常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——定量测定
试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤不管是使用凝胶扫描,还是摄录系统,凝胶电泳后通常要进行染色,才能进行定量测定。没有染色的凝胶只能用带有紫外光源的凝胶扫描仪才能定量。 如果电泳后要对样品组分进行定量测定,必须注意以下几点。1. 已知和未知样品必须使用相同的溶剂系统,相同的浓度,相同的加样量,并在同一块凝胶上电泳和染色。2. 在凝胶上扣除背景常常不像在分光光度计中那么容易,因为后者的样品是溶液,而前者在凝胶上可能脱色不均匀,所以必须按说明书采用合适的方法扣除背景。3. 对未知、已知样品扫描和进行数据处理时应该采用相同的参数。4. 选择合适的染色方法,以使样品的浓度和吸光度的关系在线性范围内。5. 一些畸变的带不能进行准确定量。如由于固定和染色方法不合适或时间不充分而造成蛋白带的中心未被染色;不合适的固定方法和过量加样而造成的 “晕轮” 效应(h......阅读全文
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——定量测定
试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤不管是使用凝胶扫描,还是摄录系统,凝胶电泳后通常要进行染色,才能进行定量测定。没有染色的凝胶只能用带有紫外光源的凝胶扫描仪才能定量。 如果电泳后要对样品组分进行定量测定,必须注意
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
制胶 样品的准备 电泳 检测 照相、凝胶干燥 定量测定 试剂、试剂盒
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
试剂、试剂盒 丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤 一、垂直平板电泳的制胶用于垂直平板电泳的凝胶通常被灌注在两侧有隔片的两块玻璃板之间。模具垂直放置,周围用硅油(或其他密封物质)密封,或用夹子夹紧,以免胶液泄漏。溶液从顶部灌注
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——电泳
试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、垂直电泳如果进行垂直电泳,按说明书先在电泳槽的下槽中装入电极缓冲液。将聚合后的凝胶连同玻璃板一起放入电泳槽中,在上槽中注入电极缓冲液,打开冷却循环系统,连接电源。一般起始电压
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——检测
实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测,对于不同的目的,应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性,所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大
核酸的定量测定实验
紫外分光光度法 地衣酚显色法 二苯胺法 实验方法原理 核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外
核酸的定量测定实验
实验方法原理 核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波长处。一般在260 nm 波长下, 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值为0.022 , 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值约为0.020 , 故测定
叶绿素的定量测定实验
实验方法原理 根据叶绿素对可见光的吸收光谱,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,而后用公式计算出叶绿素含量,此法精确度高,且能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a、b的含量。根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比,即:D=kCL式中k为比例常数,当溶液浓度以重量百
叶绿素的定量测定实验
实验方法原理根据叶绿素对可见光的吸收光谱,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,而后用公式计算出叶绿素含量,此法精确度高,且能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a、b的含量。根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比,即:D=kCL式中k为比例常数,当溶液浓度以重量百分
叶绿素的定量测定实验
实验方法原理根据叶绿素对可见光的吸收光谱,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,而后用公式计算出叶绿素含量,此法精确度高,且能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a、b的含量。根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比,即: D=kCL 式中k为比例常数,当溶液浓度以重量
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——照相、凝胶干燥
试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤为了发表文章和分析结果的保存,应将有价值的结果在干燥以前先进行照相,以免在干燥时降低分辨率,甚至失去弱带。凝胶可直接放在带有乳白色屏幕的发光板上,使用细颗粒的全色胶卷和一个中红滤
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——样品的准备
试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、选择合适的样品缓冲液常规聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品不需作特殊处理。最重要的是选择合适的 pH 和离子强度的缓冲液作为样品缓冲液,以保证样品的溶解性、稳定性和生物活性,通常使用与
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤 材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液)Bradford 试剂(CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液)Bradford 试剂(CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)分光光
常规荧光定量PCR的流程介绍
常规荧光定量PCR的流程是:样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录(RNA病毒)-扩增-结果读取。
核酸的定量测定实验——二苯胺法
实验方法原理DNA 分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解, 产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊醛, 后者与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物, 其反应为: 蓝色化合物在595 nm 处有最大吸收峰, 且DNA 在40~400 μg 范围内时, 光密度与DNA 浓度呈正比。在反应液中加入少量乙
尿常规检测项目尿蛋白定量介绍
尿蛋白定量介绍: 尿蛋白定性试验阳性,则应进一步进行尿蛋白定量试验。尿蛋白定量是指准确测定24h内全部尿液中的蛋白质浓度。尿蛋白定量测定有助于泌尿系统疾病的诊断和鉴别诊断,了解肾脏病变的程度。留尿时要求适量添加防腐剂。尿蛋白定量正常值: 儿童
荧光定量PCR仪的常规维护保养
1.仪器外部清洁 用洁净毛巾擦拭仪器外壳,将仪器挪开原先的位置,清理仪器下面的桌面,以免桌面上积攒的灰尘等杂物堵住通风口。 检查仪器进风口以及出风口是否通畅(具体位置可参见仪器厂家的说明书),以免通风口被灰尘、纤维等杂物堵塞而造成散热不好,从而影响仪器升降温速度和温控精准度。 仪器
核酸的定量测定实验——地衣酚显色法
实验方法原理RNA 与浓盐酸共热时发生降解, 产生的核糖又可转变为糖醛, 在FaCl3 或CuCl2催化下, 糖醛与3 , 5-二羟基甲苯( 地衣酚、苔黑酚)反应形成绿色复合物, 该产物在670 nm 处有最大吸收。当RNA 浓度为20~250 μg/ ml 时光密度与RNA 浓度成正比。实验材料蛋
叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定实验
实验方法原理1. 溶解性:叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂,常用乙醇或丙酮提取。2. 分离色素的方法有多种,如纸层析. 柱层析等。纸层析是其中较简单的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时由于混合色素中各种成分在两相中(即流动相和固定相)间有不同的分配系数,它们的移动速度不同,使样品中的各种
叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定实验
实验方法原理1. 溶解性:叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂,常用乙醇或丙酮提取。2. 分离色素的方法有多种,如纸层析. 柱层析等。纸层析是其中较简单的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时由于混合色素中各种成分在两相中(即流动相和固定相)间有不同的分配系数,它们的移动速度不同,使样品中的各种
叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定实验
实验方法原理 1. 溶解性:叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂,常用乙醇或丙酮提取。2. 分离色素的方法有多种,如纸层析. 柱层析等。纸层析是其中较简单的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时由于混合色素中各种成分在两相中(即流动相和固定相)间有不同的分配系数,它们的移动速度不同,使样品中的各
定量PCR实验
实验材料 限制性内切核酸酶反转录酶热稳定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸试剂、试剂盒 扩增缓冲液dNTP 贮存液胎盘 RNase 抑制剂仪器、耗材 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR 仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液4 种 dNTP 贮存液(20
尿常规和24小时尿蛋白定量检查
尿常规和24小时尿蛋白定量检查尿常规是一项再普通不过的检查,而24小时尿蛋白定量检查,可以更准确地反映受检者的肾脏功能,有利于糖尿病、高血压、肾功能损害的早发现、早治疗。尿常规和24小时尿蛋白定量检查的注意事项如下:1、尿路容易被污染,月经期间不化验无论是尿常规还是24小时尿蛋白,女性在月经期,尿中
尿糖定量测定概述
尿糖定量测定:一种临床化验检查项目、化验标本为24小时尿,取其中100-200毫升送检,并记录总尿量、参考值为0.6-5.0毫摩尔/24小时、尿糖定量测定可以更精确地测出糖尿病患者每日尿糖排出量、为临床用药或饮食控制的治疗效果起监护作用。24h尿糖定量对判断糖尿病的程度和指导用药较尿糖定性更为准
尿糖定量测定方法
尿糖定量测定是一种临床化验检查项目、化验标本为24小时尿,取其中100-200毫升送检,并记录总尿量、参考值为0.6-5.0毫摩尔/24小时、尿糖定量测定可以更精确地测出糖尿病患者每日尿糖排出量、为临床用药或饮食控制的治疗效果起监护作用。24h尿糖定量对判断糖尿病的程度和指导用药较尿糖定性更为准
尿糖定量测定方法
尿糖定量测定是一种临床化验检查项目、化验标本为24小时尿,取其中100-200毫升送检,并记录总尿量、参考值为0.6-5.0毫摩尔/24小时、尿糖定量测定可以更精确地测出糖尿病患者每日尿糖排出量、为临床用药或饮食控制的治疗效果起监护作用。24h尿糖定量对判断糖尿病的程度和指导用药较尿糖定性更为准
总钙测定的常规方法
总钙测定:血液总钙测定方法主要有原子吸收分光光度法、染料结合法和滴定法等。其中较普遍应用的是络合滴定法,其优点是操作简便,不需要特殊设备,用血量少,准确性符合要求原创。常用的指示剂有钙黄绿素与钙红。原子吸收分光光度法使用空气一乙炔焰,钙焰的光吸收特征是422.7nm较火焰光度法灵敏度高,但不适宜
PCR-产物定量实验
测序之前对模板精确定量至关重要。根据 DNA 用量的多少,有几种不同的方法可供选择。下面介绍另外两种方法:荧光测定法和比较溴化物染色法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤方法 A: 荧光测定