激活的热稳定DNA聚合酶进行反转录和DNA扩增实验
试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dye仪器、耗材 琼脂糖凝胶的电泳设备实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂琼脂糖二甲基亚砜（见注释 1)(DMSO)溴化乙锭乙酸镁（见注释 2)[(CH3COO)2 Mg]25 mmol/L(AppliedBiosystems4339582/4339585)去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dye(见注释 1)(分子探针）2. 酶和酶缓冲液5XAccuRT 缓冲液（见注释 2)(Applied Biosystems 4339582/4339585)Gene Amp Accu RT RNA PCR 酶（见注释 2):3.75U/ul(Applied Biosystems 4339585)AmpErase 尿嘧啶-N-糖基酶（UNG):1U/ul(A......阅读全文
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物 脱氧核苷三磷酸 RT RNA PCR 酶 AccuRT 缓冲液 UNG 琼脂糖 溴化乙锭
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
本实验介绍激活的热稳定 DNA 聚合酶进行反转录和 DNA 扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dy
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dye仪器、耗材 琼脂糖凝胶的电泳设备实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂琼脂糖二甲基亚砜（见注释 1)(DMSO)溴化乙锭
PCR扩增DNA（PCR－Amplify－DNA）实验原理、材料和操作步骤
【实验原理】聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是一种体外 DNA扩增技术，1985年由Mullis等人创立。该技术能在几小时的实验操作中，将人为选定的一段DNA扩增几百万倍，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等优点，目前已成为分子生物学及基因工程中极为
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶缓冲液PCR 反应缓冲液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相当产品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 样品（即方案 2 第 16 步中的各消减样品
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶缓冲液PCR 反应缓冲液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相当产品）3. 核酸和寡核苷
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
在本方案所描述的反应中，差异 DNA 被选择性地扩增。每个实验至少应该有 4 个反应：①已消减的检测 DNA;②未消减的检测者对照（1-c);③反向消减的检测 DNA;④反向未消减的对照（2-c)。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水ddNTPdNTP甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶Taq 酶稀释缓冲液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 标记的寡核苷酸引物仪器、耗材 微量离心管（0.5 ml) 或
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 ddNTP dNTP 甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀释缓冲液
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
热稳定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反应中应用外，还可用来替代测序酶或 Klenow 片段进行双脱氧链终止法测序。它在高温下（70°C) 进行等温链终止反应的能力可减少测序反应中由于模板 DNA 上引物假结合位点与引物退火错配产生的问题，它还可用于富含二级结构模板的测序。本实验源于分子克隆实验指南
模板－DNA－的准备、实验的组织和－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 PCR 缓冲液ddH20基因组 DNAdNTP寡核苷酸引物仪器、耗材 离心机和转子丙烯酸防护板过滤阻挡吸头多道移液器PCR 仪托盘 固定器装置底座管盖小管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 缓冲液 (GeneAmpPCR 缓冲液
模板－DNA－的准备、实验的组织和－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 PCR 缓冲液 ddH20 基因组 DNA dNTP 寡核苷酸引物 仪器、耗材
模板－DNA－的准备、实验的组织和－PCR－扩增实验
可以用各种方法分离基因组 DNA, 主要决定于初始材料的种类（血液还是组织）和数量。所有制备的 DNA 都应该储存于 pH8.0 的 TE 缓冲液中并装在灭菌的 Eppendorf 管内。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒PCR 缓冲液ddH20基因组 DNA
热稳定DNA连接酶的简介
热稳定的DNA连接酶（thermostableDNAligase），是从嗜热高温放线菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分离纯化的，一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种核酸酶。在85℃高温下都具有连接酶的活性，而且在重复多次升温到94℃之后也仍
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。实验材料样品试剂、试剂盒双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
实验材料 样品试剂、试剂盒 双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪器、耗材 加湿盒热循环仪实验步骤 1. 将载有固定样品的载玻片置105℃加热块上5~120 s。 2. 载玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室温温育过夜，以灭活内源性过氧化物酶活性，然后以
库－DNA－的大规模扩增实验
实验方法原理 非常长且复杂的库经常需要若干毫升规模的 PCR 扩增。大规模 PCR 与常规 PCR的不同之处在于它一般在水浴中进行，而且需要使用 15 ml、17 mm×120 mm 的螺纹口盖子的热稳定管子（Sarstedt） 来容纳更大的体积。高至 2.5 L 体积的扩增反应都曾用这
库－DNA－的大规模扩增实验
实验方法原理非常长且复杂的库经常需要若干毫升规模的 PCR 扩增。大规模 PCR 与常规 PCR的不同之处在于它一般在水浴中进行，而且需要使用 15 ml、17 mm×120 mm 的螺纹口盖子的热稳定管子（Sarstedt） 来容纳更大的体积。高至 2.5 L 体积的扩增反应都曾用这种方法做过。中
库－DNA－的大规模扩增实验
实验方法原理 非常长且复杂的库经常需要若干毫升规模的 PCR 扩增。大规模 PCR 与常规 PCR的不同之处在于它一般在水浴中进行，而且需要使用 15 ml、17 mm×120 mm 的螺纹口盖子的热稳定管子（Sarstedt） 来容
聚合酶链式反应体外扩增DNA：PCR
聚合酶链式反应体外扩增DNA1. 按以下次序，将各成分加在0.5 ml灭菌离心管、扩增管或灭菌滴定板的孔内混合：10×扩增缓冲液 5μl20 mmol/L 4种dNTP混合液（pH 8.0） 1μl20 μmol/
聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段
一、实验目的1．学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法。2．理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性。3．了解引物设计的一般要求。二、实验原理多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR )：原理类似于DNA的变性和复制过程，即在高温（93-95℃）下，待扩增的
DNA聚合酶的用途和缺陷
用途聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物，3’末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基，而这个碱基几乎总是A，因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性，故可用T载体克隆。缺点无3’→5’阅读校正功能，在PCR扩增过程可引起错配，30次循环
T4－DNA聚合酶实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材 水浴锅实验步骤 一、50 μl 反应体积：（1）50 mmol/l Tris·Cl，pH8.0（2）5 mmol/l MgCl2（3）5mmol/l DTT（4）100 μmol/l 4dNTP混合液（5
T4－DNA聚合酶实验
T4 DNA聚合酶 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
T4－DNA聚合酶实验
T4 DNA 聚合酶具依赖人为模板的聚合酶活性，同时具有对单链、双链DNA的3’到5’端的外切酶活性，缺少5’到3’端的外切酶活性。实验材料DNA试剂、试剂盒Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材水浴锅实验步骤一、50 μl 反应体积：（1）50 mmol/l Tris·Cl，p
DNA聚合酶及DNA连接酶的功能和区别
DNA聚合酶，以已有的核酸序列作为模板，将4种脱氧核苷酸（A、T、G、C）按照模板的碱基排列顺序，以“碱基互补原则”依次连接，聚合成为一条新的DNA链。 DNA连接酶，是将DNA片段上的缺刻连接起来的酶。 一、DNA聚合酶 （一）DNA聚合酶I DNA聚合酶I（DNA pol
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验 实验材料 指数生长的哺乳动物细胞
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 DMSO(30%) 含血清培养基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸钠要转染的 DNA仪器、耗材 最低基础培养基组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。DMSO(30%)/含血清培养基第 3
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
下面讲述的 Polybrene 与 DMSO 转染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改进。利用此方法可以有效地将质粒 DNA 转染中国仓鼠卵巢细胞与角化细胞，产生的转化体比磷酸钙-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 时两种方法的转染效率无明显差别。本实验来源于分子克
PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤
一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用，掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域，它不仅可用于基因分离克隆和核