肽适配体的亲和力成熟实验

实验材料质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒Taq 聚合酶10×缓冲液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全极限(CM) 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器30℃ 培养箱实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 制备 PCR 预混合物(共 3.775 ml):500 ul 10×Taq 聚合酶缓冲液5 ul 1 mol/L MgCl210 ul 100 mmol/L dATP10 ul 100 mmol/L dGTP50 ul 100 mmol/L dCTP50 ul 100 mmol/L dTTP125 ul 20 umol/L 引物 1125 ul 20 umol/L 引物 22.9 ml 水2. 对每一个样品,加入下列试剂到 PCR 管中:12 ul 水1 ul 肽适配体表达载体10 ul Mg2+/Mn2+ 溶液76 ul PC......阅读全文

肽适配体的亲和力成熟实验

实验材料质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒Taq 聚合酶10×缓冲液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全极限(CM) 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器30℃ 培养箱实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 制备

肽适配体的亲和力成熟实验

实验方法原理 实验材料 质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒 Taq 聚合酶10×缓冲液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全极限(CM) 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材 PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器 30℃ 培养箱实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「

抗体亲和力成熟的概念

抗体亲和力成熟(antibody affinity maturation)是指机体正常存在的一种免疫功能状态。在体液免疫中,再次应答所产生抗体的平均亲和力高于初次免疫应答。这种现象称为抗体亲和力成熟。只有那些表达高亲和力抗原受体的B细胞,才能有效的结合抗原,并在抗原特异的Th细胞辅助下增殖,产生高亲

构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验

实验方法原理 实验材料 E.coli MC 1061 (Bio-Rad)硫氧还蛋白表达载体质粒DNA 洗脱液试剂、试剂盒 DNA 聚合酶DNA 连接酶小牛肠碱性磷酸酶(CIP)限制性内切核酸酶反应缓冲液 4dNTPTris·Cl培养基仪器、耗材 QIAquick 胶回收试剂盒质粒制备试剂盒DNA 合

构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验

实验材料E.coli MC 1061 (Bio-Rad)硫氧还蛋白表达载体质粒DNA 洗脱液试剂、试剂盒DNA 聚合酶DNA 连接酶小牛肠碱性磷酸酶(CIP)限制性内切核酸酶反应缓冲液4dNTPTris·Cl培养基仪器、耗材QIAquick 胶回收试剂盒质粒制备试剂盒DNA 合成仪16℃ 和 95℃

用肽适配体正向分析细胞过程实验

实验方法原理 实验材料 用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒 完全极限(CM) 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材 30℃ 培养箱实验步骤 1. 用高效乙酸锂转化法将 50~100 ug 肽适配体库(在 pJM-2 或 pJM-3 中)转化酵母筛选株(106~107 转化株)。将转化株涂布到

用肽适配体正向分析细胞过程实验1

实验材料用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒完全极限(CM) 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材30℃ 培养箱实验步骤1. 用高效乙酸锂转化法将 50~100 ug 肽适配体库(在 pJM-2 或 pJM-3 中)转化酵母筛选株(106~107 转化株)。将转化株涂布到 10 cm Glu/

用肽适配体正向分析细胞过程实验2

辅助方案 肽适配体靶点的鉴定实验方法原理通过配对相互作用或捕获法鉴定的肽适配体的假定靶点应当通过遗传学测试进行验证,例如:1. 用免疫沉淀法确定体内适配体的相互作用;2. 通过上位(显)性分析以确定适配体在与靶蛋白相同的区域发挥功能;3. 比较由靶蛋白删除或过表达引起的表型与由适配体造成的表型。实验

利用双杂交系统相互作用阱/筛选特定蛋白肽适配体实验

实验材料DNA酵母株试剂、试剂盒PCR 引物聚乙二醇甘油存储液Tris·ClX-gal 平板完全极限(CM) 缺失成分培养基和平板仪器、耗材30℃ 和 42℃ 培养箱或水浴实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 使用标准的亚克隆技术,将编码诱饵蛋白的 DNA 插入 PEG20

配体与活化介质的偶联实验

试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液Affi-Gel 10磷酸钠(50 mmul L)乙醇胺实验步骤材料磷酸盐缓冲液(50 mmol/L;PH7.5~8,0)Affi-Gel 10(Bio-Rad Laboratories)磷酸钠(50 mmul/L),含 NaCl(1mol/L)(PBS)乙醇胺(100 mm

配体与活化介质的偶联实验

试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液Affi-Gel 10 磷酸钠(50 mmul L)乙醇胺实验步骤 材料磷酸盐缓冲液(50 mmol/L;PH7.5~8,0)Affi-Gel 10(Bio-Rad Laboratories)磷酸钠(50 mmul/L),含 NaCl(1mol/L)(PBS)乙醇胺(100

配体与活化介质的偶联实验

配体与活化介质的偶联实验             试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液 Affi-Gel 10 磷

植物成熟组织观察实验

实验方法原理1.  掌握植物各种成熟组织的形态、位置、结构及功能。2.  了解不同组织间的相互联系,维管束的结构与类型,植物组织离析法。实验材料番薯叶片楝树枝条萝卜根尖马铃薯块茎横切片南瓜茎纵横切片椴树茎切片梨果实玉米茎横切片试剂、试剂盒蒸馏水番红间苯三酚盐酸仪器、耗材显微镜载玻片盖玻片镊子刀片纱布

植物成熟组织观察实验

实验方法原理1.  掌握植物各种成熟组织的形态、位置、结构及功能。 2.  了解不同组织间的相互联系,维管束的结构与类型,植物组织离析法。实验材料番薯叶片                                                                  楝树枝条  

Countstar®-FL在抗体亲和力实验中的应用

抗体是自然产生用于帮助免疫系统抵御细胞内外侵害的免疫球蛋白。免疫荧光法测定细胞水平的抗体亲和力大小是评价抗体效果非常重要的指标,当前主要的测定方法是利用流式细胞仪以实现相对定量。而Countstar® FL可通过间接免疫荧光法检测不同抗原抗体反应呈现的平均荧光强度直接定量评价抗体亲和力大小,同时也可

抗体的亲和力

抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol,通常K的范围在 1

抗体人源化设计/基于胰岛素肽的设计和筛选

实施效果来源:计算模拟平台通过Discovery Studio中的Antibody Modelling, Predict Humanizing Mutations模块对鼠源抗体进行人源化。DS中的Predict Humanizing Mutations模块会寻找人的Germline序列,

植物成熟组织观察实验(四)

四、输导组织 1.  木质部中的输导组织取南瓜茎纵切片置低倍镜下观察,切片中央两侧有一些细胞壁被染成红色具有各种加厚花纹的成中管状细胞,它们是多种类型的导管(组织)。每个导管分子,均以端壁形成的穿孔相互连接,上下贯通。仔细观察,臂径较小,其壁具有螺旋形加厚并木质化的为螺纹导管,管径较大,具有网状加厚

植物成熟组织观察实验(一)

实验方法原理 1.  掌握植物各种成熟组织的形态、位置、结构及功能。2.  了解不同组织间的相互联系,维管束的结构与类型,植物组织离析法。实验材料 番薯叶片楝树枝条萝卜根尖马铃薯块茎横切片南瓜茎纵横切片椴树茎切片梨果实玉米茎横切片试剂、试剂盒 蒸馏水番红间苯三酚盐酸仪器、耗材 显微镜载玻片盖玻片镊子

植物成熟组织观察实验(二)

二、薄壁组织1.  吸收组织取萝卜根尖制作压片,置显微镜下观察根毛的形态和结构特点。2.  贮藏组织取马铃薯块茎一小块,用双面刀片进行徒手切片,选取较薄的切片放在载玻片上,加1滴蒸馏水后盖上盖玻片置显微镜下观察淀粉贮藏细胞的结构特点。3.  同化组织取夹竹桃叶片做徒手横切片,制成临时切片标本,置显微

植物成熟组织观察实验(三)

三、机械组织1.  厚角组织取南瓜(或薄荷、苹果、椴树)茎横切片,先在低倍镜下观察,找到棱角处,再换高倍镜由外而内观察,最外一层排列整齐的扁平细胞为表皮,其上具多细胞表皮毛,紧靠表皮内方的皮层中,有几层染成绿色的细胞,其细胞壁在角隅处加厚、是生活细胞,有时还可看到细胞内的叶绿体,为厚角组织。2.  

植物成熟组织观察实验(五)

五、维管束结构和类型1.  双子叶植物的的无限维管束(开放维管束)取南瓜(或其他双于叶植物)茎横切片对光肉眼观察,可见南瓜茎切片中央为星状的髓腔,围绕髓腔的薄壁组织内有五个较大和五个较小的维管束彼此相间排列。在低倍镜下选一个大而清晰的维管束观察,可见维管束由外(靠茎外方)到内分为外韧皮部、形成层、木

配体配体相互作用的功能

中文名称配体-配体相互作用英文名称ligand-ligand interaction定  义泛指不同配体之间的相互作用。如受体上有多个配体结合位点时,一个配体与受体的结合可能影响另一个配体与受体的结合。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),信号转导(二级学科)

DS解决方案——抗体人源化设计/基于胰岛素肽的设计和筛选

  来源:计算模拟平台   通过Discovery Studio中的Antibody Modelling, Predict Humanizing Mutations模块对鼠源抗体进行人源化。DS中的Predict Humanizing Mutations模块会寻找人的Germline序列,对比各位

利用双杂交系统相互作用阱/筛选特定蛋白的肽适配体...

利用双杂交系统相互作用阱/筛选特定蛋白的肽适配体实验实验方法原理 实验材料 DNA酵母株试剂、试剂盒 PCR 引物聚乙二醇甘油存储液Tris·ClX-gal 平板完全极限(CM) 缺失成分培养基和平板仪器、耗材 30℃ 和 42℃ 培养箱或水浴实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其

肽质量检索实验

基本方案 其他方案             实验方法原理 实验材料 蛋白样品

肽质量检索实验

实验方法原理 实验材料 蛋白样品仪器、耗材 质谱仪实验步骤 鉴定数据库中已有序列的蛋白质的算法基于以下一些理念:(1) 肽段是由切点专一的试剂水解蛋白质产生的,通常用已知切点专一的蛋白酶。(2) 这些肽段的质量由 MALDI-MS 或 ESI-MS 精确测定。(3) 计符蛋白序列数据库中的每一序列被

配体配体相互作用特点

中文名称配体-配体相互作用英文名称ligand-ligand interaction定  义泛指不同配体之间的相互作用。如受体上有多个配体结合位点时,一个配体与受体的结合可能影响另一个配体与受体的结合。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),信号转导(二级学科)

甘露糖受体在后天免疫中的作用介绍

  MR参与抗原转运。MR 可通过非糖基识别结构域, 与表达于脾和淋巴结细胞表面的特殊分子相互作用, 从而将MR2抗原复合物转运至B 细胞亲和力成熟区。T 细胞依赖抗原可诱导这些CR 配体阳性巨噬细胞变为树突状细胞,游走进入B细胞滤泡中,向淋巴细胞呈递抗原。由于CR 配体阳性巨噬细胞不表达MR,推测

配体的分类

按配体中配位原子的多少,可将配体分为单齿配体和多齿配体。单齿配体:一个配体中只有一个配位原子的配体。如 NH3、H20等。多齿配体:一个配体中有两个或两个以上配位原子的配体。如二亚乙基三胺H2NCH2CH2NHCH2CH2NH2( 简写为DEN) 和乙二胺四乙酸根(简写为EDTA) 。两可配体:有些