和填充料,反复利用溶剂 二、沥青抽提仪技术参数: 抽提时间(包括干燥):35分钟 每天抽提的次数::12次 每次抽提
乙醇固定样品DNA-抽提和直接PCR
实验概要本实验从乙醇浸泡的鱼苗中提取DNA,并利用直接PCR进行了鉴定。实验原理在实际的研究工作中,野外取样的地点一旦较为偏远,受条件的限制,很难保证得到的样品活体或能够快速冷冻;另外,对一些稀有物种和濒危种,鲜活样品的采集十分困难,一般为了解决这些问题,常采用乙醇和甲醛固定的方法来处理样品,再对样
RNA抽提和标记实验
实验材料从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液(PBS)TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTANaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1a.
RNA抽提和标记实验
实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液(PBS)TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTA NaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材 组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材
RNA抽提和标记实验
实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞 在组织培养中的细胞 冻存的整个组织
核酸抽提
mRNA的分离 与rRNA和tRNA不同的是,哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等,1971;At Leder,1972)。在构建cDNA文库时, 必须经上述纯化步骤制
核酸抽提
最糟糕的心态 - 实验失败了,抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识,所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商?我为什么不做预实验检测所购试剂?最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶,内切
【锐赛小课堂】WB生物样本总蛋白抽提
锐赛小课堂1222-158 一、贴壁细胞蛋白提取 A 1..将水浴锅的温度调至100℃,等水浴锅达到100℃温度后,取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。 2.将缓冲液(1Xloading buffer)置于100℃水浴锅中预热10min。 (loding buffe
关于沥青快速抽提仪的操作规程介绍
1、沥青快速抽提仪的操作— 按 JTJ052-2000 规程 T0701 沥青混合料的取样方法,在拌好的料中采取试样。按规程 中的操作方法进行试样准备。 2、沥青快速抽提仪的操作— 向装有试样的烧杯中注入三氯乙烯溶剂,将其浸没并记录溶剂用量,浸泡 30min,搅拌 使其充分溶解(也可直接在离心
关于沥青快速抽提仪的基本信息介绍
沥青快速抽提仪,抽提时间(包括干燥):35分钟,加上蒸馏单元,可以分离沥青和溶剂。 一、注意事项: 1、应选择平整、稳固、通风的场地安装本机; 2、要保持机器清洁,溶液严禁进入电机,以免造成损坏。 3、出现异常声响或其他故障应先切断电源后进行检查。 4、试验完成后,应先进行清洁工作,以
小鼠基因组DNA抽提操作规程
一、原理与意义先用细胞裂解液对已制备好的组织匀浆充分裂解,然后用蛋白酶去除其中的蛋白,再用氯仿一次抽提(无需用酚抽提)、预备液沉淀、RNase去除RNA、乙醇再沉淀即可得到完整DNA。该方法适用于从人或动物的各种组织、血液、培养细胞、G+/G-细菌中快速抽提基因组DNA。抽提出来的DNA能用于几乎所
细胞系的-DNA-STR-谱_细胞团抽提
实验方法原理用 Qiagen®QIAamp®迷你试剂盒从细胞团提取 DNA;抽提到的 DNA 用SGMPlius®扩增,然后用 ABI377 DNA 测序仪进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用GeneScan®和Genotyper®软件进行分析。实验材料Qiagen®DNA迷你试剂盒试剂、试剂盒无水乙醇磷酸缓
plasmid-DNA的抽提•纯化试剂盒MagExtractor®Plasmid
产品索引 5870 中文名称: plasmid DNA的抽提•纯化试剂盒 英文名称: MagExtractor®-Plasmid- 产品编号: NPK -300 产品类别: 分子生物学 生产厂家: TOYOBO 产品价格:
脂肪抽提仪开展脂肪抽提的四个步骤
脂肪抽提仪是 基于索氏抽提法原理研发生产的一款脂肪测定仪器。由于索氏抽提具有方便快捷的特点,因此脂肪抽提仪采用该原理来测定食品中的脂肪含量等,会更有优势,应用 会更加广泛。脂肪抽提仪的工作过程是通过在适当的温度下试剂对样品的浸提,最终实现目标物(如脂肪)的分离。应用脂肪抽提仪开展脂肪抽提,主要可以为
RNA抽提经验
对大部分实验人员来说,RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上,现有的 RNA 抽提方法/试剂,如果用于从培养细胞中抽提 RNA,比抽提基因组 DNA 更方便,成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提,总会碰到问题呢? 组织 RNA 抽提失败的两大现象是: RNA 降
抽提萃取的特点
提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。不过,一般有机溶剂亲水性越大,与水作两相萃取的效果就越不好,因为能使较多的亲水性杂质伴随而出,对有效成分进一步精制影响很大。
抽提萃取的分类
萃取的机理既有物理的溶解作用,又有化学的配合作用,是一个复杂的物理溶解过程 。一般而言,萃取那些简单的不带电荷的共价分子时为物理溶解过程。但在大多数情况下,被萃取物与有机相中一种或多种组分发生化学变化,生成新的化学物种后被萃入有机相,这便属于化学过程。按照萃取机理的不同,可分为五种类型: (1