配体与活化介质的偶联实验
试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液Affi-Gel 10磷酸钠（50 mmul L）乙醇胺实验步骤材料磷酸盐缓冲液（50 mmol/L;PH7.5~8,0)Affi-Gel 10(Bio-Rad Laboratories)磷酸钠（50 mmul/L），含 NaCl(1mol/L)(PBS)乙醇胺（100 mmol/L)操作程序1) 用 50 mml/L 磷酸缓冲液（pH7.5~8.0) 配制 1~10 mg/ml 的蛋白质（配体) 溶液。此蛋白制备液必须不含其他氨基化合物。因此. 不应用 Tris 缓冲液或含铵盐的缓冲液。可用的缓冲液有磷酸缓冲液、MES、MOPS 和 HEPES 等。如果蛋白制备液含有其他氨基化合物，可用 0.5mol/L 磷酸缓冲液（pH7.5~8.0) 将其透析掉。留取少量蛋白样品，供测定偶联效率用。2)Affi-Gel 10 胶是以异丙醇悬液供应的。使用时必须将异丙醉去掉，以免引起配体蛋白失活。将 Affi-Gel......阅读全文
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（十）
配体与基质偶联后，通常要测定配体的结合量以了解其与基质的偶联情况，同时也可以推断亲和层析过程中对待分离的生物大分子吸附容量。配体结合量通常是用每毫升或每克基质结合的配体的量来表示。测定配体结合量的方法很多，下面简单介绍几种：1) 差量分析：根据加入配体的总量减去配体与基质偶联后洗涤出来的量即可大致推
重组G蛋白偶联受体的纯化实验
实验步骤 一、引言 天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此对其的结构测定和功能分析需要:①重组膜蛋白的生产系统;②能分离得到有活性的膜蛋白（而不是没有功能、折叠错误的膜蛋白）的纯化策略。表达并纯化原核和真核的膜蛋白在文献中都有报道。读者
重组G蛋白偶联受体的纯化实验
纯化受体从概念上可以分成两步: 第一步用合适的去污剂将受体从膜中提取出来 (增溶）; 第二步使用如常规的亲和标签、与该受体特异结合的配体层析柱、分子排阻色谱和其他方法纯化受体。最重要的是，必须注意选择实验条件以保持膜蛋白在整个纯化过程中处于活性状态。这一点怎么强调也不过分，因为很多 GPCR—旦被去
DNA－亲和介质的制备实验（二）
寡核苷酸的连接1) 取 10ul 10X 接头-激酶缓冲液加入 65ul 水中，将 DNA 震荡溶解于此溶液。2) 加 20ul 20 mmol/L ATP(pH7.0) 及 5ulT4 DNA 连接酶（30Weiss 单位)，得最终反应体积为 100ul。3) 在室温下孵育≥2 h。若 AP-1
DNA－亲和介质的制备实验（一）
试剂、试剂盒 ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶
肽适配体的亲和力成熟实验
实验材料质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒Taq 聚合酶10×缓冲液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器30℃ 培养箱实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 制备
肽适配体的亲和力成熟实验
实验方法原理 实验材料 质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒 Taq 聚合酶10×缓冲液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材 PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器 30℃ 培养箱实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「
配体配体相互作用特点
中文名称配体-配体相互作用英文名称ligand-ligand interaction定 义泛指不同配体之间的相互作用。如受体上有多个配体结合位点时，一个配体与受体的结合可能影响另一个配体与受体的结合。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），信号转导（二级学科）
低密度脂蛋白受体的分布与配体
分布：广泛分布于肝、动脉壁平滑肌细胞、肾上腺皮质细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞等。配体：ApoB100、ApoE（ApoB/ApoE受体、BE受体）。结合的脂蛋白：LDL（主要），VLDL、β-VLDL、LDL残基等（含ApoE）。LDL受体和上述脂蛋白结合将它们吞入细胞内，使细胞
亲和层析(Affinity－Chromatography)(3)
⑥元素分析：如果配体中含有某种特别的元素，通过元素分析就可以确定配体结合量。⑦放射性分析法：偶联中加入一定量带有同位素的配体，通过放射性分析确定配体结合量，这是一种非常灵敏的方法。影响配体结合量的因素很多，包括基质和配体的性质、基质的活化方法及条件、基质和配体偶联反应的条件等等。例如通常溴化氰活化的
细胞活化与细胞复苏
1. 收到细胞株包裹时， 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 蛋白质
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒琼脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸钠-乙酸磷酸二氢钾仪器、耗材天平烧瓶螺旋搅拌器布氏漏斗实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」1. 制备 CNBr-活化的琼脂糖 4B以下步骤必须在通风橱中小心进行。用 3 mol/L NaOH 将琼脂糖 4B 悬液调整为 p
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 琼脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸钠-乙酸磷酸二氢钾仪器、耗材 天平烧瓶螺旋搅拌器布氏漏斗实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」1. 制备 CNBr-活化的琼脂糖 4B以下步骤必须在通风橱中小心进行。用 3 mol/L NaOH 将琼
表面等离子共振检测蛋白相互作用实验
实验方法原理 实验材料 CM-5 葡聚糖芯片（BIAcore）配体蛋白靶蛋白试剂、试剂盒 PBS胺-偶联试剂盒（详见「其他」）仪器、耗材 BIAcore SPR 设备BIA 评估软件（point-and-click）实验步骤 1. 插入一个新的 BIAcore CM-5 葡聚糖芯片。2. 用 PBS
表面等离子共振检测蛋白相互作用实验
用 BlAcore 芯片 用 NTA-SAM 芯片 实验方法原理 实验材料 CM
配体的定义
配体（ligand，也称为配基）是一个化学名词，表示可和中心原子（金属或类金属）产生键结的原子、分子和离子。一般而言，配体在参与键结时至少会提供一个电子。配体扮演路易斯碱的角色。但在少数情况中配体接受电子，充当路易斯酸。
配体的分类
按配体中配位原子的多少，可将配体分为单齿配体和多齿配体。单齿配体：一个配体中只有一个配位原子的配体。如 NH3、H20等。多齿配体：一个配体中有两个或两个以上配位原子的配体。如二亚乙基三胺H2NCH2CH2NHCH2CH2NH2( 简写为DEN) 和乙二胺四乙酸根（简写为EDTA) 。两可配体：有些
配体的分类
按配体中配位原子的多少，可将配体分为单齿配体和多齿配体。单齿配体：一个配体中只有一个配位原子的配体。如 NH3、H20等。多齿配体：一个配体中有两个或两个以上配位原子的配体。如二亚乙基三胺H2NCH2CH2NHCH2CH2NH2( 简写为DEN) 和乙二胺四乙酸根（简写为EDTA) 。两可配体：有些
表面等离子共振检测蛋白相互作用实验——用－BlAcore－芯片
实验材料CM-5 葡聚糖芯片（BIAcore）配体蛋白靶蛋白试剂、试剂盒PBS胺-偶联试剂盒（详见「其他」）仪器、耗材BIAcore SPR 设备BIA 评估软件（point-and-click）实验步骤1. 插入一个新的 BIAcore CM-5 葡聚糖芯片。2. 用 PBS 作为工作液以持续流动
免疫印迹与免疫检测实验——亲和素生物素偶联
实验材料蛋白质试剂、试剂盒TTBS缓冲液TBS缓冲液过氧化物酶碱性磷酸酶仪器、耗材摇床硝酸纤维素膜尼龙膜实验步骤1. 在旋转摇床或摆动平台中持续摇动使膜与合适的封闭液平衡。对于硝酸纤维素膜或PVDF膜，需在室温封闭30~60 min。尼龙膜则需在37℃封闭2 h。2. 用TTBS溶液（用于硝酸纤
重组G蛋白偶联受体的纯化实验（二）
3.受体-特异配体亲和层析用一般的亲和标签富集受体之后，可能需要第二步纯化以分离到纯净、有功能的受体蛋白。这主要是因为：①第一步纯化得到的受体还不够纯, 仍有其他污染物。例如，用 XAaxanthineamineC0ngener，拮抗剂）层析柱纯化腺苷受体可去除其中的一个主要污染物 (Wei
重组G蛋白偶联受体的纯化实验（一）
一、引言天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此对其的结构测定和功能分析需要:①重组膜蛋白的生产系统;②能分离得到有活性的膜蛋白（而不是没有功能、折叠错误的膜蛋白）的纯化策略。表达并纯化原核和真核的膜蛋白在文献中都有报道。读者可以参考如Grisshammer 和Tate(1995;2003) 及Gri
散射角与介质的大小关系
散射角为光色散时，不同颜色的光因波长不同而各自折射，可见红光及可见紫光之间的相差角度；波长越长对应介质的折射率越小，你自己可以通过几何光学和上面的性质来作图嘛，应该比较简单吧
镍催化剂催化的交叉偶联反应研究取得系列进展
在现代有机反应新方法学的研究领域，以廉价镍为催化剂催化的交叉偶联反应是其中的热点之一，特别是在铃木偶联反应方面，已有许多创新性成果见诸报道。但是，目前依然存在大量的科学问题亟待解决：首先，以膦/磷基团活化的酚类化合物为反应物的偶联反应无法进行;其次，在已报道的其它底物的反应中，绝大多数反应存在催
核酸适配体筛选实验的难点在哪里
首先它确实是比较难，但是SELEX实验的难和其它实验的难是不太一样的。像做单分子成像，或者某些超灵敏的检测类的实验，很多时候受制于我们的客观条件，受制我们所拥有的仪器设备。可是，核酸适配体的筛选与这些实验不同，因为SELEX实验它所用的仪器设备条件其实都非常简单，几乎所有的分子生物学实验室都具备。那
核酸适配体筛选实验的难点在哪里
首先它确实是比较难，但是SELEX实验的难和其它实验的难是不太一样的。像做单分子成像，或者某些超灵敏的检测类的实验，很多时候受制于我们的客观条件，受制我们所拥有的仪器设备。可是，核酸适配体的筛选与这些实验不同，因为SELEX实验它所用的仪器设备条件其实都非常简单，几乎所有的分子生物学实验室都具备。那
亲和层析(Affinity－Chromatography)(1)
亲和层析(Affinity Chromatography)是利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术。人们很早就认识到蛋白质、酶等生物大分子物质能和某些相对应的分子专一而可逆的结合，可以用于对生物分子的分离纯化。但由于技术上的限制，主要是没有合适的固定配体的方法，所以在实验中没有广泛的
海狸生物携新品亮相上海慕尼黑
分析测试百科网讯 2020年11月16日-18日，慕尼黑上海分析生化展在上海新国际博览中心隆重召开。苏州海狸生物医学工程有限公司携新品亮相展会，海狸生物拥有四大核心技术平台：磁珠、仪器设备、样本处理以及生物耗材，本次参展他们带来了标记免疫与捕获磁珠IVD“芯片”级原材料、核酸提取磁珠与试剂盒以及
如何选择层析方法
当目标蛋白的物理特性如分子量、等电点等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同pH缓冲液的试管中，可简单地测出pI， 并确定纯化用缓冲液的最佳pH。选择层析方法在对目标蛋白的特性或样品成分不太了解