植物总DNA的快速少量抽提实验——CTAB法

DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。实验目的是了解植物DNA抽提的主要方法,掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。实验方法原理CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的处理下,结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7 mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5 mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用70-75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。再经过氯仿/异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA,最后经异丙醇或乙醇等DNA沉淀剂将DNA沉淀分离出来......阅读全文

CTAB法抽提核酸

CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 0

CTAB法提取植物总DNA

实验概要CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法,通过实验掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。 实验原理CTAB  (hexadecyltrimethylammonium  bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特

核酸提取仪CTAB法用途以及步骤

  CTAB为一种阳离子去污剂,其的特性为能够在低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,然而不会沉淀核酸。再利用有机溶剂抽提,将蛋白、多糖、酚类等杂质去除以后,将乙醇加入沉淀,就能够分离出核酸。  用途  主要用

采用改进的CTAB法提取细菌总DNA

实验概要通过改进的CTAB法可快速简便的提取细菌总DNA,通过本实验可掌握CTAB法从细菌提取DNA的原理和方法。 实验原理CTAB  (hexadecyltrimethylammonium  bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特

利用CTAB法提取植物基因组DNA

一、实验原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物,该复合物在高离子强度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。在酚仿变性的条件下,去除残留的CTAB和蛋白质等杂质,然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分

使用-CTAB-法时,操作需要注意的问题

(1)最好使用幼嫩的材料,材料含水量大时,可用70%乙醇擦拭,蒸馏水稍冲洗后用滤纸吸干,于液氮中研磨。如果材料量大(20g以上),或所用的植物材料较老,或材料含有较多的酚类物质,应提高β-巯基乙醇的用量。(2)氯仿抽提时,要保证抽提液中有一定的盐浓度,否则 DNA 进入沉淀。(3)CTAB 溶液在1

水稻总DNA的快速少量抽提CTAB法

DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的 DNA 。 实验目的:了解植物  DNA 抽提的主要方法,掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 实验材料及试剂: 水稻  叶片,1.5 × CTAB ,氯仿 / 异戊醇 (24:1) ,

植物组织制备基因组DNA实验——CTAB法

实验方法原理加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。实验材料植物组织试剂、试剂盒CTAB液2-疏基乙醇TE高盐TE氯仿异戊醇仪器、耗材研钵离心机培养箱实验步骤1.  在所需量

CTAB-法从新鲜或冷冻材料提取-DNA的方法

(1)DNA 的粗提①试剂a.2倍 CTAB 提取缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巯基乙醇。b.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L NaCl。c.1倍 CTAB 沉淀缓

CTAB-法从干燥材料中提取DNA的方法

从干燥材料中提取(1)粗提①试剂a.1倍 CTAB 提取缓冲液:2倍 CTAB 贮存液稀释1倍,使用前每100mL 加入巯基乙醇0.14mL。b.其他试剂与从新鲜材料中提取相同。②操作a.称取 1g 干燥材料置研钵中,加入3~4g 铝粉研磨。b.将粉末转入离心管中,加入0.6~15mL 1倍 CTA

植物总DNA的快速少量抽提实验——CTAB法

DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。实验目的是了解植物DNA抽提的主要方法,掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。实验方法原理CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,

CTABPAGE实验

实验方法原理该方案由方案 蛋白质的SDS-PAGE实验 中介绍的标准 SDS-PAGE 衍变而来。虽然在进行变性凝胶电泳时多选用 SDS-PAGE, 但阴禽子去污剂 SDS 仍然存在一些局限。例如,SDS 在低温下会结晶,某些情况下还会使蛋白质聚集或沉淀,而且有些蛋白在 SDS 凝胶中不能很好地溶解

2×CTAB提取缓冲液使用说明

介绍:CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机

植物总DNA的快速少量抽提实验

CTAB法             实验方法原理 CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的

拟南芥基因组DNA的提取

实验概要本实验介绍了用CTAB法提取拟南芥基因组DNA。主要试剂CTAB提取液(2%CTAB,50mMEDTA,50mM Tris-HCl,PH 8.0,0.84M NaCI,0.05%巯基乙醇),氯仿,无水酒精,70%的酒精主要设备1.5 mL离心管,65℃水浴锅,高速离心机,研钵实验材料拟南芥叶

植物总DNA的快速少量抽提实验

实验方法原理 CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的处理下,结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7 mM)浓度下可溶,并稳

粗提取植物DNA的实验步骤和原理

提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理:CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分

细菌DNA提取方案

细菌DNA提取方案:革兰氏阴性菌,如E.coli,一般有三种可以选择的方法. 一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板,连续画线,37摄氏度培养18-24小时.2、刮取1~2接种环菌苔加入150微升三蒸水中,混匀,100摄氏度煮沸10分钟.3、12000转/分钟离心10分钟

细菌DNA提取方案

细菌DNA提取方案:革兰氏阴性菌,如E.coli,一般有三种可以选择的方法。一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板,连续画线,37摄氏度培养18-24小时。2、刮取1~2接种环菌苔加入150微升三蒸水中,混匀,100摄氏度煮沸10分钟。3、12000转/分钟 离心10分钟

如何分离核酸蛋白和有机物

CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法。具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,但不会沉淀核酸。再通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后,加入乙醇沉淀,即可使核酸分离出来。(1) 2%CTA

植物组织提取高质量的DNA五大方法详解(一)

     蛋白质纯化是旨在从细胞,组织或整个生物体中分离出一种或几种蛋白质。蛋白质纯化对于表征目的蛋白质的功能,结构和相互作用至关重要。蛋白质分离与提取是生命科学研究基础中的基础。植物细胞由于存在细胞壁的结构,因此比动物细胞蛋白的提取相对复杂。        提取植物中的DNA对植物基因工程,植

DNA提取液的配制

一、实验目的 1 明确提取液的配制原理 2 通过对提取液的配制,掌握提取液中各 试剂 在提取中的作用。二、实验原理 DNA 是遗传物质, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基础。通常要求所提取的DNA 要有理想的纯度,足够完整,无断裂降解,提取过程尽量少使用有毒化学品等。为

标准委发布年度第29号公告,涉及CTAB、TD、GCMS、AAS、IR等9

  分析测试百科网讯 近日,国家标准化管理委员会发布关于批准发布《标准电压》等585项国家标准和2项国家标准修改单的公告,据统计,此次发布的标准涉及电位滴定法、CTAB、TD、GC-MS、AAS、IR、LC、PCR、UV和EM等,现付全文如下:中华人民共和国国家标准公告2017年第29号关于批准发布

DNA提取方法介绍

DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有硅质材料、阴离子交换树脂等。

DNA的不同提取方法及比较

DNA的不同提取方法及比较传统的DNA提取方法传统的DNA 提取与纯化,如 CTAB 法、SDS 法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA; 然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70

离心机离心法提取食品中的DNA

1、从新鲜或冷冻材料提取 DNA(1)DNA 的粗提①试剂a.2倍 CTAB 提取缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巯基乙醇。b.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L Na

DNA提取中的常见问题分析2

A260/280比值较低?或者A260/280比值较高?参考见解:用水作为洗脱液比较偏低,或者蛋白质残留,但如果操作过程中使用了苯酚,则更可能是苯酚残留。而比较高可能是大量RNA残留,没有使用RNaseA,或RNaseA活性下降。A260 值提示的含量与电泳检测时提示的含量有可见的误差则为苯酚残留。

DNA提取时各溶液的作用

ctab法核酸提取大致可分为裂解细胞,萃取,分离蛋白,沉淀核酸,wash去杂。各步骤所用溶液也是相应的作用

细菌总DNA的提取和鉴定

【目的和要求】1.学会CTAB法提取细菌总DNA。2.掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。【实验原理】DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的,因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后,必须将其中蛋白质去除。CTAB(溴代十六烷基三甲胺)是一种去污剂,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中可溶并且稳定存在,若

植物DNA提取实验

机械法             实验方法原理 这是一种快速简便提取植物总DNA的方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨,以机械力破碎细胞壁,然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液,使细胞膜破