利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验
利用 DNA 混编模仿自然进化过程是优化 DNA 和蛋白质性质的常用方法。这里我们介绍这类方法的一个新进展，即利用标准的聚合酶链反应（PCR)放大基因文库时与其他 4 种标准 dNTP—起掺入 dUTP 作为确定 DNA 碎裂位点的交换核苷酸。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料T4 DNA 连接酶感受态细胞试剂、试剂盒Taq 聚合酶PCR 缓冲液溴化乙锭（EB) 溶液过硫酸铵（APS) 水溶液仪器、耗材琼脂糖凝胶实验步骤3.1 克隆NExT 混编过程中，使用包含限制性酶切位点的混编引物的配对位点应设置在紧挨着目标基因的两侧，理想的退火温度为 60°C 左右。通过 4 加 2 法则估算引物的退火温度：每个 G 碱基和 C 碱基为 4°C，A 碱基和 T 碱基为 2°C。我们在 NEXT 混编过程中使用的基因包括：含 657 个碱基的野生型 CAT 基因 ( CATwt；SwissP......阅读全文
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验
3.5 片段纯化经酶解和化学裂解得到的基因片段（见 10.3.3 ) 即可通过硅胶树脂直接从切割反应液中纯化（见 10.3. 5.1)，也可通过制备型尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化（见 10.3.5.2) 。最初我们认为如想得到特定大小的片段必须通过凝胶电泳来纯化，以确保在重组装反应中没有较长片段甚
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验
利用 DNA 混编模仿自然进化过程是优化 DNA 和蛋白质性质的常用方法。这里我们介绍这类方法的一个新进展，即利用标准的聚合酶链反应（PCR)放大基因文库时与其他 4 种标准 dNTP—起掺入 dUTP 作为确定 DNA 碎裂位点的交换核苷酸。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验－1
实验材料 T4 DNA 连接酶感受态细胞试剂、试剂盒 Taq 聚合酶PCR 缓冲液溴化乙锭（EB) 溶液过硫酸铵（APS) 水溶液仪器、耗材 琼脂糖凝胶实验步骤 3.1 克隆NExT 混编过程中，使用包含限制性酶切位点的混编引物的配对位点应设置在紧挨着目标基因的两侧，理想的退火温度为 60°C 左右
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3.3 酶解反应和化学切割将尿苷酸交换 PCR 纯化后的产物进行 UDG 酶解反应，在交换核苷酸位置切割 DNA。该酶对双链和单链 DNA 均有效，通过对双脱氧尿苷 C1' 位点的亲核攻击引发水解反应，高特异的去除尿嘧啶基团 [12] 。哌啶用于经 UDG 酶切割去除尿嘧啶后的骨架部分
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验－3
3.6 纯化片段的定量为了分析和比较纯化得到的 DNA 的产量，我们首先使用 SYBR Greenn 试剂来定量。因为 NExT DNA 混编方法的重复率很髙，我们只定量一次即可（见注 16 )。通常我们都能获得浓度为 40~60 ng/μl 的 DNA 片段。( 1 ) 取 2 μl 纯化的 DN
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化 实验材料 T4 DNA 连接酶 感受态细胞
利用DNA池技术进行纯合子定位实验
实验材料受累和对照个体的DNA样品试剂、试剂盒TE 缓冲液短串联重复多态引物（STRP)10 X 储存缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶轻矿物油去离子甲酰胺载样缓冲液Rain-X (UNELKO)Binding solution仪器、耗材96孔 PCR板0. 5ml 离心管热循环仪变形聚
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 DMSO(30%) 含血清培养基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸钠要转染的 DNA仪器、耗材 最低基础培养基组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。DMSO(30%)/含血清培养基第 3
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
下面讲述的 Polybrene 与 DMSO 转染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改进。利用此方法可以有效地将质粒 DNA 转染中国仓鼠卵巢细胞与角化细胞，产生的转化体比磷酸钙-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 时两种方法的转染效率无明显差别。本实验来源于分子克
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验 实验材料 指数生长的哺乳动物细胞
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
下面 4 个探针用于差异筛选杂交。1. 检测者特异性消减探针（正向消减探针）。2. 驱动者特异性消减探针（反向消减探针）。3. 从检测者 mRNA(或检測者基因组 DNA) 直接合成的 cDNA 探针。4. 从驱动者 mRNA(或驱动者基因组 DNA) 直接合成的 cDNA 探针。本实验来源于 PC
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
试剂、试剂盒 洗涤缓冲液 SDS SSC Blocking 溶液 经过剪切的鲑鱼精 DNA探针
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
试剂、试剂盒 洗涤缓冲液SDSSSCBlocking 溶液经过剪切的鲑鱼精 DNA探针仪器、耗材 沸水浴杂交炉实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂高严格性洗涤缓冲液（0.2XSSC，5 g/LSDS），预热到 68°C(可选，见第 9 步）低严格性洗涤缓冲液（2XSSC，5 g/LSDS)，预
利用PCR技术进行产前诊断的方法和途径
1.产前基因诊断胎儿标本的来源 由于PCR技术本身的特点,即可不短时间内将微量的DNA扩增数百万倍,因此它适 应于各种来源的DNA标本. (1)羊水穿刺,在如15周后可经母亲脆壁穿刺获羊水,其内含有大量的胎儿脱细 胞5-10ml羊水即可获得足够量的PCR分析DNA样品. (2)绒毛采样,在如早期(9
纯水技术——树脂进行离子交换反应的性能和再生问题
一、交换能力 氢型阳离子交换树脂在水中可解离出氢离子（H +），当遇到金属离子或其它阳离子，就发生互相交换作用，但交换后的树脂，就不再是氢型树脂了。例如，当水中的阳离子如钙离子、镁离子的浓度相当大时，磺酸型的阳离子交换树脂中的氢离子，可和钙、镁离子进行交换，而形成「钙型」或「镁型」的阳离子交换树脂，
纯水技术——树脂进行离子交换反应的性能和再生问题
一、交换能力 氢型阳离子交换树脂在水中可解离出氢离子（H +），当遇到金属离子或其它阳离子，就发生互相交换作用，但交换后的树脂，就不再是氢型树脂了。例如，当水中的阳离子如钙离子、镁离子的浓度相当大时，磺酸型的阳离子交换树脂中的氢离子，可和钙、镁离子进行交换，而形成「钙型」或「镁型」的阳离子交换树脂，
纯水技术——树脂进行离子交换反应的性能和再生问题
一、交换能力 氢型阳离子交换树脂在水中可解离出氢离子（H +），当遇到金属离子或其它阳离子，就发生互相交换作用，但交换后的树脂，就不再是氢型树脂了。例如，当水中的阳离子如钙离子、镁离子的浓度相当大时，磺酸型的阳离子交换树脂中的氢离子，可和钙、镁离子进行交换，而形成「钙型」或「镁型」的阳离子交换树脂，
随机引物法（利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记）
实验方法原理 此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983，1984)。 实验材料
如何利用微孔读板机进行微量DNA和蛋白的高通量检测？
介绍在遗传学和分子生物学中，对核酸和蛋白进行定量是许多复杂实验必要的上游检测。虽然已有多种检测方法，但是最常用的仍然是紫外分光光度法。紫外分光光度法的原理是利用分子在固定波长范围吸收光和散射光，在朗伯比尔定律(方程式1)的基础上计算待测物质的浓度。这种方法还需要提前知道样品的摩尔消光系数和通路长度。
质谱仪碎裂方式和质谱碎裂方式有什么区别
表述不太明白，我猜你想问的是源内裂解还是质谱内裂解，源内裂解是施加足够大的能量，是母离子在进入质谱之前就形成碎片，EI,CI都是这样的方式，质谱内裂解就是在质谱内，选择母离子，一般使用高能气体将其撞碎，常见的就是线性离子阱质谱。
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DNA重组技术(Recombinant－DNA)实验原理、用品和步骤（二）
【实验步骤】 1．PCR产物纯化 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，应用凝胶回收试剂盒回收纯化目的DNA片段。 2．目的DNA片段连接至T/A克隆载体 即重组DNA分子的构建 反应体系及条件如下： 3．转化 3.1 将感受态细胞置冰中融解。 3.2 将60μl感受态细胞移至无菌
DNA重组技术(Recombinant－DNA)实验原理、用品和步骤（一）
【实验原理】1．DNA重组技术重组DNA(Recombinant DNA)技术是遗传工程的核心技术，也是人类在基因和DNA分子水平进行操作的技术。它包括以下几个步骤： 1）重组DNA分子的构建：即将目的基因（DNA或cDNA片段）与载体DNA重组，应用TA克隆方法,将PCR扩增产物快速克隆至质粒
利用寡核苷酸延伸法进行纯化DNA片段的放射性标记
随机引物法：利用寡核苷酸延伸法进行纯化DNA片段的放射性标记1. 在一个0.5ml的微量离心管中加入溶于30μl水的模板DNA(25ng)及1μl随机脱氧核苷酸引物（约125ng）。盖紧微量离心管，置于沸水浴中2min。2. 将微量离心管移至冰上放置1min，4℃下离心10
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物 脱氧核苷三磷酸 RT RNA PCR 酶 AccuRT 缓冲液 UNG 琼脂糖 溴化乙锭
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
本实验介绍激活的热稳定 DNA 聚合酶进行反转录和 DNA 扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dy
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dye仪器、耗材 琼脂糖凝胶的电泳设备实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂琼脂糖二甲基亚砜（见注释 1)(DMSO)溴化乙锭
《自然》：利用DNA交换避免线粒体遗传疾病
(图片来源：Oregon National Primate Research) 据《自然》网站报道，线粒体DNA只会由母亲传给后代，因为精子中的线粒体并不向胚胎贡献DNA。线粒体DNA突变与许多疾病存在关联，比如Ⅱ型糖尿病、线粒体肌病以及Leigh综合症(常见于婴儿的神经退化性疾病